3种流感病毒检测方法的比较

目的对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果。结果实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%。3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率最高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率最低。结论实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测。     

荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的血凝抑制法进行比较。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法只有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒，以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应，与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较，灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

三种方法检测儿童肺炎支原体的比较分析

目的 探讨合理的早期诊断儿童肺炎支原体肺炎的方法.方法 对312例疑似肺炎支原体感染的患儿,留取咽拭子和血清,分别进行荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法检验,对比分析3种方法 的阳性率.结果 荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法的阳性率分别为25.00%、26.68%和16.67%,PCR法与快速培养法的阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);PCR法、快速培养法阳性率较血清抗体法高(P＜0.05).结论 PCR法与快速培养法均能有效的检测肺炎支原体,快速培养法能满足临床需求而且成本较低,较适合基层医院应用.     

三种方法检测沙门氏菌的比较研究

目的探讨建立快速、准确的沙门氏茵检测方法。方法采用常规方法、Vitek免疫诊断分析系统（VI-DAS）和荧光RT—PCR对沙门氏茵进行检测，并对其灵敏性和特异性进行比较。结果荧光RT—PCR的灵敏度最高。VIDAS及荧光RT—PCR检测沙门氏茵的特异性均达100％。结论VIDAS及荧光RT—PCR均能对沙门氏茵进行快速检测，在应对突发公共卫生事件中将能发挥重要作用。     

实时荧光PCR检测B型流感病毒方法的建立及病毒培养法验证

目的建立B型流感病毒实时荧光PCR检测(FQ-PCR)法,并与常规病毒培养法比较,判断二者结果的相关性,确定两种检测方法各自更适合的应用领域。方法建立FQ-PCR法并对76株经Quidel胶体金试纸条鉴定型别的流感病毒分离培养株进行检测,比较其敏感性和特异性。21～223梯度稀释的B型流感病毒分别用FQ-PCR法和病毒培养法进行检测,记录FQ-PCR的Ct值及培养物的血凝效价,并对FQ-PCR阳性但血凝无效价的梯度进行盲传,再次检测HA效价,比较二法的灵敏度及相关性。对临床采集的881份咽拭子标本做FQ-PCR检测,同时进行病毒培养并盲传、血凝试验及Quidel胶体金试纸条分型,综合比较两种检测方法之间的差异。结果在76株已知流感病毒标本中,FQ-PCR方法检出B型16份,与Quidel胶体金分型结果相符。FQ-PCR方法的灵敏度约高出常规培养法的25～26倍。FQ-PCR法对临床咽拭子的检测灵敏度高,无非特异性反应。结论流感病毒FQ-PCR法具有与组织培养法一致的特异性,前者操作简便快捷,灵敏度更高,在流感病毒临床快速检测和鉴定中具有更广阔的应用前景。     

3种分离流感病毒方法的比较分析

目的：为了比较流感病毒３种分离方法的敏感性及确定流感优势病毒株,１９９６年５月－９月,对江西南昌地区流感病毒进行了分离和鉴定研究。方法;采用细胞接种培养法,鸡胚羊膜腔接种培养法,鸡胚尿囊腔接种培养法。结果;细胞接种法分离的流感病毒侏１４株,鸡胚羊膜腔法得１２株,鸡胚尿囊腔法得２株,共２８株,其中甲,型１８株,甲３型４株,乙型６株。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测流感病毒H1、H3亚型的研究

目的 利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测流感病毒H1、H3亚型的方法.方法 根据H1、H3亚型流感病毒HA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立优化反应体系后,将荧光定量RT-PCR的产物采用10倍稀释法,即107～100 copies/μl,再次用荧光定量PCR方法检验建立体系的灵敏度和重复性,并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性.结果 H1和H3亚型流感病毒的检测灵敏度为102 copies/μl,扩增效率分别为101.35％和113.28％,标准曲线相关系数大于99％,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增.结论 本研究建立的双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地检测H1、H3亚型流感病毒.     

泰州地区流感病毒病原学检测分析

目的研究泰州地区近期流感病毒的流行情况，为制定防治决策提供实验室依据。方法在流感监测点和爆发点采集流感样病例鼻咽拭子，用狗肾传代细胞培养技术对采集标本进行病毒分离培养，用“O”型人血红细胞检测培养物的血凝活性，血凝试验阳性且滴度大于1：8的毒株送江苏省疾病预防控制中心确认和分型。结果从泰州145份流感样病例鼻咽拭子标本中成功分离出21株流感病毒，分离率为14．5％。经江苏省疾控中心鉴定H1N1型9株，B型12株。结论泰州市流感流行毒株型别与江苏省内其他监测点相符；病毒分离培养是流感实验室监测中敏感且准确的方法之一。     

3种分离流感病毒方法的比较分析

目的：为了比较流感病毒3种分离方法的敏感性及确定流感优势病毒株,1996年5月～9月,对江西南昌地区流感病毒进行了分离和鉴定研究。方法：采用细胞接种培养法、鸡胚羊膜腔接种培养法、鸡胚尿囊腔接种培养法。结果：细胞接种法分离的流感病毒株14株、鸡胚羊膜腔法得12株、鸡胚尿囊腔法得2株,共28株,其中甲1型18株、甲3型4株、乙型6株。结论：流感病毒分离中,细胞接种法与鸡胚羊膜腔接种法同样敏感。鸡胚分离培养中,应高度重视羊膜腔接种法。1996年南昌地区的优势而行珠是甲1型。     

实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的应用研究

目的应用实时荧光RT-PCR快速检测2009～2012年河池市流感病毒核酸,为流感的预防控制提供科学依据。方法采集河池市哨点医院的流感样病例和暴发疫点现患病例的咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法进行流感病毒核酸检测分型。结果以实时荧光RT-PCR法检测2 090份标本,流感病毒核酸阳性801份,总阳性率为38.28%。其中甲型H1N1流感468份,B型126份,季节性流感H1亚型14份,季节性流感H3亚型109份。结论实时荧光RT-PCR法检测流感病毒具快速、操作方便、特异性强、灵敏度高等优点,值得推广应用。     

解脲支原体3种检测方法比较研究

目的:比较培养法、聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR(FQ-PCR)在解脲支原体检测中的诊断价值和治愈判定价值.方法:对240例疑诊非淋菌性尿道炎(NGU)者,取尿道或宫颈内分泌物,同时进行培养、PCR和FQ-PCR法检测,并对三种方法均阳性的78例患者作治疗后的随访检测.结果:以2种以上(包括2种)检测方法检测的阳性结果为真阳性,2种检测结果均为阴性则定为真阴性.培养法的敏感性为78.57%(88/112),特异性为100%(128/128);PCR的敏感性为96.43%(108/112),特异性为93.75%(120/128);FQ-PCR的敏感性为100%(112/112),特异性为100%(128/128).78例确诊患者经有效治疗后1周、2周、3周随访检测显示:培养法阴转快,1周的阴转率即为100%(78/78);PCR和FQ-PCR阴转均慢,2周后的阴转率分别为69.23%(54/78)和74.36%(58/78).结论:培养法的特异性高,但敏感性低,必然产生假阴性;PCR敏感性高,但特异性稍差,易产生假阳性;FQ-PCR特异性和敏感性均好,适宜于推广运用.但在治愈判定中,培养法的价值更大,PCR和FQ-PCR的作用有限.     

不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果.方法 80份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较.结果 RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%.RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法,菌培养法检出率高于染色法.结论 荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测,值得推广应用.     

三种心肌肌钙蛋白的检测方法比较及其应用研究

目的:分析比较三种心肌肌钙蛋白的检测方法,以便在临床应用中选择适合的检测方法。方法:用抗体夹心法、夹心法和胶体金法测定60例肌超敏钙蛋白T和钙蛋白I,评价三种方法的分析性能、检测结果的差异和相关性,以便临床根据需要选择合适的方法测定肌钙蛋白。结果:三种检测方法测定定量结果中,胶体金、抗体夹心法和夹心法检测定性结果三者之间差异无统计学意义(P>0.05)。在肌钙蛋白I检测结果中,胶体金法和抗体夹心法比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在分析性能上,胶体金法测定优于抗体夹心法和夹心法,且与抗体夹心法有较好的相关性,适用于急诊及床旁检测。     

三种检测方法对结核病诊断价值的比较研究

目的:比较涂片法、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法、血清学方法检测血清结核抗体,对结核病临床诊断的应用价值。方法:用涂片法和FQ-PCR法对1714份呼吸道和体液标本同步检测,同时检测1714份血清标本的结核抗体。结果:1714份送检标本中,总阳性率涂片法为16.3%,FQ-PCR法为31.6%,血清结核抗体为43.3%;三种方法的灵敏度、特异度分别为:涂片法34.4%和100%,FQ-PCR法66.4%和100%,血清结核抗体80.7%和90.5%。结论:FQ-PCR法对结核病尤其是肺外结核的诊断具有较高应用价值;血清学方法检测血清结核抗体可作为菌阴、儿童、无痰患者及肺外结核诊断的一项重要参考指标;涂片法直观、简便、价廉,仍将是结核病实验诊断的重要手段。     

三种方法检测轮状病毒感染的比较研究

目的比较荧光PCR、ELISA、胶体金法对儿童轮状病毒感染的检测效果,为合理选择实验室检测方法提供依据。方法采集广州市儿童医院门诊及住院腹泻患儿粪便标本90份,分别采用荧光PCR、ELISA、胶体金3种方法诊断轮状病毒感染,检测结果应用SPSSl7．0软件包进行分析。结果ELISA与荧光PCR法检测轮状病毒感染差异无统计学意义（P〉0．05）,两种方法具有较好的吻合度（Kappa=0．888,P〈0．05）;胶体金法与荧光PCR法检测轮状病毒感染差异无统计学意义（P〉0．05）,两种方法检测吻合度一般（Kappa=0．526,P〈0．05）;以荧光PCR检测为标准,ELISA法检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、总符合率分别为100％、88．1％、90．6％、100％、90．0％,胶体金法检测分别为100％、66．7％、74．6％、80．0％、76．6％。结论ELISA法、胶体金法均与荧光PCR法诊断结果较一致,ELISA法诊断效能优于胶体金法,胶体金法敏感、快速,单独标本可随时检测,适合急诊、基层卫生机构。     

一种针对蓝舌病毒两个不同基因片段的荧光定量PCR检测技术

目的:建立一种高灵敏度、高特异性的蓝舌病毒RNA荧光定量RT-PCR检测技术,能够检测不同血清型蓝舌病毒(BTV)。方法:应用改良的BTV双链RNA变性方法,针对BTV基因组片段1和5的相对保守序列设计2对特异性引物,建立了BTV荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法进行灵敏度、特异性、重复性评价。结果:该方法能检测11种不同血清型BTV,其灵敏度可达到10copies/μl;使用所设计引物的荧光定量PCR能特异地扩增BTV,其Ct值差异较小,并与阴性对照EHDV-5无交叉反应;重复检测CV值小于5%。结论:检测方法具有灵敏度高、特异性强等优点,适用于BTV的快速检测和诊断。     

3种核酸提取方法检测甲型H1N1流感病毒的比较

目的选择常见的3种核酸提取方法,比较其对低拷贝数甲型H1N1流感病毒核酸检测的敏感性差异,为实验室应用和结果的评价提供依据。方法对已确定阳性的甲型H1N1流感病毒标本,作10^-1～10^-4系列稀释,选用Promega公司全自动核酸提取仪及配套试剂盒、QIAGEN公司Rneasy Mini Kit和国产H公司提取试剂盒3种核酸提取方法提取上述标本核酸模板,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（荧光RT—PCR）对其进行评价。结果在对不同拷贝数流感病毒的检测中,3种核酸提取方法以Promega公司全自动核酸提取仪提取效率最高,以此提取效率作为100％,则QIAGEN Rneasy Mini Kit和国产H公司提取试剂盒的平均提取效率依次为83．27％、55．70％。经方差分析,3种方法之间存在显著性差异（P〈0．05）。结论各试剂之间提取核酸的效率存在显著差异,建议根据实际情况采用合适的核酸提取试剂和方法。     

RT—PCR法与血凝抑制法鉴定流感病毒的比较

目的比较逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)与血凝抑制法在流感病毒鉴定中的优劣，以期建立能快速、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法用常规细胞培养法增殖病毒后，分别用RT—PCR反应法和常规血凝抑制法进行流感病毒鉴定。结果在13份发生细胞病理变化的标本中RT—PCR阳性标本为9份，其中甲型7份(6份甲3亚型、1份甲1亚型)，乙型2份；而用血凝抑制法鉴定阳性标本仅6份。结论RT—PCR法快速、特异、灵敏，在流感病毒鉴定中具有较大的应用价值。     

FQ-PCR两种定量检测乙型肝炎病毒DNA方法分析比较

目的:观察荧光定量聚合酶链反应(FQ- PCR)两种定量检测乙型肝炎病毒DNA方法的重复性、准确性。方法:采用终点法与实时荧光分析法分别定量检测2 4份阳性标本,其中6份为经10倍稀释的阳性标本,连续3d测定,另18份为弱阳性临床标本,9份阴性标本,共33份。两种方法对同一扩增管中反应体系的荧光值进行测定,终点法只检测扩增管扩增前后的荧光值,实时荧光分析法则检测扩增管每一次循环的荧光值,然后分别由相应的软件自动计算结果,再对结果进行比较分析。结果:终点法的批内变异系数较实时荧光分析法稍大,在中、低浓度区两种方法测定值基本在同一指数水平,在高浓度区前者低于后者2个对数倍,在较低浓度区则不及后者敏感。结论:实时荧光分析法较终点法敏感、结果的重复性更好,检测范围宽,更能反映体内病原体的真实浓度