他莫昔芬对转染ERβ1基因的MCF-7细胞生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ1的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用脂质体转染方法将ERβ1真核表达载体pcDNA3.1-EGFPERβ1导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用Western blot方法检测转染细胞中ERβ1的蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7为对照,分别在雌激素和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ1基因的MCF-7细胞系中,Western blot检测证实ERβ1的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子的情况下,外源基因ERβ1在MCF-7细胞系中的表达能抑制细胞生长。与亲本细胞MCF-7细胞相比,转染ERβ1的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对他莫昔芬的敏感性无明显变化。结论外源性ERβ1基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对他莫昔芬的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

雌激素受体β1上调p21基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的将雌激素受体(ER)β1真核表达质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对p21基因表达和细胞增殖能力的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;分别用实时聚合酶连锁反应(RT-PCR)、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、p21mRNA和蛋白表达的变化;细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。统计分析采用t检验和单因素方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、p21mRNA和p21蛋白水平明显增强(P0.010),细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率从1.4%升至6.14%(t=-7.960,P=0.001)。结论 ERβ1可以通过上调p21基因抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。     

雌激素受体阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义

目的:探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义和可能的作用机制.方法:采用免疫组织化学法检测于2010年1月至6月在河北医科大学第四医院乳腺科住院的86例ER阳性患者乳腺癌组织中Efp和Hk3的蛋白表达,并分析两者表达的相关性及与临床病理指标的关系.采用qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中ER、Efp mRNA的表达情况,采用RT-PCR及Western blotting法检测雌激素刺激后ER阳性乳腺癌细胞MCF-7中Efp、Pkk3基因的表达变化,采用Western blotting法检测雌激素及蛋白酶抑制剂MG132处理后MCF-7细胞中Efp、Plk3的表达变化.结果:86例ER阳性的乳腺癌组织中,55例Efp表达阳性(64.0％),28例Plk3表达阳性(32.6％).Efp表达阳性组织中Plk3表达阳性为23.6％,Efp表达阴性组织中Plk3表达阳性为48.4％,Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关(P＜0.05),Efp蛋白表达与乳腺患者的淋巴结转移状况呈明显正相关(P＜0.05),Plk3蛋白表达与乳腺癌患者的淋巴结转移状况呈明显负相关(P＜0.05).MCF-7细胞ER mRNA高表达,而MDA-MB-231细胞的ER mRNA低表达.MDA-MB-231细胞经雌激素刺激后,Efp mRNA的表达未见明显改变.MCF-7经雌激素刺激后Efp mRNA及蛋白的表达显著增加(P＜0.05),而Hk3 mRNA的表达未见明显改变,未检测到Plk3蛋白的表达.MG132处理后MCF-7细胞中Plk3的蛋白表达明显上调,MCF-7经雌激素刺激后,再用MG132处理,Efp的蛋白表达显著增加(P＜0.05),而Plk3蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:ER阳性乳腺癌中Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关,Efp可促进Plk3的蛋白降解,并可能参与了ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的耐药过程.     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究

目的将雌激素受体ERβ1真核表达质粒转染到人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对E-cadherin、Vimentin等基因表达和细胞上皮间质转化的影响,探讨ERβ1在乳腺癌发生发展中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用实时荧光定量PCR、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达的变化;并用细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。所有数据以±s表示,多个样本均数间的比较用单因素方差分析,组间比较采用SNK法。细胞生长曲线变化采用重复测量方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、E-cadherin mRNA和蛋白水平明显增强（P〈0.010）,Vimentin mRNA水平明显减少（P〈0.010）,细胞增殖能力明显减弱。结论 ERβ1可能参与抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的上皮间质转化过程。     

ER阳性乳腺癌中Efp和Plk3蛋白表达相关性探讨

背景与目的：长期以来,雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性乳腺癌患者对内分泌治疗耐药是临床上棘手的难题。目前研究表明,雌激素效应环指蛋白(estrogen-responsive finger protein,Efp)和polo样激酶3(polo-like kinase 3,Plk3)的表达与乳腺癌发展具有密切关系。该研究旨在探讨ER阳性乳腺癌中Efp和Plk3蛋白表达相关性,了解Efp和Plk3表达变化在耐药中的作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测74例ER阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3蛋白表达情况,结合临床资料进行分析。并采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及蛋白[质]印迹法(Western blot)检测ER阳性乳腺癌MCF-7细胞中Efp和Plk3的基因和蛋白表达变化。结果：74例ER阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3蛋白表达与患者的临床病理特征未见任何关系(P>0.05),其中有51例(68.9%)患者Efp表达阳性和23例(31.1%)患者Plk3表达阳性,χ2检验分析结果显示,ER阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3具有显著的负相关关系(χ2=8.837,P<0.05)。RTFQ-PCR检测结果显示,MCF-7细胞经雌激素刺激后Efp mRNA的表达显著增加,而Plk3 mRNA的表达无明显变化。Western blot检测结果显示,MCF-7细胞经雌激素和MG132刺激后,Efp的蛋白表达较MG132组显著增加,而Plk3蛋白表达明显下降。结论：在ER阳性乳腺癌患者中Efp和Plk3的蛋白表达呈负相关,Efp高表达可促进Plk3的蛋白降解,对内分泌耐药过程的形成可能产生一定影响。     

肿瘤抗原MAGE-A11促进ER介导的乳腺癌细胞MCF-7的增殖

目的：探讨黑素瘤抗原（melanoma antigen gene, MAGE）-A11对雌激素受体（estrogen receptor, ER）介导的乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法： 利用RT-PCR及Western blotting筛选出ER表达阳性的人乳腺癌MCF-7细胞作为模式细胞,采用基因转染、RT-PCR和Western blotting检测MAGE-A11对17β-雌二醇（17β-E）诱导的ER下游靶基因Efp表达的影响,采用免疫共沉淀法检测MCF-7细胞中MAGE-A11和ER蛋白的相互作用,采用MTT法和克隆形成实验分别检测MAGE-A11及17β-E处理对MCF-7细胞生存率和细胞克隆形成数的影响。结果： ER阳性MCF-7细胞经17β-E处理24 h后,下游靶基因Efp的mRNA（2.97±0.16 vs 1.71±0.09,P<0.05）和蛋白表达水平显著升高（2.65±0.12 vs 0.92±0.06, P<0.05）;转染MAGE-A11的MCF-7细胞经17β-E 24 h处理后,其Efp的mRNA（4.01±0.19 vs 2.97±0.16, P<0.05）及蛋白表达（3.52±015 vs 2.65±0.12, P<0.05）更显著增加。免疫共沉淀结果显示,外源性MAGE-A11与ER之间存在相互作用。MCF-7细胞经17β-E处理后细胞增殖率显著增加\[（152±6.7）% vs （108±4.8%）, P<0.05\],转染MAGE-A11的MCF-7细胞经17β-E处理后细胞增殖率更显著增加\[（181±8.6）% vs （152±6.7）%, P<0.05\];17β-E处理后MCF-7细胞克隆形成数显著增多\[（77±5) vs (18±2)个,P<0.05\],转染MAGE-A11的MCF-7细胞经17β-E处理后细胞的克隆形成数更显著增加\[（125±6）vs （77±5）个, P<0.05）。结论： 在ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞中,MAGE-A11可通过与ER的相互作用增强ER介导的Efp的表达,从而促进细胞增殖,MAGE-A11可能成为ER阳性乳腺癌内分泌治疗耐药的靶基因。     

稳定转染ERβ基因对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用lipofectamine 2000将ERβ真核表达载体pCDNA3,ERβ导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用含雌激素应答元件（ERE）的荧光素酶报告基因及Western blot方法,检测转染细胞中ERβ的转录活性和蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7及转染空载体质粒pCDNA3的MCF-7细胞为对照,在雌激素E2和雌激素受体拮抗剂4-OHT作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ基因的MCF3细胞系中,ERβ的转录激活活性明显升高;Western blot检测证实,ERβ的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子情况下,外源基因ERβ在MCF-7细胞系中的表达对细胞的形态及生长速度无明显影响。与亲本细胞MCF-7及转染空载体质粒的MCF-7细胞相比,稳定转染ERβ的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对4-OHT处理的敏感性无明显减少。结论外源性ERβ基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对4-OHT的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

雌激素受体β及其剪切变异体与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系

目的探讨雌激素受体（ER）亚型（ERβ）及其剪切变异体（ERβcx）的表达与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系。方法 （1）对乳腺癌他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬耐药MCF-7细胞进行培养,利用去甲基化物5-氮杂胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine,5-AZA-CdR）去甲基化的作用,对MCF-7细胞进行药物处理获得MCF-75-AZA-CdR细胞,采用Western blot方法检测3组细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达。（2）取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.5×103细胞/孔接种于96孔细胞培养板板中,实验组分为他莫细芬处理的MCF-7细胞（MCF-7＋TAM组）和MCF-75-AZA-CdR细胞（MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组）,对照组为MCF-7细胞,采用MTT比色法,观察3组细胞的增殖情况。统计学分析采用单因素方差分析和重复测量方差分析。结果 （1）ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高于他莫西芬耐药的MCF-7细胞,两组细胞间差异有显著的统计学意义（P=0.000）;ERβcx蛋白表达在两组之间差异无统计学意义（P=0.366）。MCF-75-AZA-CdR细胞ERβ和ERβcx蛋白表达均高于他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬敏耐药MCF-7细胞（P均=0.000）。（2）与对照组MCF-7细胞相比,他莫西芬明显降低了MCF-7＋TAM组和MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组的细胞增值速度并抑制细胞生长;且他莫西芬抑制细胞增殖作用MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组强于MCF-7＋TAM组（P=0.000）。结论 ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高。MCF-75-AZA-CdR细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达均高。他莫西芬抑制细胞增殖作用在他莫西芬处理的MCF-75-AZA-CdR细胞中强     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的观察雌激素受体β1（ERβ1）被阻断后对Bax和Bcl-2表达的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法,将针对人ERβl基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231。分别用Real time-PCR、Western Blot检测ERβ1被干扰前后细胞中ERβ1、Bcl-2、Bax等基因mRNA和蛋白表达水平的变化;通过细胞增殖曲线观察ERβ1基因被干扰后细胞增殖活性的变化;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析。结果RNA干扰技术阻断乳腺癌MDA—MB-231细胞ERβ1基因的表达后,ERβ1 mRNA和蛋白水平显著下降（P〈0．05）,生长曲线显示细胞增殖能力明显增强（P〈0．05）;pSilencer—ERβ1转染组细胞的Bax基因mRNA及蛋白水平显著下降（P〈0．01）,Bcl-2基因的表达未发生变化,Bcl-2／Bax比值明显上升;pSilencer-ERβ1转染组细胞凋亡率较未转染组明显减少（t=6．22,P=0．00）。结论ERβ1可通过调控细胞凋亡相关基因Bax而促进细胞的凋亡,是ERβ1抑制细胞增殖的原因之一。     

siRNA沉默DNMT1对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响

目的 靶向人DNMT1（DNA methyltransferase 1, DNMT1）构建RNA干扰载体,研究其对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法 靶向DNMT1基因设计三条短发夹状RNA(short hairpin RNA, shRNA) 的寡核苷酸片段,构建重组体pGCsi-DNMT1,转染至乳腺癌细胞株MCF-7,定量PCR 法检测DNMT1 mRNA表达水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT 法检测细胞生长情况;Annexin V/PI双染法观察细胞凋亡情况;定量PCR 法分析沉默DNMT1基因后对RASSF1A、p16、p21、p27及ERβ基因表达的影响。结果 在构建的靶向DNMT1的shRNA重组质粒pGCsi-DNMT1中,成功筛选到pGCsi-T3能显著下调DNMT1的表达。实时定量PCR检测结果证实重组质粒pGCsi-DNMT1对乳腺癌MCF-7细胞中DNMT1基因的转录有明显的抑制作用。MCF-7细胞转染后,pGCsi-DNMT1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖;大量细胞发生凋亡;细胞周期分析可见S期明显减少,而G₁/G₀期细胞显著增加;定量PCR检测到乳腺癌细胞中RASSF1A、p16、p21及ERβ基因mRNA表达水平明显升高,而p27基因表达水平未见明显变化。结论 重组质粒pGCsi DNMT1能特异有效地抑制MCF-7细胞内DNMT1的表达、 抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并可通过抑制DNMT1的活性来解除相关基因启动子区的高度甲基化状态,从而促进肿瘤相关基因的表达,提示DNMT1可作为乳腺癌基因治疗的新靶标。     

PIN1 反义核酸对乳腺癌MCF-7 细胞增殖及周期的影响

 目的 本研究利用PIN1反义核酸阻断乳腺癌MCF-7细胞中PIN1表达，观察其对增殖及周期的影响。方法 构建PIN1反义核酸真核表达质粒pPINlas，用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞，G418筛选稳定表达重组质粒的克隆，RT-PCR检测PIN1基因表达水平，Western blot检测PIN1蛋白的表达，MTT检测细胞增殖状况，流式细胞术检测细胞周期。结果 稳定表达PIN1反义核酸的MCF-7细胞内PIN1基因表达在mRNA水平和蛋白水平都显著降低；MTT实验显示MCF-7PINas细胞的增殖速度较MCF-7细胞明显减慢（P〈0．05），但FCM显示MCF-7PINas细胞和MCF-7细胞的周期分布差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 阻断PIN1可以显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性，提示PIN1可能成为乳腺癌基因治疗的新的靶点。     

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒的构建及在MCF-7乳腺癌细胞中的转染

目的构建pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒, 并进行鉴定。为进一步研究Smad3在抑制乳腺癌生长机制中起到的作用提供实验基础。方法 利用RT-PCR方法从MCF-7乳腺癌细胞中获得cDNA, 应用PCR方法扩增、提取 Smad3的基因片段, 酶切后与pEGFP-C3真核表达载体连接, 构建pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒, 进行测序、酶切鉴定, 表明质粒构建成功。将构建的质粒瞬时转染至MCF-7乳腺癌细胞中, 通过荧光倒置显微镜观察、RT-PCR技术及Westen blot技术鉴定转染是否成功。结果 本实验成功构建了pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒。结论 pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒瞬时转染到MCF-7细胞中, 可使Smad3在基因与蛋白水平的表达显著上调。     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究

目的 构建ERβ表达载体,探讨其在肿瘤细胞株中的表达及功能。方法 利用常规PCR技术扩增人全长ERβ编码序列,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中,得到重组质粒pCDNA3-ERβ。用Western blot和体外翻译方法检测ERβ的表达情况。将pCDNA3-ERβ分别转染SV4O病毒转化的胚胎肾细胞293T、乳腺癌细胞MDA-MB-435、MDA-MB-436、SKBR3和前列腺癌细胞PC-3,用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ在这些不同细胞中的功能。结果 经酶切鉴定,证实重组质粒pCDNA3-ERβ含有目的基因ERβ。Western blot检测表明,转染pCDNA3-ERβ的细胞表达了相对分子量为63000的ERβ蛋白。体外翻译进一步证实该表达载体翻译了ERβ蛋白。报告基因系统检测表明,ERβ在不同肿瘤细胞中的表达均激活了雌激素应答的ERE和C3报告基因的表达。结论pCDNA3-ERβ在肿瘤细胞中既可表达,又具有功能活性,为进一步研究ERβ在肿瘤细胞中的作用奠定了基础。     

雌激素受体亚型对乳腺癌MCF-7细胞生长及微环境中Th平衡的影响

目的:研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型对人乳腺癌细胞MCF-7的生长及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中ERα或ERβ的表达,获得ERα/ERβ不同表达状态的MCF-7细胞。应用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法分别检测MCF-7细胞的增殖、细胞周期和凋亡抑制基因的表达,ELISA法检测细胞上清中IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果:经RNA干扰后MCF-7细胞的ERα或ERβ蛋白表达水平分别下降了(77.7±3.3)%和(68.3±2.1)%。与对照组相比,ERα基因沉默后,MCF-7细胞生长减慢(P<0.05),受阻于G0～G1期,凋亡抑制基因XIAP的表达水平降低为对照组的(43.0±2.0)%,IFN-γ分泌水平增加至对照组的(1.89±0.34)倍;ERβ基因沉默促进MCF-7细胞的生长(P<0.05),S期细胞比例增加,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl、XIAP的表达水平分别升高至对照组的(1.28±0.21)、(1.61±0.32)和(1.65±0.29)倍,IFN-γ分泌水平降低为对照组的(28.0±4.0)%。结论:ER亚型的表达状态可影响MCF-7细胞的生长,并通过调节IFN-γ的自分泌水平诱导微环境发生Th偏移。     

HER2基因转染MCF-7细胞及生物学特性观察

目的:建立共表达HER2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)基因和ER(Estrogen Receptor)基因的细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-HER2,利用脂质体介导将其转染ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选阳性克隆.用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学等方法检测HER2基因在MCF-7细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法和肿瘤细胞侵袭实验,观察转染细胞的生物学活性.结果:在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有HER2基因的高表达,转染后细胞的增殖能力和侵袭能力明显增强.结论:构建含HER2基因的重组载体,导入乳腺癌MCF-7细胞后,获得生物学活性稳定的HER2基因和ER基因高表达的细胞模型,为进一步研究奠定了基础.     

NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的：探讨NO-ASA（一氧化氮阿斯匹林）对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制。方法：建立稳定传代的MCF-7细胞系。MTT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。应用Westernblot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响。结果：NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1（cyclinD1）和细胞总β-catenin的表达水平。结论：NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因—细胞周期蛋白D1表达降低。这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法。     

NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的:探讨NO-ASA(一氧化氮阿斯匹林)对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制.方法:建立稳定传代的MCF-7细胞系.MT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用.应用Western blot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响.结果:NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞总β-catenin的表达水平.结论:NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因一细胞周期蛋白D1表达降低.这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法.     

抑制雌激素调控的靶基因LRP 16表达能削弱ERα介导的转录激活活性

目的探讨抑制雌激素(E2)调控的靶基因LRP16表达对雌激素受体α(ERα)介导转录激活活性的影响.方法将针对LRP16合成的小干扰RNA,与ERα表达载体、雌激素反应性元件荧光素酶报道载体(pGL-3-S10或3×ERE-Luc)共转染乳腺癌细胞MCF-7,双荧光素酶检测方法测定pGL-3-S10或3×ERE-Luc报道子的相对荧光素酶活性;E2刺激培养已建立的稳定抑制LRP16表达的MCF-7细胞,Northern bl0t方法检测比较具有不同LRP16表达水平的MCF-7细胞中ERα下游靶基因对E2的反应性变化.结果抑制LRP16表达降低了ERα对其反应性报道子(pGL-3-S10和3×ERE-Luc)的激活活性;同时也降低了ERα下游靶基因对E2的反应性上调效应,其中包括E2F1、维甲酸受体α(RARα)、c-fos、cyclin D1和MTA3,但对cathepsin D的表达无影响.结论抑制ERα靶基因LRP16的表达可以下调ERα介导的转录激活活性,表明LRP16对ERα信号转导通路具有反馈增强效应,提示LRP16在ERα阳性的乳腺癌发生与进展中应有重要作用.