人硫氧还蛋白cDNA的克隆和表达

我们在本研究中克隆出hTrx成熟区cDNA序列并在原核中高效表达出hTrx蛋白,现将结果报道如下。一、材料和方法14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞、pBV2 2 0由西安华广生物工程公司馈赠。pGEM TEasy为Promega公司产品。AMV逆转录酶、Oligo(dT) 15等试剂均购自华美生物工程公司。收集铺满度为80 %的14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞2×10 7,异硫氢酸胍一步法提取RNA。根据Genbank提供的已知序列(J0 40 2 6) ,设计下列引物:上游引物5’CGGAATTCATGGT GAAGCAGATCGAGAGC 3’,5’端设有EcoRI酶切位点;下游引物:5’CGGGATCCGATTAGACTAAT…     

硫氧还蛋白对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的 观察经硬膜外注入硫氧还蛋白(Trx)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织中Nogo-A表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠56只,分为假手术组(A组,n=8)、损伤对照组(B组,n=24)和Trx治疗组(C组,n=24).B、c组用改良Allen's法以30 g/cm致伤大鼠T8脊髓制作损伤模型,同时在蛛网膜下腔置管,C组术后即刻和随后每天1次按0.75mg/kg从硬膜下导管推入硫氧还蛋白,B组在相同时问点给予等量生理盐水;A组打开椎板后蛛网膜下腔置管,不损伤脊髓,不给药.在术后3、7、14 d分别对其进行后肢运动功能BBB评分(n=8),评分完毕即处死动物,取受损节段脊髓组织行免疫组织化学观察脊髓组织中Nogo-A阳性细胞的表达,同时计数阳性细胞.结果 各时间点B组大鼠BBB评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7、14 d时C组评分显著高于B组(P<0.05或0.01).B组在术后7与14日Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.01);C组在伤后7、14 d的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,Trx能明显抑制Nogo-A的表达,可能促进轴突的再生.     

硫氧还蛋白1对胃癌细胞系BCG823生长的影响

目的探讨硫氧还蛋白1（thioredoxin-1,Trx1）对胃癌细胞系细胞周期及增殖速度的影响。方法对BCG823、AGS、MNK45、NUGC3、PHM82五种胃癌细胞系的质粒转染效率进行测定,选择出转染效率高的细胞系;并用实时PCR（RT-PCR）测定胃癌细胞系中Trx1的表达水平,选择出表达较低的细胞系。将所构建的Trx1真核重组表达载体pcDNA3.1myc-His-Trx1转染入上述实验筛选出的胃癌细胞系,使细胞中Trx1过表达,用流式细胞仪检测过表达Trx1的胃癌细胞进入S期的比例。结果 BCG823、AGS两种细胞系的转染效率高,满足实验需要。BCG823的Trx1表达较AGS低[BCG823细胞系的ΔCT（Trx-GAPDH）=1.43,AGS细胞系的ΔCT（Trx-GAPDH）=1.10,ΔCT值与表达量成反比],选择BCG823作为实验对象。转染pcDNA3.1myc-His-Trx1的细胞Trx1表达升高（与内参蛋白的比值为0.45±0.02和0.26±0.03,n=3,t=9.127,P=0.000）,进入S期的细胞比例升高（转染带有Trx1质粒的细胞进入S期的比例为28.54%,而转染了空载体者进入S期的比例为22.24%,χ2=104.759,P=0.000）。结论 Trx1表达水平上调可以促进胃癌细胞进入S期。     

硫氧还蛋白还原酶抑制剂抗结直肠癌的作用机制研究进展

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,也是全球第二大癌症相关死亡因素。近些年来,结直肠癌的发病率也在逐渐升高,对人们的生命安全造成严重的威胁。硫氧还蛋白还原酶（TrxR）主要分布在细胞内,是含硒同型二聚体酶的一种,在机体氧化还原稳定、细胞增殖及肿瘤转移中起到关键作用。TrxR的特有结合域是含硒C末端活性位点,其靶向抑制剂已成为了肿瘤治疗的研究重点。该文综述了TrxR抗结直肠癌的作用机制,以期为临床治疗结直肠癌提供参考。     

睾丸/精子特异的硫氧还蛋白Sptrx-1,2,3与男性生殖功能的关系

Sptrx-1,2,3是一组特异表达于睾丸/精子的硫氧还蛋白,在精子发生过程中,它们在结构和功能上发挥了重要作用。Sptrx-1,2,3的发生及其变异与男性生殖功能密切相关。以Sptrx-1,2,3为研究和治疗靶点,开拓了临床男性生殖研究的新领域。     

硫氧还蛋白-1：预防心脏相关活性氧损伤的潜在靶点

活性氧（reactive oxygen species,ROS）可导致细胞凋亡进而引发器质性疾病,损伤心脏功能,在多种心脏疾病的发生中起重要作用。虽然抗ROS疗法备受期待,但目前仍缺乏公认理想的方案以预防ROS损伤。作为重要的内源性抗氧化系统之一,硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）被证明具有出色的抗氧化活性。通过不同方法激动Trx-1活性,能还原关键生物分子,或清除ROS,或调节众多细胞生存相关信号通路,抵抗ROS损伤。本文就Trx-1在心脏抗氧化治疗中的研究进展作一综述,以探讨Trx-1作为抵抗ROS损伤靶点的潜力与可能性。     

硫氧还蛋白2在2-乙酰氨基芴加肝切除诱导的卵圆细胞中的表达及意义

目的 观察硫氧还蛋白2(Trx2)在2-乙酰氨基芴(2-AAF)加肝切除诱导的卵圆细胞增殖中的表达,并探讨其表达的意义.方法 Balb/c小鼠喂饲2-AAF加2/3肝切除方法诱导肝脏卵圆细胞的增殖.经门静脉灌注消化法和等密度离心法分离卵圆细胞,并在体外进行原代培养.免疫荧光和双标法对培养的细胞进行鉴定.免疫组化法检测卵圆细胞的增殖,免疫荧光法检测Trx2在卵圆细胞和肝实质细胞中的表达,TUNEL法检测卵圆细胞和肝实质细胞的凋亡.结果 喂饲2-AAF后引起肝脏损伤,与肝切除前相比,肝切除后肝脏损伤明显加重(P＜0.01),同时有明显的卵圆细胞增殖.卵圆细胞中Trx2的表达明显高于肝实质细胞,同时其凋亡率明显低于肝实质细胞(P＜0.01).结论 喂饲2-AAF加2/3肝切除可以引起严重的肝损伤,促进卵圆细胞增殖,卵圆细胞高表达Trx2可以抑制自身凋亡和损伤,在肝脏功能的恢复过程中起着非常重要的作用.     

皮肤扩张的组织形态学及相关细胞因子变化

皮肤软组织扩张术的扩张过程,主要为机械应力作用导致的皮肤软组织的一系列组织形态学,及其相关细胞因子的改变,这也为快速扩张提供了研究基础。本文对扩张皮肤的组织形态学及相关细胞因子变化进行综述。     

扩张皮肤的组织形态学及相关细胞因子变化

皮肤软组织扩张术的扩张过程,主要为机械应力作用导致皮肤软组织的一系列组织形态学及其相关细胞因子等的生物化学改变,这也为快速扩张提供了研究基础,我们就扩张皮肤的组织形态学及相关细胞因子变化进行综述。     

机械牵拉细胞方法与机械应力对培养细胞影响的研究进展

在机械应力的作用下 ,细胞的生长发生改变 ,细胞分裂增殖 ,这在医学领域中很常见 ,整形外科的皮肤软组织扩张术、牵张术 ,骨科的肢体牵引延长术以及颅颌面外科的颅颌骨牵引术等通过外力刺激因素获得“额外”组织的临床技术便是基于这一原理 ,同时此类现象亦见于一些病理变化之中 ,如肾小球高血压对系膜细胞的反复压力刺激而使之增生等。近年来 ,机械应力对组织细胞的作用机理已越来越受到有关学者的关注。尽管基于该原理的此类技术已广泛应用于临床 ,在该领域也开展了一些基础研究 ,并取得了初步的结果 ,但是 ,机械应力作用于组织促进细胞增…     

应用扩张的耳后瘢痕瓣行外耳再造术

目的 探讨应用扩张的耳后瘢痕瓣进行外耳再造术的可行性。方法 对24例应用扩张的耳后瘢痕瓣行移植软骨支架的传统外耳再造术。结果 2例再造耳上极因缝合时切口张力过大致软骨部分外露，其余病例全部成活。随访1年，效果满意。结论 在局部缺乏可资利用的正常皮肤时，以扩张的耳后瘢痕瓣行外耳再造是一种值得考虑的、效果可靠的手术方法。     

The Expanded “Flying-Wings” Scalp Flap for Aesthetic Hemiscalp Alopecia Reconstruction in Children

Background  For a large lesion of the scalp (e.g., up to 50% scalp loss), restoration of the scalp with a hair-bearing scalp flap to achieve a pleasing aesthetic outcome and hair growth matched to the direction of the lesion, especially for a hemiscalp defect in children, often becomes very difficult and challenging for plastic surgeons. Methods  Treatment was performed for 18 children with severe hemiscalp losses after burns. The technique was carried out by initially positioning a tissue expander in the subgaleal pocket of the scalp and serially inflating it with normal saline in 5- to 7-day intervals for about 3 months. Thereafter, a “flying-wings” expanded scalp flap was designed by combining advancement and rotation flap transplantation principles. This design was based on at least one nominated vascular system of the scalp used as the pedicle, with the wings often working to correct the distant part of the lesion in which the hair direction is greatly changed. After the lesion was excised, the expanded hair-bearing flap was advanced and rotated to the recipient site when the expander was removed. Results  For the 18 patients, the flap used for hemiscalp reconstruction could be transferred to repair the hemiscalp loss totally (for 17 patients) or mostly (for 1 patient) in a single-tissue expansion process without flap necrosis. The patient with a remaining lesion was treated completely with a secondary tissue expansion in the postauricular area. All the patients showed good aesthetic results, with the hair growth direction matching the recipient site well. Conclusions  The described technique strongly indicates that tissue expansion is a simple, safe, and efficient technique for large scalp restoration. The “flying-wings” design of the expanded scalp flap can properly distribute the expanded hair-bearing scalp in the recipient site.     

ANGPTL-1基因在老化鼠尾皮肤成纤维细胞中的表达及意义

目的体外研究鼠尾皮肤成纤维细胞(MTSF)发生老化时,ANGPTL-1中的表达及意义。方法分别收集不同年龄原代鼠尾皮肤成纤维细胞,并检测老化细胞的COL1、COL3及透明质酸合成量。用RT-PCR检测两组细胞中ANGPTL-1基因及胶原蛋白与透明质酸含量。结果 ANGPTL-1基因在青年组鼠尾皮肤成纤维细胞中的表达明显高于老年组(P<0.01);老年组成纤维细胞COL1、COL3及透明质酸合成量显著低于青年组成纤维细胞(P<0.01)。结论ANGPTL-1基因可能是延缓鼠尾皮肤成纤维细胞老化的重要基因之一,可应用于皮肤抗衰老的研究。     

血管组织工程种子细胞的建立及意义

目的：利用人Nanog基因转染血管组织工程的种子细胞（血管内皮细胞ECV304）,提高其增殖能力,以在较短时间内获得大量种子细胞,从而为克服血管组织工程种子细胞来源的匮乏及组织工程血管的快速构建提供新途径。方法：制备含有人Nanog基因的复制缺陷型重组腺相关病毒血清2型病毒颗粒rAAV2-hNanog,用rAAV2-hNanog转染ECV304细胞,然后采用RT-PCR检测hNanog基因在转染的ECV304细胞中的表达,再用MTT、免疫荧光及激光共聚焦技术检测hNanog基因对血管内皮细胞ECV304生长的影响。结果：（1）rAAV2-hNanog转染ECV304细胞后,RT-PCR检测表明hNanog基因能在血管内皮细胞ECV304中稳定表达;同时,血管内皮细胞在转染后的增殖能力也显著增强（P〈0.05）。光镜下观察发现,转染的血管内皮细胞的形态无明显改变。结论：转染hNanog基因后,血管内皮细胞的形态无显著变化,但其增殖能力明显增强。利用hNanog基因提高血管内皮细胞的增殖能力,能够克服血管组织工程种子细胞来源不足的瓶颈,为组织工程血管的快速构建及应用提供一种新的方法。     

体内构建组织工程腱鞘的初步研究

目的研究体内构建组织工程化滑膜腱鞘，及其在预防肌腱粘连方面的作用。方法取Leghorn鸡48只，随机分为3组。实验组（n=16），切除肌腱外周滑膜腱鞘，采用自身滑膜细胞-PGA复合物修复缺损；对照组1（n=16），切除肌腱外周滑膜腱鞘后，采用空白PGA支架修复缺损；对照组2（n=16），切除肌腱外周滑膜腱鞘后未修复缺损腱鞘。于术后2周、5周取材，采用大体观察、组织学检查和生物力学测试等方法，研究组织工程腱鞘构建情况，分析肌腱表面粘连情况。结果大体观察及HE染色可见实验组形成组织工程化腱鞘，肌腱与腱周组织间空隙明显，较对照组粘连形成较少。力学检测在0．1N的拉力下，实验组肌腱拉伸位移3．24±0．22mm，优于对照组1和对照组2（分别为2．49±0．19mm，2．28±0．23mm）。结论采用组织T程技术可以成功构建组织工程化滑膜腱鞘，并具有正常腱鞘结构，对于减轻肌腱粘连具有一定作用。     

组织工程气管体内构建的研究进展

气管替代物利用体内天然环境对细胞贴覆生长及支架性能改善,促进移植物血管化,诱导免疫耐受和提高术后生存率有指导意义。内外层壁覆有干细胞和气道上皮细胞的脱细胞气管,利用天然生物反应器于体内预培养促组织工程气管成熟的方法,以实现黏膜的再上皮化、软骨细胞形成和血管化,在此基础上进行原位移植,对于长段气管病损有良好的临床应用前景。现就组织工程气管体内构建的意义及研究现状予以综述。     

人脂肪来源细胞体内构建组织工程化脂肪的实验研究

目的探讨以组织工程技术，应用脂肪来源细胞（Adipose—derived cells，ADCs）体内构建脂肪组织的可行性。方法吸脂术获得人脂肪组织，一部分直接植入裸鼠体内；另一部分用酶消化法分离、培养ADCs，将第三代细胞接种于纤维凝胶（Fibrin glue）支架中，经成脂肪培养液诱导1周后，植入裸鼠体内，4周后取材，用称重法及油红、HE染色检测结果。实验分为直接注射脂肪组、单纯支架组、细胞-支架复合体脂肪诱导组、非诱导组。结果直接注射组在裸鼠皮下形成脂肪组织，但吸收量大；细胞-支架复合体诱导组有大量脂肪类组织形成，油红染色显示组织有脂滴形成；细胞-支架复合体非诱导组和单纯支架组均未发现脂肪组织形成。结论采用组织下程技术将吸脂术获得脂肪来源细胞接种纤维凝胶支架，体内构建脂肪组织，具有可行性。