氟伐他汀对糖基化终末产物诱导肾小管细胞转分化及ERK1/2信号通路的影响

目的观察氟伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及ERK1/2信号通路的影响。方法将肾小管上皮细胞(HKC)分为对照组、AGEs刺激组、AGEs加氟伐他汀组和AGEs加ERK1/2阻断剂PD98059组,采用免疫细胞化学检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot检测α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadher-in)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)及其磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和Col I蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调;AGEs刺激细胞15minp-ERK1/2表达明显增强,1h达到高峰。PD98059和氟伐他汀能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及ERK1/2的磷酸化;减少TGF-β1的含量;下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达;同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论氟伐他汀抑制AGEs诱导肾小管上皮细胞转分化和胶原I的合成可能是通过抑制ERK1/2信号通路活化实现的。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

晚期氧化蛋白产物对肾小管上皮细胞表型转分化影响的基础研究

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)参与肾间质纤维化发生、进展的可能机制。在细胞水平探索AOPP致慢性肾脏病肾小管间质纤维化可能的分子机制,探索慢性肾功能衰竭发病机制的新着眼点和治疗靶点,为进一步临床研究提供理论依据。方法本研究选择体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2作为肾小管上皮细胞模型,观察AOPP修饰的人血清白蛋白对上皮细胞表型转分化的影响,主要通过检测α-SMA、E-cadherin等标志物水平的变化来实现。结果体外研究发现,AOPP通过NADPH氧化酶介导诱导内皮细胞氧化应激损伤,提示AOPP是一种新的具有氧化应激活性的尿毒病毒素。结论 AOPP是一种新的具有氧化应激活性的尿毒症毒素,慢性肾功能衰竭的治疗应着眼于如何有效降低患者血浆中的AOPP水平。     

抑瘤素M在肾小管上皮细胞转分化中作用及AG490的影响

目的探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在抑瘤素M(oncostatin M,OSM)诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为对照组、OSM(10μg.L-1)组、OSM(10μg.L-1)+AG490(10μmol.L-1)。于处理后72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)水平。ELISA检测细胞培养上清液中FN和ColⅠ的浓度。结果 OSM能促使人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,同时促使HKC分泌FN和ColⅠ增多,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18在小管上皮细胞中的表达逐渐减少;AG490干预能减弱OSM对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导及细胞外基质FN和ColⅠ的分泌作用,同时使CK-18的表达逐渐回升。结论炎症因子OSM能诱导HKC表型转分化并促使细胞外基质的分泌,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断OSM的该作用。     

细胞因子信号传导的抑制因子研究进展

细胞因子是一类由细胞分泌的调节细胞生长、分化、增殖的多肽小分子，它们不能直接进入细胞内发挥作用，而是通过细胞因子受体介导再经相应信号传导途径发挥其生物学效应。细胞因子作用的时间、空间和强度均受到严格的调控，其过度刺激会对机体造成伤害。1995年以来，相继发现一系列抑制细胞因子信号传导途径的蛋白分子，socs(Suppressor of     

细胞因子信号传导抑制蛋白-3（SOCS-3）作用的研究进展

细胞因子信号传导抑制蛋白-3（SOCS-3）N以对多种细胞因子和激素（包括LIF,IL-11,生长激素,胰岛素和瘦素）产生的信号传导过程进行负性调节,这些信号传导过程的作用涉及到启动免疫反应,控制炎症过程,调节生长发育以及淋巴细胞的分化等方面。最新研究表明,SOCS-3与中枢神经系统的免疫、炎症反应和人体肥胖等有着重要的联系,本文主要就SOCS-3这两方面的作用作一综述。     

晚期糖基化终末产物的抑制机理及抑制剂的研究进展

晚期糖基化终末产物(advanced glycation end productons,AGEs)是由还原糖羰基与蛋白质、脂质、核酸的游离氨基通过非酶作用形成的一种不可逆终末产物.本文就AGEs生成的抑制机理及抑制剂进行综述.     

钠/氢交换蛋白1在糖基化终末产物诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞表型转换中的作用

目的在体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)模型上,观察钠/氢交换蛋白1(NHE1)选择性抑制剂cariporide对糖基化终末产物(AGEs)诱导VSMCs表型转化的作用并探讨相关机制。方法采用CCK8检测VSMCs细胞增殖,Transwell试验检测细胞迁移情况;BCECF荧光探针检测细胞内pH值及NHE1活性;Western blot检测NHE1、α-SMA、SM22α及OPN蛋白表达。结果 NHE1选择性抑制剂cariporide及Rho激酶(ROCK)抑制剂Y-27632可显著拮抗AGEs诱导的VSMCsα-SMA、SM22α蛋白表达降低及OPN蛋白表达的增多,抑制VSMCs转换为合成表型(去分化表型),从而抑制AGEs诱导的VSMCs的增殖和迁移;同时Y-27632可显著抑制AGEs诱导的细胞内pH值升高,NHE1的活性及蛋白表达。结论该研究结果提示NHE1活化在AGEs诱导VSMCs表型转化中可能起重要作用,同时AGEs调节NHE1活化的机制可能与ROCK相关。     

连翘苷调控细胞因子信号转导抑制因子1对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和氧化应激的影响

目的 研究连翘苷调控细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和氧化应激影响。方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞分为对照组、模型组(肺炎链球菌感染)、实验低、中、高剂量组(在模型组基础上分别给予5、10、20μmol·L^-1连翘苷)、实验高剂量+si-NC组(肺炎链球菌感染,转染siRNA NC、20μmol·L^-1连翘苷处理)、实验高剂量+si-SOCS1组(肺炎链球菌感染,转染siRNA SOCS1、20μmol·L^-1连翘苷处理)。用蛋白质印迹(Western blot)法检测SOCS1蛋白表达;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;用碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期;用Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡;用可见分光光度法检测丙二醛(MDA);用氮蓝四唑(NBT)法检测超氧化物歧化酶(SOD)。结果 对照组、模型组、实验高剂量组、实验高剂量+si-NC组和实验高剂量+si-SOCS1组肺泡上皮细胞SOCS1蛋白表达水平分别为1、0.54±0.04、0.96±0.04、0....     

马钱苷对糖基化终末产物诱导足细胞损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷特征性成分马钱苷对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾脏足细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为空白对照组、模型组(AGEs组)、马钱苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。MTT法检测马钱苷对足细胞存活率的影响;Hoechst33342/PI双染观察足细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测足细胞AGEs受体(RAGE)、足细胞损伤标志蛋白desmin以及凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase-3的表达。结果马钱苷能够抑制AGEs导致的足细胞损伤,下调足细胞Desmin、RAGE蛋白的表达,明显降低AGEs诱导的足细胞凋亡率,降低足细胞Bax/Bcl-2的比值和促凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达。结论马钱苷能够改善AGEs诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与降低RAGE蛋白表达,抑制凋亡通路有关。     

法舒地尔对高糖培养的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用

目的探讨法舒地尔对高糖培养人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及可能作用机制。方法人肾小管上皮细胞同时加入葡萄糖60 mmol·L-1和法舒地尔20μmol·L-1。配体结合沉淀法检测葡萄糖60mmol·L-1作用0～24 h后细胞Rho A活性,免疫细胞化学技术检测上皮钙黏素表达,Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果在一定时间范围内,高糖能刺激细胞Rho A分子活化;与正常对照组比较,葡萄糖60 mmol·L-1培养HK-2细胞72 h后上皮钙黏素表达明显减少(P<0.01),α-SMA表达明显增多(P<0.01),TGF-β1分泌增多(P<0.01),而葡萄糖5.5 mmol·L-1+甘露醇54.5 mmol·L-1高张组无明显差异。法舒地尔20μmol·L-1同步干预后,与高糖组比较,细胞上皮钙黏素表达明显增多〔(0.03±0.01)vs(0.08±0.02),P<0.05〕,α-SMA表达下降(P<0.05),48 h时TGF-β1分泌明显减少〔(128±11)vs(49±5)μg.g-1(P<0.05)〕。结论法舒地尔能抑制高糖培养的肾小管上皮细胞转分化,可能部分通过减少TGF-β1的分泌发挥作用。     

基于mTOR通路的大黄素对肾小管上皮细胞转分化的干预作用机制研究

目的：观察大黄素（EMO）对高糖诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化（EMT）的干预效应及对mTOR信号通路的影响,探讨大黄素防治糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的可能作用机制。方法：将体外培养的人肾小管上皮细胞HK-2分为正常组（NG组,5.56 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（HG组,60 mmol·L^-1葡萄糖）、大黄素组（EMO组,60 mmol·L^-1葡萄糖+10 μmol·L^-1大黄素）,在用MTT证实大黄素对正常培养的HK-2细胞无毒性的基础上,选择一个有效的药物浓度,以mTOR特异性抑制剂雷帕霉素（20 nmol·L^-1）作为对照。各组细胞培养72 h时后,倒置显微镜观察HK-2细胞形态。Western blot法检测细胞中mTOR、P70S6K、4-EBP1蛋白磷酸化水平;免疫荧光法检测α-SMA以及E-cadherin蛋白分布及表达。结果：高糖可以诱导HK-2细胞形态由多边鹅卵石样发生纤维化样改变,激活mTOR、P70S6K、4-EBP1蛋白磷酸化,降低细胞中上皮表型蛋白E-cadherin的表达,并增加间质表型蛋白α-SMA的表达。大黄素可以改善高糖导致的HK-2细胞形态的变化,降低mTOR、P70S6K、4-EBP1蛋白磷酸化水平,E-cadherin表达的减少及α-SMA表达的增加,雷帕霉素也能达到与大黄素相同的效果。结论：大黄素可以改善高糖诱导的HK-2细胞上皮-间质转分化,此效应可能与抑制mTOR信号通路有关。     

金芪降糖片对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的探讨

目的 观察金芪降糖片对糖尿病大鼠肾组织晚期糖化终末产物(AGEs)及其受体(RAGE)、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 测定造模后20周糖尿病模型组(DM组)、糖尿病给药组(DD组)和正常对照组(N组)大鼠24 h尿微量白蛋白定量(UMA)、平均血糖、TG、TC、内生肌酐清除率(Ccr)水平及肾皮质AGEs、RAGE、NF-κBp65、MCP-1水平,同时观察各组大鼠肾脏形态学改变,评价金芪降糖片的肾脏保护作用.结果 DM组和DD组平均血糖、TC差异无统计学意义,DD组Ccr[(2.72±0.36)ml/min]高于DM组[(2.31±0.23)ml/min],而UMA、TG、AGEs、RAGE、NF-κBP65、MCP-1水平降低[(6.95±2.65)mg/d比(14.52±5.90)mg/d、(2.87±0.56)mmol/L比(4.35±0.92)mmol/L、(38.24±8.36)AFU/mg比(70.49±15.21)AFU/mg、(8.26±4.47)比(17.44±7.91)、(3.40±2.62)比(5.95±3.22)、(1.52±0.34)比(2.17±0.56)],差异有统计学意义(P＜0.05);光镜和电镜下,DD组肾组织损伤程度均轻于DM组.结论 金芪降糖片可以减轻糖尿病慢性肾损伤的程度,其肾脏保护作用可能与其降脂及降低AGEs、RAGE、NF-κBp65、MCP-1水平有关.     

谷胱甘肽对顺铂致大鼠肾小管上皮细胞毒性的影响

目的 探讨顺铂对不同年龄大鼠肾小管上皮细胞的毒性及谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法 从不同年龄的雄性大鼠分离的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板，培养24h后加入一系列浓度的顺铂，或在加入顺铂前16和4h。分别加入GSH合成抑制剂：BSO和GSH的前体物半胱氨酸，再培养24h后用MTT方法检测细胞存活率。结果 顺铂对5、2月龄和3周龄大鼠肾小管上皮细胞半数抑制浓度(IC50)分别为243．42、178．16和159．06μmol／L；BSO能使3组IC50分别降低到1．62、1．30和1．47μmol／L，而半胱氨酸则可使3组IC50均大于5000μmol／L。结论 顺铂对不同年龄大鼠肾小管上皮细胞均具有明显的毒性，BSO和半胱氨酸可分别增强和减弱顺铂的毒性，间接证明细胞内GSH对顺铂所致大鼠肾小管上皮细胞毒性有保护作用。     

Influence of diabetes on tissue healing in orthopaedic injuries

Diabetes is a group of metabolic diseases characterized by hyperglycaemia resulting from the defective action or secretion of insulin. Chronic hyperglycaemia can lead to the damage, dysfunction and failure of various organs. In the context of complications of healing and orthopaedic rehabilitation, vascular (microangiopathy) and nerve (neuropathy) disorders deserve particular attention. About 12% of the patients admitted to orthopaedic departments have diabetes. Studies indicate that there is an indisputable link between diabetes and: an increased risk of fractures, the difficult healing of injuries of bones, ligaments and musculotendinous. It appears that one of the main reasons for this is non‐enzymatic glycosylation (glycation) of collagen molecules, a phenomenon observed in the elderly and diabetic populations, as it leads to the formation of advanced glycation end products (AGEs). Collagen is one of the major connective tissue components, and is therefore part of ligaments, tendons and bones. AGEs affect the weakening of its structure and biomechanical properties, and thus also affects the weakening of the structure and properties of the above‐mentioned tissues. The aim of the study is to undertake an overview of the current knowledge of the impact of diabetes on the risk of some injuries and subsequent healing and rehabilitation of patients following orthopaedic injuries.     

肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的病理学机制研究

目的：研究肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的病理学机制。方法：80只雄性大鼠随机平分为假手术组和UUO模型组,每组40只,行大鼠左侧输尿管结扎术,假手术组游离左侧输尿管但不予结扎,其余手术与UUO模型组相同。分别于术后d3、d7、d10、d14、d21每组处死8只,取大鼠左侧肾脏。①检测并比较假手术组和UUO模型组大鼠线粒体相关基因的表达水平;②检测两组大鼠肾脏组织COX和SOD含量变化;③检测两组大鼠肾脏组织RIF指数变化;④检测并比较肾体比、肾功能和肾组织Hyp含量动态变化。结果：与假手术组大鼠相比,①UUO模型组大鼠的线粒体相关基因的表达水平显著升高（P＜0.05）,包括线粒体mtDNA、再生基因（PGC1a、NRF1和Tfam）、断裂基因（Mfn1、Mfn2和Opa1）和融合基因（Drp1和Fis1）;②UUO模型组大鼠在造模后10d、14d和21d,肾脏组织中的COX水平显著升高（P＜0.05）,SOD水平显著降低（P＜0.05）,造模时间越长,UUO模型组大鼠COX水平越高（P＜0.05）,SOD水平越低;③UUO模型组大鼠造模后10d、14d和21d,肾脏组织RIF指数均显著升高（P＜0.05）;④UUO模型组大鼠肾体比明显升高且一直维持在较高水平（P＜0.05）,造模时间越长,模型大鼠血清Scr和BUN水平及肾组织Hyp含量水平逐渐升高,与假手术组相比均具有显著差异（P＜0.05）。结论：与假手术组大鼠相比,UUO模型组大鼠肾组织中的线粒体更活跃,线粒体基因、再生基因、断裂基因和融合基因含量升高,COX含量升高,SOD含量降低,RIF指数升高,肾体比、血清Scr和BUN和肾组织Hyp水平显著升高。     

对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应#br#

目的　探讨对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应。方法　分别用PBS、碘海醇、碘海醇+甘草酸苷刺激THP-1细胞,获取3种外泌体（NC-Exo、CIN-Exo、CIN-GL-Exo）。透射电镜观察外泌体的形态;蛋白免疫印迹（Western blot）检测CD63、TSG101、calnexin的表达;荧光标记法检测外泌体的摄取。将HK-2细胞随机分为4组：Con组、NC-Exo组、CIN-Exo组、CIN-GL-Exo组。Western blot检测3种外泌体中高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达量,以及4组细胞中凋亡相关蛋白及HMGB1/Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测4组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测4组细胞炎性因子［白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α］mRNA的表达。结果　THP-1细胞来源的外泌体为圆形或类圆形小囊泡,表达标志物蛋白CD63、TSG101,而不表达内质网蛋白calnexin。标记DiR荧光素的外泌体可被HK-2细胞摄取。CIN-Exo中HMGB1表达量高于NC-Exo和CIN-GL-Exo（P＜0.05）。CIN-Exo组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved caspase-3表达量高于Con组、NC-Exo组、CIN-GL-Exo组,而Bcl-2表达量低于其他3组（P＜0.05）。CIN-Exo组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平,以及HMGB1、TLR4、NF-κB表达量高于其他3组（P＜0.05）。结论　对比剂可通过巨噬细胞来源外泌体诱导肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应,可能与外泌体HMGB1水平上调有关,甘草酸苷可抑制该途径而发挥保护效应。     

和血明目片联合卵磷脂络合碘治疗视网膜静脉阻塞的临床研究

目的 基于小胶质细胞的极化探讨木犀草素发挥抗抑郁活性的相关机制。方法 将72只雄性大鼠随机分为对照组,模型组,ABT-494组（10 mg/kg,JAK1抑制剂）,木犀草素低、高剂量（30、60 mg/kg）组和木犀草素（60 mg/kg）+ABT-494（10 mg/kg）组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠采用慢性不可预知性温和应激（CUMS）联合孤养复制抑郁大鼠模型。建模成功后ig相应剂量的药物进行干预,1次/d,连续28 d。分别于造模前1 d、造模结束后和给药结束后,采用糖水偏好实验和强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估;免疫荧光双染法检测大鼠海马齿状回（DG）小胶质细胞中离子钙结合衔接分子-1 （Iba-1）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达;ELISA检测海马组织炎性因子白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-4、IL-10的水平;Western blotting检测海马组织Janus激酶1（JAK1）/信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量、糖水偏好度、海马组织IL-4、IL-10水平显著降低,强迫游泳时不动时间、海马DG区Iba-1/iNOS共表达的阳性细胞数、海马组织TNF-α、IL-6水平和p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3值显著增加（P<0.05）;与模型组比较,ABT-494组、木犀草素+ABT-494组和木犀草素低、高剂量组大鼠体质量、糖水偏好度、海马组织IL-4、IL-10水平显著增加,强迫游泳时不动时间、海马DG区Iba-1/iNOS共表达的阳性细胞数、海马组织TNF-α、IL-6水平和p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3比值显著降低（P<0.05）;且木犀草素和ABT-494联合使用后作用优于两者单独应用。结论 木犀草素的抗抑郁作用可能与抑制JAK1/STAT3信号通路的激活,进而抑制小胶质细胞向M1型活化有关。