铁剥夺对 DNR诱导 K562细胞多药耐药基因表达的影响

目的 探讨铁剥夺对柔红霉素（DNR）诱导多药耐药基因MDR1表达的影响。方法 以柔红霉素单用或联合应用去铁胺（DFO）或二氯化铁（FeCl3）为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT—PCR法、流式细胞分析技术,检测K562细胞多药耐药基因信使核糖核酸（MDR1mRNA）和P-糖蛋白（Pgp）表达的情况。结果 ①与空白对照组相比,柔红霉素（1μmol／L）作用24h可使MDR1／Pgp表达增加（P〈0．05）;②与单用DNR组相比,DFO可显著抑制柔红霉素诱导的MDR1／Pgp的表达,而FeCl3的作用相反（P〈0．05）。结论 柔红霉素短期作用可诱导MDR1表达,提示化疗药本身的诱导作用在肿瘤多药耐药产生中发挥重要作用。铁剥夺可减少柔红霉素诱导的MDRI／PgP表达,而FeCl3的作用相反,提示铁剥夺有可能成为阻止或降低白血病化疗耐药的新的措施之一,而白血病化疗患者补铁应慎重。     

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目的检测婴儿痉挛(IS)外周血多药耐药基因1(MDR1)及其产物P-糖蛋白(Pgp)的表达,探讨IS与多药耐药基因的关系。方法 2007年1月至2010年6月徐州医学院附属医院、徐州市儿童医院门诊及病房收治的IS患儿23例,分为2组:治疗前组、治疗超过6个月组。同期选取其他癫痫发作类型组12例、正常对照组10名。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测患儿外周血中MDR1基因mRNA的表达,流式细胞术检测患儿外周血Pgp表达。结果小儿外周血MDR1 mRNA与Pgp蛋白表达呈高度正相关(r=0.86,P<0.05)。治疗前组、治疗超过6个月组、其他癫痫发作类型组外周血MDR1 mRNA和Pgp蛋白表达均较正常对照组增高,且治疗前组、治疗超过6个月组MDR1基因mRNA和Pgp蛋白表达水平明显高于其他癫痫发作类型组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。治疗前组、治疗超过6个月组间MDR1 mRNA和Pgp蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IS患儿MDR1和Pgp表达增高可能是临床耐药的重要原因,且可能为内源性耐药。     

难治性癫(癎)患儿多药耐药基因的表达及意义

目的 研究难治性癫(癎)(RE)患儿多药耐药基因(MDR1)的表达及其临床意义.方法 提取难治性癫(癎)患儿(n=30)、非难治性癫(癎)患儿(n=30)和正常健康儿童(n=30)外周血标本,用荧光定量PCR方法分析比较MDR1 mRNA在各组的表达.同时观察MDR1 mRNA水平与癫(癎)发作频率和应用抗癫(癎)药物(AEDs)的种类与数量关系.结果 MDR1 mRNA在难治性癫(癎)组表达明显高于非难治性癫(癎)组及正常对照组(P均<0.01);在发作次数频繁患儿明显高于发作次数较少患儿(P<0.01);在使用4种AEDs患儿明显高于使用2种及3种AEDs息儿(P<0.05).结论 血中高表达的MDR1参与了难治性癫(癎)的耐药机制,可作为判断难治性癫(癎)的客观指标.     

长程服用苯巴比妥、氯硝安定、丙戊酸和托吡酯对未成熟脑发育影响的实验研究

目的探讨治疗血浓度下常用抗癫痫药（AEDs）对未成熟脑损伤的可能性。方法160只健康sD大鼠,幼鼠与成年鼠各80只。以AEDs血浓度达到临床治疗稳态血浓度为实验剂量,设立健康7日龄幼鼠及2月龄成年SD大鼠氯硝安定（CZP）、苯巴比妥（PB）、丙戊酸钠（VPA）、托吡酯（TPM）给药组及正常对照组。每一给药组又分为2周短程及5周长程给药组,每组8只。停药当天称取体重及脑重,尼氏染色及电镜观察脑组织病理改变,ELISA法测定血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白表达,原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。结果（1）短程PB给药幼鼠血清NSE浓度[（8．84±2．10）nmol／L]较正常对照[（6．27±1．27）nmol／L]高,差异有统计学意义（P〈0．01）;（2）长程CZP及PB组幼鼠脑重较对照明显减轻,额叶皮层神经细胞减少,神经元超微结构明显异常,血清NSE浓度[分别为（8．15±1．67）nmol／L及（8．07±1．27）nmol／L]较对照[（6．02±1．20）nmol／L]高,差异有统计学意义（P〈0．01）,Bax蛋白表达强于正常对照组（P〈0．01）,TUNEL染色阳性细胞较对照组多。结论治疗血浓度下4种AEDs中,PB、CZP可引起发育中脑组织明显而持久的组织学损伤及神经元坏死与过度凋亡。     

癫(癎)持续状态后大鼠大脑中P糖蛋白的表达及其年龄特征

大多数癫痫患者的发作通过药物治疗可以得到很好的控制,但大约25％的癫痫患者发作难以控制,癫痫的多药耐药机理仍然不明。已经发现了一些危险因子,认为可能与多药耐药有关,其中最热点的是多药耐药基因表达的蛋白,即P糖蛋白（P—glycoprotein,P—gp）。最近有报道认为P-gp表达主要存在于癫痫病灶中,而临近的正常组织并没有检测到P—gp表达增高,这说明P—gp的高表达最初可能是损伤的结果,     

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目的探讨多药耐药基因1(MDR1)C3435T和C1236T多态性与抗癫痫药(AEDs)血药浓度的关系。方法 2009年1月至2010年7月山东大学齐鲁儿童医院和山东大学齐鲁医院儿科门诊长期随访或住院治疗的癫痫患儿184例,服药205例次,其中服用丙戊酸钠(VPA)者110例次、服卡马西平(CBZ)者95例次,采用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切片段多态性(RFLP)的方法对服用VPA和CBZ患儿进行MDR1基因C3435T和C1236T分型。采用荧光偏振免疫法测定患者抗癫痫药血药浓度。比较不同基因型间VPA或CBZ血药浓度差异。结果 MDR1基因C3435T多态性中,VPA组基因型CT、CC和TT患者校正后血药浓度分别为(4.17±1.99)、(5.16±2.62)、(4.78±1.72)mg/L,3基因型间差异无统计学意义(P>0.05);CBZ组的CT、CC和TT患者校正后血药浓度分别为(0.72±0.44)、(0.69±0.29)、(0.57±0.43)mg/L,3基因型间差异无统计学意义(P>0.05)。MDR1基因C1236T多态性中,VPA组的CT、CC和TT患者校正后血药浓度分别(3.73±...     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

抗癫(癎)药物对骨代谢的影响和防治研究进展

癫痫是神经科常见病,目前控制癫痫发作的主要手段是药物治疗。抗癫痫药物（anti—epileptic drugs,AEDs）对骨骼代谢的影响在上个世纪60年代末就有报道,近年来广大学者对此进行了深入的研究。现就国外关于AEDs对骨代谢的影响、监测和防治的研究作综述如下。     

芳香族类抗癫痫药诱发Stevens-Johnson综合征与HLA-B*1502基因的相关性研究

HLA-B*1502基因与芳香族类抗癫痫药（AEDs）诱发的Stevens-Johnson综合征（Stevens-Johnson syndrome,SJS）在华中地区汉族研究对象的相关性研究。方法　2007-2009年武汉市儿童医院神经内科住院就诊的因服用AEDs而导致药物副反应（cADRs）的16例癫痫患儿为cADRs组,其中5例表现为SJS,高敏综合征（HSS）2例和斑丘疹（MPE）9例。同时,按1 ∶ 2的比例收集32例服AEDs无副反应的患儿为AED-耐受组,其年龄、性别及所服用药物与cADRs组匹配;选取38名正常儿童为正常对照组。采用等位基因特异性多重PCR分型技术（ARMS-PCR）检测HLA-B*1502的基因型。结果　5例由芳香族类AEDs所诱导的SJS皆为HLA-B*1502基因阳性,而在AED-耐受组中2例、正常对照组中3例HLA-B*1502基因阳性。HLA-B*1502基因频率在cADRs组（33.3%）明显高于AED-耐受组（6.25%,P <0.05;OR=7.5,95%CI 1.25～44.89）和正常对照组（7.89%,P < 0.05;OR = 5.30,95%CI 1.09～25.84）。若以SJS或表皮性红斑（TEN）为研究对象则检测到HLA-B*1502基因与SJS或TEN有更强的相关性（P < 0.0001;OR = 247.99,95% CI 5.87～3831.70）。若以AED-耐受组为对照组,HLA-B*1502基因预测芳香族类AEDs诱发SJS的敏感性为100%（95%CI 81.5%～100%）,特异性为71.4%（95%CI 30%～95%）。HLA-B*1502基因与MPE及HSS无相关性。结论　HLA-B*1502基因与芳香族类AEDs诱导的SJS在华中地区汉族研究对象呈强相关,HLA-B*1502基因可作为由卡马西平为代表的芳香族类AEDs诱发SJS的易感基因,筛查该基因有助于指导癫痫患儿临床个体化药物治疗。     

腺病毒介导多药耐药基因1保护骨髓的体外实验研究

目的构建表达多药耐药基因1（MDR1）的重组腺病毒载体，体外实验研究MDR1基因对骨髓的保护作用。方法用基因工程技术将MDR1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上，利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组，然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293细胞，并在其中包装、扩增、收获病毒。进一步采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定，利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因，对病毒滴度进行检测。将收集的重组腺病毒Ad5-MDR1感染小鼠单个核细胞，通过荧光显微镜、免疫组化及流式细胞仪对感染效率及保护作用进行检测，并用Westernblot法检测P-gp的表达。结果酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功，病毒滴度达8．3×10^11pfu／ml。对小鼠单个核细胞的感染效率可达10％～15％，转染小鼠单个核细胞48h后，有P-gp蛋白的明显表达。结论成功构建了表达MDR1的重组腺病毒载体，证实MDR转染对骨髓具有保护作用。