转录因子GATA-3和T-bet对辅助T细胞分化的调控作用

呼吸道合胞病毒(RSV)感染所致的毛细支气管炎(毛支)日后发展为支气管哮喘(哮喘)的概率很高.辅助T细胞(Th)1/Th2平衡紊乱,Th2优势免疫应答可能是婴儿RSV毛支发展为哮喘的重要决定因素.深入研究毛支患儿体内Th与T-bet和GATA-3之间的作用和关系及其在RSV毛支和哮喘中可能的发病机制以及新的干预措施,可为临床采用T-bet基因治疗提供帮助.该文就T-bet、GATA-3的生物学特性及其对Th1/Th2分化的调控作用进行综述.     

黄芪对哮喘大鼠肺组织信号转导子和转录激活子4表达的调控

目的观察黄芪对大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活子4（STAT4）蛋白及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组,每组10只鼠。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4和IL-12浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT4蛋白和STAT4 mRNA的表达。结果（1）哮喘组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比[（EOS％）（35．8±7．3）×10^7／L,（8．20±1．75）％]均显著高于正常对照组[（1．5±1．0）×10^7／L,（0．70±0．48）％]（P〈0．01）,黄芪组上述指标[（14．9±2．4）×10^7／L,（4．70±0．82）％;（11．0±1．8）×10^7／L,（3．56±0．53）％]均低于哮喘组（P〈0．01）;（2）BALF中IL-4浓度（ng／L）哮喘组（25．70±7．36）显著高于对照组（8．55±2．97）（P〈0．01）,黄芪组[（13．87±3．61）,（11．67±3．05）]均显著低于哮喘组（P〈0．01）;BALF中IL-12浓度（ng／L）哮喘组（16．10±3．38）显著低于对照组（42．33±9．66）（P〈0．01）,黄芪组[（31．89±5．46）,（35．26±6．03）]均显著高于哮喘组（均为P〈0．01）;（3）免疫组化和原位杂交显示,哮喘组肺组织STAT4蛋白和STAT4 mRNA表达的强度[（0．096±0．012）,（0．098±0．011）]均低于对照组[（0．216±0．034）,（0．228±0．032）],黄芪组[（0．176±0．012）,（0．185±0．023）;（0．183±0．011）,（0．201±0．019）]较哮喘组均明显升高（均为P〈0．01）,其主要表达细胞是气道平滑肌细胞和肺细小动脉的血管平滑肌细胞及内皮细胞;（4）肺组织中STAT4及其mRNA表达分别与BALF中的IL-12浓度呈显著正相关（r=0．897、0．910,P〈0．01）;而与BALF中的IL-4浓度、EOS数量均分别呈显著负相关[（r=-0．693、-0．668,P〈0．01）,（r=-0．891、-0．897,P〈0．01）]。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,上调气道平滑肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞STAT4蛋白及其mRNA表达,使IL-12合成增加可能为其作用机制。     

转录因子GATA3和T-bet与支气管哮喘的关系

转录因子GATA3与T-bet是近年关注较多的转录因子之一,其参与了辅助T细胞(Th)1/Th2的分化调节.GATA3为Th2发展的关键调节子,其过表达可使气管上皮下纤维化程度明显增加,而T-bet主要调节Th0向Th1分化,并在一定程度抑制,Th2的分化.支气管哮喘被认为是一种Th2偏移性疾病,调节T-bet/GATA3的平衡可使Th1/Th2恢复平衡,达到有效控制哮喘的作用.     

支气管哮喘患儿外周血T淋巴细胞趋化功能与总IgE的变化

目的：探讨支气管哮喘患儿的Ｔ淋巴细胞趋化功能及总ＩｇＥ的变化。方法：应用微量玻片法和放射免疫法，对３２例支气管哮喘发作期患儿和３４例正常对照组进行了检测。结果：支气管哮喘患儿的Ｔ淋巴细胞趋化值（８２７４１±０４２１０）％；总ＩｇＥ（７５４８２２３±１９７８８２４）ｍｇ／Ｌ，明显高于正常对照组的（０４８０７±００４１０）％和（２０１４９２±４８２５９４）ｍｇ／Ｌ。结论：支气管哮喘患儿存在明显的免疫功能紊乱。其表现为Ｔ淋巴细胞分泌免疫球蛋白ＩｇＥ明显增高。Ｔ淋巴细胞趋化值可作为探讨细胞免疫功能的又一新方法。     

转录因子GATA-3与支气管哮喘的治疗

转录因子GATA-3是具有锌指结构的GATA家族中的一员,可诱导辅助性T细胞(Th)2分化、调控Th1/Th2平衡及调节一些细胞因子的表达,且嗜酸性细胞在受抗原刺激后也表达GATA-3,表明GATA-3在支气管哮喘的发病中起重要作用。GATA-3反义寡核苷酸、GATA-3抑制剂、GATA-3-decoy寡核苷酸可抑制GATA-3表达,为从分子水平治疗支气管哮喘提供了一个崭新的切入点。     

FOXP3的生物学特性及其与支气管哮喘的关系

FOXP3是CD4~+CD25~+调节性T细胞(Tr)的特异性分子标志,对CD4~+CD'25~+Tr的发育和功能维持发挥重要作用,同时它可以结合在一些细胞因子基因的转录启动区,减少细胞因子的产生,对维持免疫稳态十分重要.CD4~+CD25~+Tr作为一种专职的免疫抑制细胞,在免疫调节中扮演着重要角色,抑制支气管哮喘等过敏性疾病及自身免疫疾病的发生和发展.通过对转录因子FOXP3更深入的研究,有助于更广泛地探索CD4~+CD25~+Tr的功能及其效应机制,从而为进一步探讨支气管哮喘的发病机制和寻求有效的治疗及预防手段提供理论依据.     

哮喘患儿外周血调节性T细胞和 Th1/Th2 的变化及其与哮喘病情的关系

目的：通过测定哮喘患儿外周血 CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞（Treg）以及 Th1/Th2 比值变化,探讨其与哮喘病情的关系。方法：150 例哮喘患儿按临床表现分为急性期组 (94 例) 和缓解期组 (56 例), 其中急性期组按病情再分为轻度组 (54 例) 和重度组 (40 例)。应用流式细胞仪检测各组外周血 CD4+CD25+Foxp3+ Treg、CD4+IFN-γ+ Th1 和 CD4+IL-4+ Th2 水平,并与正常儿童（对照组,n=50）进行比较。结果：哮喘组 Treg 水平明显低于对照组 (P<0.01)：其中急性期组 Treg 水平明显低于缓解期组和对照组(P<0.01),重度组 Treg 水平则明显低于轻度组(P<0.01)。哮喘组 Th1/Th2 比值显著低于对照组 (P<0.01)。哮喘急性期组 Th1/Th2 比值显著低于缓解期组和对照组 (P<0.01)。哮喘患儿外周血 Treg 水平与哮喘的病情严重程度呈负相关 (r=-0.737, P<0.01),Th1/ Th2 比值与哮喘病情严重程度亦呈负相关 (r=-0.615, P<0.01),且Treg 的水平与 Th1/ Th2 比值呈正相关(r=0.856, P<0.01)。结论：哮喘患儿外周血Treg 水平明显降低,Th 亚群失衡,提示 Treg 和 Th 免疫在哮喘发病中具有重要作用。外周血Treg 水平与 Th1/Th2 比值可用来评估哮喘病情。     

哮喘患儿淋巴细胞糖皮质激素受体、T细胞亚群及血清免疫球蛋白的研究

研究目的 探讨淋巴细胞糖皮质激素受体、细胞亚群及血清免疫球蛋白与儿童哮喘的关系。 研究设计 病例对照研究 患者和其他参与者 哮喘患儿34例(观察组),对照组34例,性别组成与年龄分布与观察组相同,均为健康儿童。 处理方法 所有患者及参与者均于晨8时外周或股静脉取血,肝素抗凝待测。 测定和主事结果 用受体放射配体结合分析法测定淋巴细胞糖皮质激素受体(GCR),用微量细胞毒法检测T细胞亚群,用半自动生化分析仪测定血清中的免疫球蛋白。观察组和对照组GCR水平分别为3028±1402、5288±2238结合位点/淋巴细胞(t=4.99,P<0.01),CD_3的百分率分别为43.03±7.07、51.26±5.89(P<0.01)、CD_4的百分率分别为29.91±6.47、36.85±7.57(P<0.01),CD_3的百分率分别为18.56±3.68、23.41±6.82(P<0.01),CD_4/CD_3比值分别为1.63±0.31、1.65±0.41(P>0.05),IgA、IgG、IgM水平统计学处理组间无显著性差异。 结论 哮喘患儿静脉血淋巴细胞GCR水平和T细胞各亚群的百分率显著下降,表明哮喘患儿存在着细胞免疫缺陷。提示应用激活GCR的药物,对小儿哮喘的治疗可能有效。     

支气管哮喘患儿T淋巴细胞及细胞因子的变化

为观察儿童支气管哮喘时Ｔ淋巴细胞亚群分布以及Ｔ细胞活化相关因子及受体的表达状况，应用放射免疫分析等技术，对３４例发作期、２５例缓解期支气管哮喘患儿和１５例正常对照的外周血Ｔ淋巴细胞亚群、血浆及淋巴细胞膜表面白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）和相关细胞因子等水平进行系统检测。结果：（１）发作期患儿外周血Ｔ细胞亚群ＣＤ３，ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８值与缓解期患儿及正常对照比较差异无显著意义，但发作期ＣＤ８高于正常对照（Ｐ＜０．０１）和缓解组（Ｐ＜０．０１）；（２）发作期患儿血浆可溶性ＩＬ－２Ｒ、（ｓＩＬ－２Ｒ）、ＩｇＥ水平明显高于缓解期患儿和正常对照（Ｐ＜０．０１）；（３）免疫电镜观察显示，发作期患儿淋巴细胞膜表面ＩＬ－２Ｒ表达高于正常对照（Ｐ＜０．０５）。提示：（１）哮喘患儿外周Ｔ淋巴细胞亚群的分布发生了变化，哮喘发作期Ｔ淋巴细胞处于激活状态；（２）血浆ｓＩＬ－２Ｒ、ＩｇＥ水平与哮喘病情变化密切相关，可作为临床哮喘病情监测的指标。     

尘螨变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞中协同刺激分子和细胞因子的异常表达及其意义

目的分析变应原刺激前后变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞表面协同刺激分子及胞内细胞因子表达的变化,探讨CD28家族不同协同刺激信号在变应性哮喘免疫病理机制中的作用。方法选取尘螨变应性哮喘患儿(哮喘组)和健康儿童(健康对照组)各30例,密度梯度离心法分离其外周血单个核细胞,应用免疫荧光标记和流式细胞术检测尘螨刺激前后体外培养的CD4+T淋巴细胞表面协同刺激分子CD28、可诱导共刺激分子(ICOS)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达,运用细胞内染色技术检测CD4+T淋巴细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、IL-4和IL-13的表达。并运用统计学方法比较哮喘组和健康对照组之间的差异。结果哮喘组患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面CD28和ICOS的表达与健康对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05),而CTLA-4的表达显著降低(P<0.01);细胞内IFN-γ表达水平显著升高(P<0.000 1),而IL-4和IL-13表达水平无明显变化(Pa>0.05)。经尘螨刺激后,体外培养的哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面ICOS的表达较健康对照组儿童显著上调(P<0.000 1),CD28和CTLA-4的表达则无明显变化(Pa>0.05);细胞内细胞因子IL-4和IL-13的表达显著上调(Pa<0.000 1),而IFN-γ的表达则无明显差异(P>0.05)。结论变应性哮喘患儿外周血存在组成性的CTLA-4的表达下调和细胞因子IFN-γ的表达上调,介导Th1型细胞的异常活化;而变应原尘螨的刺激又介导了ICOS依赖的Th2型细胞的分化,导致Th1/Th2失衡。     

ITP患儿外周血T细胞T-bet/GATA-3基因的检测及意义

目的研究急慢性ITP患儿Th1、Th2类细胞因子和转录因子T-bet和GATA-3的相关性,探讨其在ITP发病机制。方法选择30例ITP患儿,运用T细胞分离富聚柱得纯化的T细胞,分别用ELISA法和RT-PCR技术检测ITP患儿血清中的IFN-γ、IL-4水平和外周血T细胞转录因子T-bet和GATA-3的表达状态,设30例健康儿童为对照组。结果慢性ITP患儿血清中IL-4水平较正常人降低,IFN-γ的水平升高,GATA-3 mRNA表达水平下降,T-be tmRNA表达水平升高;而急性ITP患儿外周血中IL-4水平较正常人升高,血清中IFN-γ水平及T-bet/GATA-3比值无显著性差异。结论慢性ITP患儿外周血Th1/Th2比例失衡,T-bet/GATA-3的表达失调,可能引起慢性ITP的免疫紊乱:而急性ITP患儿的发病机制可能与T-bet/GATA-3的表达无关。     

调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用初探

目的系统观察过敏性紫癜(HSP)急性期调节性T细胞(Tr)亚群及辅助性T细胞亚群(Th1/Th2)的变化,探讨HSP急性期免疫失衡的发病机制。方法流式细胞术检测20例HSP急性期患儿各种调节性T细胞亚群(CD4+CD25+Tr、Tr1、Th3等)和辅助性T细胞亚群(Th1、Th2)的改变,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链反应(Real-tim e PCR)检测其外周血单个核细胞(PBMC)Foxp3 mRNA的表达。同期20例同龄健康儿童作为对照。结果HSP急性期CD3+CD8-INF-γ-IL-4+(Th2)细胞显著增高(P<0.05),Th1/Th2比值显著降低(P<0.05)。各调节性T细胞亚群CD4+CD2+5Tr、CD4+IL-4-IL-10+(Tr1)、CD4+TGF-β+(Th3)细胞与正常对照组比较均显著降低(P均<0.05)。HSP组PBMC Foxp3 mRNA的表达与正常对照组比较亦显著降低(0.22±0.05vs.66.32±9.25,P<0.001)。结论HSP急性期存在明显的免疫失衡,Th2优势明显;调节性T细胞CD4+CD2+5Tr、Tr1、Th3数量减少导致的免疫抑制效应不足可能是导致HSP免疫失衡的重要原因,而HSP患儿调节性T细胞减少与Foxp3表达降低有关。     

巨细胞病毒感染对Th1/Th2细胞分化特异性转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的动态观测小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子T_bet/GATA_3表达的影响。方法建立MCMV感染模型,20只模型鼠分别于接种MCMVSmith株后第3、5、7、14天各处死5只;另设20只正常小鼠作为对照。用蚀斑形成法测定脾组织病毒滴度;双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清Th1类细胞因子IFN_γ和Th2类细胞因子IL_10表达水平;Western_blot法检测脾组织转录因子T_bet/GATA_3表达强度。结果MCMV感染早期IFN_γ表达显著上升,在感染第3天达峰值,与正常对照组比较差异显著(P<0.01);随后迅速下降,在感染第14天左右基本降至基线水平。T_bet转录因子表达在感染3d后逐渐下降,第7～14天表达显著低于感染后第3天(P<0.01)。IL_10表达在MCMV感染第5天增高,随后下降;在感染第14天又升高,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。转录因子GATA_3表达水平在MCMV感染第7～14天显著高于感染后第3天(P<0.01)。小鼠脾组织病毒滴度在感染第5天出现第1次高峰,随后下降,在感染第14天又增高达到峰值。结论MCMV感染通过上调GATA_3转录因子和IL_10表达,下调T_bet转录因子和IFN_γ表达,导致Th1/Th2失衡,表现为Th2细胞优势应答状态,这可能是CMV感染致宿主特异性细胞免疫功能降低并逃避机体特异性细胞免疫攻击的原因之一。     

哮喘儿童细胞因子信号转导抑制因子mRNA表达与Th1/Th2的关系

目的：细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)对JAK-STAT途径的细胞因子如白介素、干扰素等的调节起重要作用,目前SOCS与哮喘的关系仍在研究中。本研究观察SOCS1和SOCS3 mRNA在哮喘儿童外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平与CD4+ T细胞IFN-γ/IL-4平衡及特异性IgE（sIgE）的关系。方法：采集44例4~14岁过敏性哮喘患儿及30例健康儿童PBMC,分别用流式细胞仪分析CD4+ T细胞IFN-γ/IL-4比值,另提取总RNA,采用SYBR Green I逆转录荧光定量PCR的方法检测每组SOCS1和SOCS3 mRNA的表达。结果：哮喘组患儿外周血IFN-γ阳性的CD4+T细胞百分比［（15.7±2.0）%］及IFN-γ/IL-4比值（3.4±1.5）均低于对照组［分别为（19.1±2.7)%、4.8±2.9］;而SOCS1 mRNA（⊿Ct值11.1±1.9）表达显著高于对照组（⊿Ct值12.6±2.8）。两组儿童SOCS1 mRNA表达均与外周血分泌IFN-γ的CD4+ T细胞百分比呈负相关（P<0.05）。SOCS1和SOCS3与sIgE均无相关性。结论：SOCS1 mRNA在哮喘组患儿外周血中高表达,并与Th2占优势的免疫失衡有关。     

Multidimensional analysis of genetic background and environmental factors: Cases of atopy in asthmatic children

The present work aimed, through a multidimensional analysis of a data set related to 76 asthmatic children (2–16 years), to their family, and to their antecedents, to establish typical profiles of children with asthma, combining similar or even identical characteristics. A questionnaire was presented to the parents concerning possible consanguinity, prematurity of the child, birth order, skin prick test results, presence of animals, indoor dampness, medical history, and cases of atopy among the children and their antecedents. The links between variables were first identified by means of chi-square tests. Ascending hierarchical classification (AHC) was performed to identify significant groupings. Multiple correspondence analysis (MCA) was then carried out to focus on typical children profiles. The results showed a high frequency of bronchitis (86.9%), rhinitis (46.1%), and indoor dampness (64.5%). Family history (asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis) and various allergies (to drugs, to food, or other allergies in general) were present mostly in mothers (≈20%) with a slightly significant association between mothers and siblings (P = 0.045) but not between fathers and siblings (P = 0.41). The AHC highlighted two distinct groups, well discriminated: a predominant group with maternal antecedents and another of lesser significance with paternal antecedents. The MCA identified groupings, with positive modalities of variables, largely around boys and paternal antecedents with an impact on girls. This work allowed us to establish a typical profile of children who have developed (or can develop) asthma. They are children with a history of atopy and allergies, mainly of their mothers, who have contracted early bronchitis and probably rhinitis, and who live in an environment with indoor dampness and smoking.     

促血管生成素-1及其受体Tie-2在哮喘大鼠气道中的表达

目的通过建立哮喘大鼠模型,观察气道结构改变,探讨促血管生成素 1（Ang 1）及其受体(Tie 2)在哮喘大鼠气道中的表达和意义以及地塞米松对其的影响。方法Sprague Dawley大鼠 45只,随机分为对照组,模型组和地塞米松干预组。采用腹腔注射10%卵清蛋白致敏和1%卵清蛋白雾化吸入激发复制哮喘模型,干预组每次激发前给予地塞米松。采用免疫组化检测Ang 1及其受体Tie 2在不同组间气道壁表达变化;采用计算机病理图像分析系统分析各组气道壁厚度。结果①模型组气道壁厚度较对照组明显增加（33.9333±8.3791 μm2/μm vs 21.1333±2.7740μm2/μm,P<0.01）,干预组为（27.4000±4.6105 μm2/μm）较对照组增加（P<0.01）,但较模型组明显减轻（P<0.01）。②模型组气道壁Ang 1及其受体Tie 2在气道上皮表达较对照组明显增加（103.9487±8.2914 vs 76.0320±3.7728,99.2307±8.1913 vs 75.3153±3.7321,P<0.01）,干预组为（90.6180±5.2339,86.6633±3.7321）较对照组增加（P<0.01）,但较模型组明显下降（P<0.01）。③直线相关分析显示气道壁Ang 1及其受体Tie 2的表达同气道壁厚度呈正相关,Ang 1与其受体Tie 2间也呈明显正相关,均 P<0.01。结论 哮喘模型大鼠气道壁中Ang 1及其受体Tie 2表达上调,并与气道壁厚度呈正相关,提示Ang 1及其受体Tie 2可能参与哮喘气道重建过程。地塞米松可下调Ang 1与其受体Tie 2在气道壁的表达,并可减轻气道结构改变。     

瘦素及其受体在哮喘BALB/c小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的 探讨不同严重程度哮喘小鼠及布地奈德干预后肺组织中瘦素及其受体表达的变化规律。方法 将40 只Balb/c 小鼠随机分成对照组、诱喘3 d 组、诱喘7 d 组和布地奈德干预组, 每组10 只。采用卵清蛋白(OVA)致敏后分别激发3 d 和7 d 建立小鼠哮喘模型;布地奈德干预组于激发前1 h 雾化吸入布地奈德混悬液干预;对照组不予任何处理。苏木精- 伊红染色观察各组小鼠气道炎症情况;免疫组化、Western blot 和Real-time PCR 方法检测肺组织中的瘦素及其受体蛋白和mRNA 的表达。结果 哮喘组气道病理学改变较对照组、布地奈德干预组明显, 而哮喘组中, 诱喘7 d 组改变较诱喘3 d 组明显。肺组织中瘦素蛋白及mRNA 表达在诱喘3 d 组较对照组显著增高(P<0.01), 诱喘7 d 组较3 d 组显著增高(P<0.01);瘦素受体蛋白表达在诱喘3 d组较对照组显著降低(P<0.01), 布地奈德干预组较诱喘7 d 组明显增高(P<0.01);瘦素受体mRNA 表达在4组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 哮喘肺组织中瘦素呈高表达, 而瘦素受体呈低表达;布地奈德可以上调瘦素受体的表达, 而对瘦素表达无明显影响。     

细胞间粘附分子-1在哮喘患儿气道上皮细胞的表达及临床意义

目的　了解细胞间粘附分子 1(intercellularadhensionmolecule 1,ICAM 1)在哮喘患儿气道炎症中的作用。方法　通过纤维支气管镜活检气道粘膜 ,分别进行病理、免疫组织化学及原位杂交检查 ,观察气道粘膜炎症和ICAM 1及其mRNA在哮喘患儿气道上皮细胞的表达 ,并与对照儿童比较。结果　哮喘患儿存在气道粘膜炎症 ,ICAM 1及其mRNA在哮喘患儿气道上皮细胞的表达增加。结论　ICAM 1在哮喘患儿气道上皮细胞的高表达与气道炎症有关