黄病毒属病毒的感染性克隆研究进展

黄病毒科包括了一大类人和动物的病毒性病原体 ,这些病毒均为包膜的单股正链ＲＮＡ病毒 ,目前分三个属 :经典的黄病毒属、瘟病毒属和丙型肝炎病毒属。每个属中病毒的感染性ｃＤＮＡ遗传学研究都使人们进一步了解病毒复制和致病性原理。对ＲＮＡ病毒进行反向遗传学研究的历史 ,可追溯到 2 0多年前 ,1978年Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ首次从ｃＤＮＡ克隆获得了ＲＮＡ噬菌体Ｑβ〔1〕,1981年通过脊髓灰质炎病毒ｃＤＮＡ首次获得动物病毒的感染性克隆〔2〕,从此对正链ＲＮＡ病毒的反向遗传学研究系统逐步完善起来了。随后 ,对负链ＲＮＡ病毒、分节 (流感…     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术在人群普查中的应用

目的：探讨应用多肿瘤标志物蛋白芯片技术在人群普查中的意义。方法：采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对3983人次进行12各肿瘤相关抗原物的普查。结果：3983例中筛查出245倒肿瘤标志物有升高,其中17例被病理学、内窥镜、影像学确认为早期或中期肿瘤。确诊肿瘤人数占总普查人数0．43％,非肿瘤人数占总普查人数6．15％。结论：多肿瘤蛋白芯片检测系统适用于人群普查。     

黄病毒逆转录—聚合酶链反应检测技术的建立和应用

为了早期快速诊断黄病毒感染，在其ＮＳ１基因序列设计了一对通用引物，扩增序列长度为４１３ｂｐ；在登革病毒（ＤＥＮ）１，２，３，４型和乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）设计了各型的内引物，扩增序列长度分别是ＤＥＮ１型为２６２ｂｐ，ＤＥＮ２型为１８９ｂｐ，ＤＥＮ３型为３９２ｂｐ，ＤＥＮ４型为９７ｂｐ，ＪＥＶ为３２３ｂｐ。应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）成功地扩增了ＤＥＮ１－４型和ＪＥＶ基因部分片段，其扩增片段的大小与设计相符合。应用套式ＰＣＲ检测临床诊断为登革热的患者血清标本７８份，证实ＤＥＮ１型阳性１８份，ＤＥＮ２型阳性４８份，其中８份同时合并感染ＤＥＮ４型。采用套式ＰＣＲ检测临床诊断为乙型脑炎患者血标本４２份，证实乙型脑炎病毒感染者３５份。结果表明，该法能直接检测发病患者早期血标本中的病毒基因，并在２天内完成对黄病毒的鉴别诊断。     

黄病毒载体技术应用的研究进展

黄病毒,一般指黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavi virus）病毒.黄病毒属包括60多种病毒,按照血清学的特征,黄病毒可分为9组,包括登革病毒（Dengue Virus,DENV）、黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）、乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）、昆津病毒（KUNjin virus,KUNV）、西尼罗病毒（West Nile virus,WNV）、蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus,TBEV）、和墨累河谷脑炎病毒（Murray Valley encephalitis virus,MVEV）等[1].半数以上的黄病毒能够感染人和动物,患病率高而治愈率低,易留下一些严重的后遗症,给人类健康带来很大威胁,且大多数黄病毒引发的病毒病尚无有效疫苗应用于预防,也没有特效的临床药物治疗.随着人们对黄病毒生活周期、分子生物学及其与疾病发生发展关系的深入认识,黄病毒载体技术逐渐成为黄病毒研究的焦点和热点.黄病毒载体作为一种基因导入系统,在载体疫苗研发和基因治疗等领域中发挥着极其重要的作用,本文拟对黄病毒载体技术应用的研究进展作一综述.     

单克隆抗体在农药残留检测中的应用

自1975年Kohler和Milstem创建了杂交瘤技术制备单克隆抗体以来,单克隆抗体已广泛应用于医学、农业及其他生物领域中。本文阐述了农药单克隆抗体的制备流程、已发展的农药单克隆抗体种类及农药残留常用的免疫分析方法,并就农药单克隆抗体制备值得注意的问题提出了建议。     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测临床应用研究

目的 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在肿瘤早期筛查及诊断中的应用价值.方法 应用多肿瘤蛋白芯片系统,对2014年01月～2016年11月在我院就诊患者40395例,健康体检者49795例,进行12种常见肿瘤标志物进行定量检测,并对结果进行统计分析.结果 49795例健康体检者标本中检出阳性4573例,阳性检出率9.20％,门诊就诊患者10109例,检出阳性2002例,阳性检出率19.80％,住院患者30286例,阳性检出10811例,阳性率为35.70％,三组间阳性检出率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 C12检测系统的多种肿瘤标志物联合检测是肿瘤高危人群筛查的一种手段.对于体检发现的某项指标升高人群,应进行全面的临床检查并跟踪随访.     

A monoclonal antibody detecting dipeptidylpeptidase IV in human tissue

Summary Dipeptidylpeptidase IV (DPP IV) occurs among others in exocrine epithelia, hepatocytes, renal tubuli, endothelia, and myofibroblasts of man and laboratory animals. Also Tµ lymphocytes and their varying differentiated neoplastic counterparts reveal this enzyme activity. The present paper describes a new monoclonal antibody recognizing DPP IV.Additional efforts have been taken to detect the subcellular localization of DPP IV and its isoelectric focusing pattern in different tissue types. The monoclonal antibody anti-DPP IV (clone II-19) shows a reaction pattern indistinguishable from the corresponding enzymehistochemical reaction. These findings were further substantiated by immunoblotting analysis. In line with the results of direct enzyme measurements in different subcellular fractions a considerable portion of the enzyme is localized in the membrane fraction.Dedicated to Professor Dr.Dr. h.c. Karl Lennert, Kiel, on the occasion of his 65th birthdayThis study was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft, SFB 111, program CL1     

单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用进展

近年来用于肿瘤治疗的单克隆抗体药物发展迅速.单克隆抗体与肿瘤细胞上特异性的抗原分子结合,通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和补体依赖性细胞毒作用等机制实现杀灭肿瘤细胞的目的.临床抗肿瘤单抗的靶分子主要包括表皮生长因子受体、血管内皮生长因子和部分白细胞分化抗原,用于淋巴瘤、自血病、乳腺癌、直结肠癌、肺癌等领域的治疗已取得瞩目的疗效.     

单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景

单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用,在人类和动植物的免疫学诊断方面至今仍有着无可代替的重要作用。本文综述了单克隆抗体的制备技术,包括嵌合抗体、噬菌体展示技术、核糖体展示技术、基因工程抗体等,及其在临床医学和疾病的诊断与治疗等领域的广阔应用前景。     

金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的：制备抗金葡菌肠毒素C2（SEC2）的单克隆抗体（MeAb），并建立SEC2检测方法。方法：以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原，免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体；并对单克隆抗体的特性进行鉴定；利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法，并进行了验证和初步应用。结果：筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类均为IgG1，除两株单抗的SEC2识别位点相同外，其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点。建立的夹心ELISA定量检测法，特异性、灵敏度、重复性均较好，检测SEC2范围为0．5—20ng,／ml，回收率在97．8％-101％，变异系数为2％-5％。结论：本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体，可用于建立了SEC2定量检测方法，为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法。     

检测过敏性疾病的蛋白芯片制作及临床应用的初步研究

目的优化蛋白芯片的制作条件,并探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值。方法收集患者血清标本103例,年龄9～76岁,平均年龄41岁。具有明显Ⅰ型变态反应性疾病临床指征,其中荨麻疹41例,过敏性皮炎31例,湿疹9例,皮炎23例。采用晶芯-48点样仪在不同的膜性载体(NC、PVDF)上制备阳性对照、阴性对照、屋尘、粉尘螨、豚草花粉、蒿属花粉6×4蛋白芯片。并与德国Allergyscrean过敏原检测系统比较诊断准确性。结果最佳实验条件:以PVDF膜为载体,点样后4℃冰箱48h固定,2%～3%BSA室温封闭2h,TBST(pH=7.4,含吐温0.05%)洗3次,每次3min。加待检血清,室温孵育40min,TBST(pH=7.4)洗3次,每次3min,抗人IgE质量浓度为144ng/ml。与德国Allergyscreen过敏原检测系统比较总体符合率为83.31%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过敏性疾病检测蛋白芯片操作简单,成本低,血清用量少,可同时检测多项指标,相互无干扰,是一种很有发展前景的过敏性疾病体外检测的新方法。     

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETLA).方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a( )/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价.结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能.结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法.     

A monoclonal antibody against glycoproteins of Aspergillus fumigatus shows anti-adhesive potential

There has been an increase in the cases of fungal resistance against many antifungal drugs and an effective alternative mode in the form of immunotherapy is being considered as new hope. The adhesion of Aspergillus fumigatus conidia to the host components is one of the prime factors to cause aspergillosis. Carbohydrate components or glycoproteins present on the cell surface play an important role in interaction of the organism to the host and leads to adhesion. Any substance which is capable of disrupting this interaction may be a vital tool for the fungal clearance and hence may protect the host from infections caused by the fungus. In this study, a murine monoclonal antibody IgM generated against the secretory antigens of A. fumigatus, was found to be specific to a common epitope containing glyco-moieties of the various proteins and exhibited anti-adhesive potential in vitro.     

FITC标记单克隆抗体检测icIL-1ra的方法研究

目的 建立用单克隆抗体技术检测细胞IL-1ra的方法。方法 制备异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IL-1ra单克隆抗体，使其进入U937细胞内与icIL-1ra结合，然后用流式细胞仪(FACS)检测荧光强度，并比较U937细胞在刺激前后荧光强度的变化情况是否与icIL-1ra表达的变化情况相一致。结果 在一定剂量范围内，经PMA分化和LPS刺激的U937细胞的icIL-1ra表达量增加，其检测荧光强度相应增加。结论 用单克隆抗体检测细胞内icIL-1ra是一种快速、准确的方法，本实验方法能够满足实际研究工作中对icIL-1ra定量检测的要求。     

[125I]protein a solid-phase assay for detection of monoclonal antibody

Summary The production of monoclonal antibodies involves testing hundreds of hybridoma supernatant samples for antibody content. This necessitates a rapid detection assay which can separate antibody of interest from antibodies that react nonspecifically. Solid-phase radioimmunoassay is one such method.