死后小鼠肾组织细胞核DNA变化规律的研究

目的:研究DNA降解变化与死亡时间的关系,为法医学推断死亡时间提供一种比较准确可靠的新方法。方法:应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠肾组织细胞核头半径、尾长度、头DNA含量比例、尾DNA含量比例、尾矩、Olive矩、头面积、尾面积8项参数的变化值。结果:在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径、头DNA含量比例、头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程和多元回归方程,均具有高度的统计学意义(P均<0.01)。结论:应用本研究提供的72h内肾组织组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,为法医学推断死后经过时间提供了一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

单细胞凝胶电泳技术研究兔牙髓细胞核DNA降解的时间效应

目的研究DNA降解变化与死亡时间关系,探讨兔死后牙髓细胞核DNA的降解机理及寻找灵敏、实用的DNA降解监测指标,为死亡时间的法医学研究提供一种新的方法和技术。方法利用快速、灵敏的检测细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳(SCG)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,以"彗星样"细胞出现率(计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例)、头半径、尾长度、头/尾DNA含量比例、Oliver矩、尾矩、头面积和尾面积来评价死后兔牙髓细胞核DNA的降解程度。结果在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径,头DNA含量比例,头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程(P<0.001),具有显著的统计学意义。结论应用单细胞凝胶电泳技术,监测机体死后牙髓细胞核DNA降解变化,将会成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

彗星试验检测大鼠死后肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系

 【目的】 探讨特定条件下,利用彗星试验测定SD大鼠死后6 ~ 48 h肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系&#65377;【方法】 健康成年雌性SD大鼠,按取材时间随机分为6组,每组3只&#65377;颈椎脱臼法处死动物,置于25.1 ℃(广州地区近5年10月份平均气温)培养箱中,分别于0&#65380;6&#65380;12&#65380;24&#65380;36&#65380;48&#65380;60 h取大鼠肾脏组织,制备单细胞悬液,进行彗星试验,荧光显微成像系统采集图像,采集相关参数(Comet 4.0)并进行Kruskal-Wallis检验&#65377; 【结果】 死后6 ~ 48 h, SD大鼠肾脏细胞DNA碎片随死亡时间延长而增加,尾长在死后各时间点依次呈明显的增长趋势,Oliver尾矩和尾DNA随死亡时间的延长,亦有一定的增长趋势,60 h未能测出&#65377;Kruskal-Wallis检验显示:各时间点彗星尾长均数的差异有高度显著性(P < 0.01);彗星尾矩均数在死后6 h和12 h差异无统计学意义(P > 0.05),24 h和36 h彗星尾矩均数差异有显著性(P < 0.05);尾DNA均数在6 h,12 h,24 h三个时间点差异无显著性(P > 0.05),但与36 h,48 h尾DNA均数的差异均有显著性(P < 0.05)&#65377;【结论】 SD大鼠肾脏细胞DNA降解随死亡时间延长而增加,彗星试验技术为死亡时间推断提供了重要的实验依据&#65377;     

单细胞凝胶电泳技术检测慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞DNA的损伤

目的　观察正常人及慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况。方法　利用快速、灵敏的检测细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术结合IMI1 0慧星分析软件 ,以“彗星”尾长、尾惯量、尾 %DNA、尾矩来评价淋巴细胞DNA的损伤程度。结果　慢乙肝患者外周血淋巴细胞DNA经SCGE ,形成的“彗星”尾长、尾惯量、尾 %DNA、尾矩较健康人明显增大 (P <0 0 5 )。结论　慢乙肝病毒感染可能是造成淋巴细胞DNA断裂损伤的主要原因     

单细胞凝胶电泳法检测HBV患者外周血淋巴细胞DNA损伤

目的 探讨乙型肝炎病毒与DNA损伤的关系以及不同感染模式慢性乙型肝炎患者（大三阳和小三阳患者）DNA损伤情况.方法 应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术检测对照组和不同感染模式慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况,采用彗星分析软件对实验结果进行淋巴细胞损伤率、彗星尾长（Tail Extent）、彗星尾DNA百分含量（Tail %DNA）、彗星尾惯量（Tail Inertia）、Olive尾距（Olive Tail Moment）等指标进行分析.结果 经SCGE技术后得HBV感染与DNA损伤断裂关系有统计学意义（P〈0.05）;大小三阳组间DNA损伤断裂有统计学差异（P〈0.05）. 小三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有少量彗星尾.大三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有明显彗星尾.慢性乙型肝炎组外周血淋巴细胞DNA损伤与对照组比较彗星尾长、尾惯量在统计学上有显著性差异（P〈0.05）;不同感染模式的乙型肝炎外周血淋巴细胞DNA损伤比较,尾长、尾DNA百分含量和尾惯量在统计学上有统计学差异（P〈0.05）.结论 HBV感染可能造成外周血淋巴细胞DNA损伤,且不同感染模式的损伤情况不同.     

单细胞凝胶电泳技术在胚胎毒性实验中的应用

目的:探讨和分析单细胞凝胶电泳技术(SCGE)的影响因素和实验中应该注意的环节.方法:通过对实验方法和操作技术的总结,对Singh提出的碱性SCGE进行适当的补充.结果:完善了SCGE的操作,获得了典型的彗星图像.结论:在实验中避免非特异性因素的影响,注意实验操作细节,能够增加SCGE的特异性和敏感性.     

死后角膜厚度的实验病理学研究

目的 :利用人体死后角膜增厚为推断死亡时间 (Timeofdeath ,TD)提供理论依据。方法 :用光学显微镜测量死后不同时间的角膜厚度 (Cornealthickness,CT)。结果 :死后 48h以内的角膜厚度增加与死后时间呈线性关系 :Y =5 16 + 10 .7X。结论 :法医可以通过测量角膜厚度推断早期死亡时间。     

单细胞凝胶电泳技术操作

目的 探讨单细胞凝胶电泳技术影响因素,总结其实验方法。方法 以Singh等提出的碱性SCGE为基础,并加以改进。结果 获得了典型的彗星图像,实验效果良好。结论 SCGE简便易行,应用广泛,但应注意控制影响因素,以保证其结果的可靠。     

晶状体上皮细胞DNA损伤的SCGE测定法

目的 研究晶状体上皮细胞DNA的损伤.方法 应用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定氧化、辐射及细胞外高糖、高钙环境对晶状体上皮细胞DNA的损伤.结果 对照组中晶状体上皮细胞呈圆形无拖尾,表明其DNA未受损伤.各处理组细胞呈不同程度的典型彗星图像,头尾分明,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.001).结论 以SCGE法测定出多种因素均可导致体外培养的晶状体上皮细胞DNA损伤,考虑其可能与白内障的形成有关.     

碱性单细胞凝胶电泳技术

目的 总结碱性单细胞凝胶电泳技术实验方法，探讨其影响因素。方法 以Singh等提出的碱性SCGE为基础，结合实验条件加以改进。结果 获得了典型的彗星图像，实验效果良好。结论 碱性SCGE简便易行，应用前景广泛，但实验中应控制影响因素以确保结果的准确性。     

Determination of the Early Time of Death by Computerized Image Analysis of DNA Degradation： Which Is the Best Quantitative Indicator of DNA Degradation？

This study evaluated the correlation between DNA degradation of the splenic lympho-cytes and the early time of death,examined the early time of death by computerized image analysis technique(CIAT) and identified the best parameter that quantitatively reflects the DNA degradation.The spleen tissues from 34 SD rats were collected,subjected to cell smearing every 2 h within the first 36 h after death,stained by Feulgen-Van's staining,three indices reflecting DNA content in splenic lymphocytes,including integral optical density(IOD),average optical density(AOD),aver-age gray scale(AG) were measured by the image analysis.Our results showed that IOD and AOD decreased and AG increased over time within the first 36 h.A stepwise linear regression analysis showed that only AG was fitted.A correlation between the postmortem interval(PMI) and AG was identified and the corresponding regression equation was obtained.Our study suggests that CIAT is a useful and promising tool for the estimation of early PMI with good objectivity and reproducibility,and AG is a more effective and better quantitative indicator for the estimation of PMI within the first 36 h after death in rats.     

Correlative Analysis on the Relationship between PMI and DNA Degradation of Cell Nucleus in Human Different Tissues

Summary： To determining the postmortem interval （PMI） through quantitative analysis of the DNA degradation of cell nucleus in human brain and spleen by using image analysis technique （IAT）. The brain and spleen tissues from 32 cadavers with known PMI were collected, subjected to cell smear every 1 h within the first 5-36 h after death, stained by Feulgen-Van＇s staining, Three indices reflecting DNA in brain cells （astrocytes） and splenic lymphocytes, including integral optical density （IOD）, average optical density （AOD）, average gray （AG） were measured by employing the mage analysis instrument. The results showed that IOD and AOD declined and AG increased with the prolongation of dead time within 5 36 h. A correlation between the PMI and gray parameters （IOD,AOD and AG） was identified and the corresponding regression equation was obtained. The parameters （IOD, AOD and AG） were proved to be effective quantitative indicators for accurate estimation of PMI within 5-36 h after death.     

脑梗死患者血液中DNA损伤的观察

目的: 应用碱性单细胞凝胶电泳(SCGE)对脑梗死患者急性期、恢复期血液中单个核细胞的DNA损伤与修复情况进行检测,判断脑梗死患者DNA损伤水平与病程的关系. 方法: 急性脑梗死患者24例,分别在发病5 d内及25～28 d抽取空腹静脉血3 mL, 1.5 mL用于SCGE检测,在荧光显微镜下观察单个核细胞的彗星率并分析慧尾DNA的含量. 1.5 mL分离血清,-20℃保存,用于神经元特异性烯醇化酶(NSE)测定,同时选取年龄、性别匹配的健康者20例作正常对照. 结果:脑梗死患者急性期血液中大多数单个核细胞出现彗星样改变,恢复期患者血液中彗星率下降,而同龄健康对照者血液中大多数单个核细胞表现为圆形,仅少数表现为略带拖尾的荧光改变. 急性期脑梗死患者NSE含量较对照组显著增加(P<0.01),而恢复期脑梗死患者NSE含量与对照组无显著差别. 结论: 自由基及DNA损伤修复在脑梗死的发生、发展及病理转归中起重要作用.     

顺铂联合环磷酰胺化疗对卵巢癌患者外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 初步探讨顺铂联合环磷酰胺（ＰＣ）化疗对卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ的损伤情况,为其临床用药方式提供理论依据。方法 采用单细胞凝胶电泳技术（ＳＣＧＥ）检测３１例卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ损伤状况。结果 化疗前的卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ断裂所形成的彗星出现率及彗星样尾长与对照人群相比,相差无显著性;经联合化疗后的卵巢癌患者比化疗前及对照组的彗星出现率明显增加,彗星样尾长明显加长,分别     

胭脂红对3T3细胞DNA损伤的SCGE检测

目的 研究人工合成偶氮类色素胭脂红对体外培养小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)DNA的损伤作用.方法 单层培养的3T3细胞中加入不同浓度胭脂红培养4 h,用碱性单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis, SCGE)检测3T3细胞DNA的单链断裂(single-strand breaks,SSBs)情况.结果 各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部DNA含量及尾矩与胭脂红浓度正相关,呈剂量-反应关系.结论 胭脂红对体外培养3T3细胞DNA具有损伤作用,浓度越大,损伤越严重.