盐附子遗传毒性研究

[目的]选用目前新药遗传毒性评价中推荐使用的3种试验方法(小鼠骨髓微核试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、体外CHL细胞染色体畸变试验)研究盐附子的遗传毒性. [方法]小鼠骨髓微核试验设3个盐附子给药剂量组(15.45、7.73、3.86 g生药/kg)、阴性对照组和阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg).Ames试验选用两种方法:直接法和代谢活化法.试验菌株为鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535,盐附子在试验中设6个剂量组(5.000、2.500、1.250、0.625、0313、0.156 mg生药/皿),同时设自发回复突变对照组、阳性对照组.体外CHL细胞染色体畸变试验也选用两种方法:直接法和代谢活化法.盐附子不加S9时处理终浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml,加S9时处理终浓度为2.5、1.25、0.625、0.313、0.156 mg生药/ml. [结果]小鼠骨髓微核试验盐附子各剂量组小鼠骨髓多染红细胞微核率与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).Ames试验盐附子在加或不加肝微粒体酶(S9)时均未见引起TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535试验菌株基因突变,即Ames试验阴性,试验重复一次,所得结论相同.体外CHL细胞染色体畸变试验盐附子在加或不加S9时均未引起CHL细胞的染色体畸变,试验结果为阴性,试验重复一次,所得结果相同.[结论]在实验室条件下,盐附子在小鼠骨髓微核试验、Ames试验及体外CHL细胞染色体畸变试验中均为阴性结果,故认为盐附子无遗传毒性.     

1,2,4-三唑-5-酮的遗传毒性研究

为探讨1,2,4-三唑-5-酮(TO)的遗传毒性,采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验),计算回复突变菌落数;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,计算小鼠股骨骨髓细胞微核率;中国仓鼠肺细胞(CHL)体外染色体畸变试验,观察染色体结构畸变类型并计算畸变率。结果显示,TO对TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535 5种鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞染色体无致畸作用,也无诱发骨髓嗜多染红细胞微核形成的作用,TO不具有潜在的遗传毒性。     

溴硝醇的致突变作用

目的研究常用化学添加抗菌剂溴硝醇的致突变性。方法通过CHL细胞染色体畸变试验、CHO细胞正向基因突变试验、Ames试验及小鼠骨髓微核试验等4个致突变生物学试验对溴硝醇进行致突变性研究。细胞染色体畸变试验,选用CHL细胞,设暴露浓度为30、10、5、2.5mg/L(-S9)和50、20、10、3mg/L(+S9)。正向基因突变试验,选用CHO细胞,设暴露浓度为20、10、5、2.5mg/L。Ames试验,选用TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535菌株,暴露浓度为50、25、12.5、6.25、3.125μg/皿(+S9),30、15、7.5、3.75、1.875μg/皿(-S9)。小鼠骨髓微核试验,60只小鼠随机分成6组,雌雄各半,雄性小鼠染毒剂量为20、40、80mg/kg;雌性小鼠为25、50、100mg/kg。结果 CHL细胞染色体畸变试验结果显示,各剂量组溴硝醇诱发的染色体畸变率均≤4.5%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。正向基因突变试验结果显示,各剂量组溴硝醇对CHO细胞突变频率,与阴性对照比较差异无统计学意义(P0.05)。Ames试验结果显示,各剂量组溴硝醇的回变菌落数均阴性对照组的自发回变菌落数的2倍,亦无剂量反应关系。小鼠骨髓微核试验结果显示,溴硝醇3个剂量组均未引起微核出现率增加。结论本研究条件下,溴硝醇无明显致突变作用。     

乙烷硒啉致突变试验研究

目的观察乙烷硒啉是否存在遗传毒性。方法应用Ames试验、中国仓鼠肺细胞体外培养染色体畸变试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,研究乙烷硒啉的致突变作用。结果Ames试验在〈400μg/皿浓度下未见回复突变菌落数显著增加;中国仓鼠肺细胞体外培养染色体畸变试验在〈3.3μg/ml浓度下未出现细胞染色体畸变率显著增高;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验在〈20.0g/kg剂量下未诱发微核细胞率的增高。结论乙烷硒啉在试验剂量范围内无致突变作用。     

某进口染发剂的致突变作用研究

目的 评价某进口染发剂的致突变作用.方法 采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)时.发现该进口染发剂具有明显遗传毒性.继而进行了小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠睾丸生殖细胞细胞染色体畸变试验.结果 该进口染发剂对TA97、TA98、TA100、TA1024个菌株Ames试验结果显示.当剂量为5 000和500μ...     

玻璃酸钠中间体遗传毒性试验

目的研究玻璃酸钠中间体的遗传毒性。方法采用鼠伤寒沙门菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames试验)、微核试验、染色体畸变试验研究玻璃酸钠中间体的遗传毒性。结果 (1)Ames试验:在加与不加大鼠肝微粒体酶(S-9)条件下,玻璃酸钠中间体在0.8~500μg/皿剂量范围内,各菌株回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系。受试物未引起TA97、TA98、TA100和TA102试验菌株基因突变,Ames试验阴性。(2)微核试验:玻璃酸钠中间体各剂量组(67、134、268mg/kg)所诱发的微核率分别为1.7‰、1.7‰和1.9‰,与阴性对照组(1.7‰)比较差异无显著性,说明在该试验条件下,该样品无致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核作用,小鼠骨髓微核试验呈阴性。(3)中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验:在加与不加S-9两种条件下,并于24 h后收集细胞进行染色体畸变分析,发现玻璃酸钠中间体各剂量组的染色体畸变率与阴性对照组相比差异无显著性。结论本试验条件下,玻璃酸钠中间体Ames试验结果为阴性,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果为阴性,无细胞毒性作用,体外哺乳动物细胞染色体畸变试验结果为阴性。     

新药轻灵一盐酸西部曲明的诱变性研究

目的：为确保国家二类新药‘轻灵-盐酸西部曲明’临床用药的安全性，对其作出可靠的毒理学评价。方法：采用Ames试验、体外染色体畸变分析试验和微核试验对其进行了体内外诱变性研究。Ames试验中，采用TA97、TA98、TA100、TA102四种菌株，平板掺入法，4个剂量进行了加与不加S9的试验；体外染色体畸变分析试验中，采用CHL细胞系，设4个剂量，进行加与不加S9的试验；在小鼠体内骨髓细胞微核试验中，采用80、27和9mg/kg剂量。结果：Ames试验加与不加S9的试验均末发现回变菌落数增加；体外染色体畸变分析试验各剂量组的染色体畸变率均末超过5％；小鼠体内骨髓细胞微核试验未发现骨髓细胞微核率增加。结论：在本试验条件下，末发现轻灵-盐酸西部曲明有诱变性。     

新药轻灵-盐酸西部曲明的诱变性研究

目的为确保国家二类新药‘轻灵-盐酸西部曲明'临床用药的安全性,对其作出可靠的毒理学评价.方法采用Ames试验、体外染色体畸变分析试验和微核试验对其进行了体内外诱变性研究.Ames试验中,采用TA97、TA98、TA100、TA102四种菌株,平板掺入法,4个剂量进行了加与不加S9的试验;体外染色体畸变分析试验中,采用CHL细胞系,设4个剂量,进行加与不加S9的试验;在小鼠体内骨髓细胞微核试验中,采用80、27和9mg/kg剂量.结果Ames试验加与不加S9的试验均未发现回变菌落数增加;体外染色体畸变分析试验各剂量组的染色体畸变率均未超过5%;小鼠体内骨髓细胞微核试验未发现骨髓细胞微核率增加.结论在本试验条件下,未发现轻灵-盐酸西部曲明有诱变性.     

重组葡激酶致突变作用研究

目的研究重组葡激酶的致突变作用.方法CHL细胞染色体畸变试验(±S9),剂量为4125、8250、16500AU/ml、Ames试验(±S9),剂量为16.5、165、1650、16500、165000AU/ml)和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验(肌肉注射剂量为83.5、167.0、334.0mg/kg).结果CHL细胞染色体畸变率均小于5%;各剂量组TA97、TA98、TA100、TA102各试验菌株MR＜2;各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率均小于2.00‰.结论重组葡激酶在本试验条件下无致突变作用.     

新型农用杀菌剂氰菌胺致突变实验研究

目的探讨氰菌胺原药的致突变作用。方法小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验分别以1000、500、250mg/kg剂量经口给药2d,小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验分别以2000、1000、500mg/kg剂量经口给药5d,观察骨髓嗜多染红细胞微核率及睾丸初级精母细胞染色体畸变率。鼠伤寒沙门杆菌回复突变试验(Ames试验),选用TA97、TA98、TA100和TA102菌株,试验剂量为5000、1000、200、40μg/皿,观察各菌株的回变菌落数。结果小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。Ames试验,氰菌胺原药各剂量组的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,亦未见剂量-反应关系,Ames试验结果为阴性。结论上述致突变试验结果表明氰菌胺原药无致突变作用。     

The cupric ion reducing antioxidant capacity and polyphenolic content of some herbal teas

The total antioxidant capacity of the aqueous extracts of some endemic herbs—prepared as infusions by steeping these herbs in hot water—was assayed with bis(neocuproine)copper(II) chloride, also known as the cupric ion reducing antioxidant capacity (CUPRAC) reagent, which was easily accessible, rapid, stable and responsive to both hydrophilic and lipophilic antioxidants. The highest antioxidant capacities of some herbal teas available in the Turkish market were observed for scarlet pimpernel (Anagallis arvensis), sweet basil (Ocimum basilicum), green tea (Camellia sinensis) and lemon balm (Melissa officinalis), in this order (1.63, 1.18, 1.07, and 0.99 mmol trolox equivalent (TR)/g, respectively). For infusions prepared from ready-to-use tea bags, the CUPRAC values were highest for Ceylon blended ordinary tea (4.41), green tea with lemon (1.61), English breakfast ordinary tea (1.26) and green tea (0.94), all of which were manufactured types of C. sinensis. Following the strongest antioxidant herbs with capacities close to or slightly exceeding 1.0 mmol TR/g, sage, thyme, coriander, coltsfoot, blackberry and immortelle (Helichrysum) exhibited capacities around 0.5 mmol TR/g. The correlation of the Folin total phenolic content of herbal teas with their CUPRAC and ABTS (2,2′-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt) total antioxidant capacities gave linear curves with correlation coefficients of 0.966 and 0.936, respectively, showing that the CUPRAC assay results better correlated with total phenolic content of herbal teas. Absorbance versus concentration data at different dilutions and upon standard additions of model antioxidant compounds (trolox and quercetin) to herbal tea infusions showed that the absorbances (at 450 nm of the CUPRAC method) due to different antioxidant compounds in herbal tea infusions were additive; that is, the tested antioxidants did not chemically interact to cause apparent deviations from Beer's law.     

酶反应比色法检测NK细胞介导的细胞毒作用问题的初步探讨

[目的与方法]采用51Cr释放法对MTT比色法及NAG释放法测定恶性肿瘤患者NK细胞介导的细胞毒活性的价值进行初步探讨.结果(1)两种非同位素方法所测外周血NK细胞活性与51Cr释放法之间均无相关性(P均＞0.05);(2)正常对照组效应细胞51Cr释放水平低于靶细胞(P＜0.01),肿瘤化疗组效应细胞51Cr释放水平则高于靶细胞(P＜0.01),且靶细胞与效应细胞的结果无相关性(P＞0.05).[结论]我们认为酶反应比色法不宜用于NK细胞介导的细胞毒活性测定.     

Measuring precision in bioassays: Rethinking assay validation

The m:n:θ_b procedure is often used for validating an assay for precision, where m levels of an analyte are measured with n replicates at each level, and if all m estimates of coefficient of variation (CV) are less than θ_b, then the assay is declared validated for precision. The statistical properties of the procedure are unknown so there is no clear statistical statement of precision upon passing. Further, it is unclear how to modify the procedure for relative potency assays in which the constant standard deviation (SD) model fits much better than the traditional constant CV model. We use simple normal error models to show that under constant CV across the m levels, the probability of passing when the CV is θ_b is about 10% to 20% for some recommended implementations; however, for extreme heterogeniety of CV when the largest CV is θ_b, the passing probability can be greater than 50%. We derive 100q% upper confidence limits on the CV under constant CV models and derive analogous limits for the SD under a constant SD model. Additionally, for a post‐validation assay output of y, we derive 68.27% confidence intervals on either the mean or log geometric mean of the assay output using either y±s (for the constant SD model) or (for the constant CV model), where s and r_G are constants that do not depend on y. We demonstrate the methods on a growth inhibition assay used to measure biologic activity of antibodies against the malaria parasite.     

自来水及水源水有机提取物类雌激素活性研究

为了检测自来水及水源水有机提取物的类雌激素活性 ,应用环境雌激素基因重组酵母、细胞增殖和子宫增重等三项短期生物学实验进行测定。结果发现 :水样有机提取物在相当于原水量 50ml时两项体外实验均检出雌激素活性 ,原水量 2 50ml时细胞增殖效应达到最大 ,以后随原水量增大细胞增殖效应逐步减弱。原水量 12 50ml时酵母菌β -半乳糖苷酶活性最强 ,以后随原水量增大 β -半乳糖苷酶活性逐步减弱。水厂水源水有机提取物低、中剂量组受试小鼠子宫湿重增加 ,与对照组比较有统计学意义 ,高剂量组湿重减少。提示水源水有机提取物具有类雌激素活性。采用这三项实验组成的生物学检测程序具有一定的灵敏度 ,且较快速、方便。     

环境雌激素的识别与评价

近年来,越来越多的研究表明野生动物和人类的生殖、发育和行为异常以及某些肿瘤发生率在上升,全世界许多科学家正致力于环境内分泌干扰物（EEDs）的研究。EEDs引起的许多不良效应与环境雌激素（EEs）有关。为了描述EEs的毒效应及其作用机制,建立了许多体内、体外试验方法,本文就EEs的识别与评价作一综述。     

子宫实验和E-SCREEN实验在检测雌激素活性中的相关性

目的　以 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )和四种植物提取物为受试物 ,研究子宫实验和E SCREEN实验在检测雌激素活性中的相关性。方法　断乳雌性小鼠 (1 0～ 1 2g)按体重分为 6组 ,分别给予小茴香、山豆根、补骨脂和川牛膝提取物 (1 0g kgBW ,ig)、1 7β E2 (0 5mg kgBW ,sc)和蒸馏水 (ig) ,持续 9天后处死动物剥离子宫称重。分别在人类乳腺癌MCF 7细胞培养液中加入四种植物提取物 (终浓度 1 0mg L)和 1 7β E2 (终浓度0 3μmol L) ,计算各组细胞在 1 2 0h内的平均群体倍增时间 ,分析小鼠子宫重量与细胞群体倍增时间的相关性。结果　 4种植物提取物均可使小鼠子宫重量增加 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ,细胞群体倍增时间缩短。子宫重量与群体倍增时间呈显著负相关 (r=- 0 96 7,P <0 0 1 )。结论　子宫实验和E SCREEN实验结果在检测雌激素活性物质时具有一致性     

Zebrafish as a novel model for non-typhoidal Salmonella pathogenesis,transmission and vaccine efficacy

Salmonella-induced gastroenteritis causes massive morbidity and mortality in both adults and children of developing countries. However, it is difficult to study the mode of infection and vaccine efficacy due to inadequacies of current animal models. For this reason, we have explored using zebrafish as an improved model for non-typhoidal Salmonella (NTS) infection, including Salmonella enterica Typhimurium, Salmonella enterica Enteritidis and Salmonella enterica Weltevreden. In this study, we found that after infection of zebrafish with NTS, severe diarrhea like symptoms were observed and NTS significantly colonized the zebrafish intestine without any manipulation of the normal intestinal microbiota of the fish. Furthermore, these strains can colonize for longer than 72 h and induce severe inflammation in the intestine, which may induce fish death. We also found that infected fish can transmit the pathogen into naïve fish. Moreover, we have established that zebrafish is an excellent model for vaccine study. Successive triple bath vaccination with heat-killed single serotype S. Typhimurium and S. Enteritidis immunogen induced protective efficacy against a high dose (10⁸ CFU/ml) of infection with these pathogens. This study provides a natural infection model for the study of NTS infection, transmission and vaccine efficacy.     

农药联苯菊酯对大鼠内分泌干扰作用的研究

目的通过大鼠子宫增重试验和Hershberger试验研究农药联苯菊酯(BIF)的内分泌干扰作用。方法子宫增重试验中,60只雌性SD大鼠随机分为6组,每组10只:BIF低、中、高剂量组分别经口灌胃给予1.47、4.41和13.23mg/kgBW的BIF;溶剂对照组经口灌胃给予玉米油;17α-乙炔雌二醇(EE)经口阳性组经口灌胃给予1.0μg/kg BW的EE,EE经皮阳性组经口灌胃给予玉米油并皮下注射0.6μg/kg BW的EE。连续给药3天后,测定大鼠子宫湿重、干重,计算其子宫系数,并观察病理变化。在Hershberger试验中,60只去势雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只:BIF低、中、高剂量组分别经口灌胃给予1.4、4.2和12.6mg/kg BW的BIF,阳性对照组经口灌胃给予3.0mg/kg BW的氟他胺,溶剂对照组和丙酸睾酮对照组(TP组)经口灌胃给予玉米油,除溶剂对照组外,其余各组均皮下注射给予0.2mg/kgBW丙酸睾酮。所有剂量组连续给药10天后,称量腹侧前列腺(VP)、精囊腺和凝固腺(SVCG)、肛提肌加球海绵体肌(LABC)、阴茎头(GP)、尿道球腺(COW)、肝、肾、肾上腺的重量,计算其脏器系数,测定血清中三碘甲腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)水平。结果子宫增重试验中,与溶剂对照组相比,BIF高剂量组子宫湿重系数和干重系数显著增加(P<0.05)。组织病理学检查发现,BIF中、高剂量组子宫内膜增生、增厚,子宫内膜上皮细胞高度增高(P<0.05)。Hershberger试验,与TP组相比,BIF高剂量组VP、LABC重量显著减轻,T3、T4水平显著降低(P<0.05)。结论子宫增重试验和Hershberger试验提示BIF具有潜在的内分泌干扰作用。     

海南岛不明发热病人血虫媒病毒分离鉴定及抗体检测

目的从海南岛不明发热病人血中分离和鉴定虫媒病毒,并在当地人群进行抗体检测,以了解南方地区虫媒病毒的感染情况。方法采用微量法细胞培养对205份发热原因不明患者血标本进行病毒分离,应用生物学性状检测、间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制试验(HI)等技术对分离病毒进行鉴定。采用IFA检测从当地人群血清中分离出的病毒的抗体水平。结果从发热早期患者血标本中分离出2株病毒,鉴定为甲病毒,命名为HF 7和HC 6。这2株病毒与8种甲病毒免疫腹水中的SIN的免疫腹水呈现最高的血凝抑制滴度(分别为1∶160和1∶320),与SIN免疫腹水的交叉荧光效价最高(分别为1∶320和1∶640),但HF 7和HC 6病毒的免疫腹水与8种甲病毒的血凝抑制试验和交叉免疫荧光试验无反应,表明HF 7和HC 6病毒虽与SIN病毒的免疫腹水血抑效价及荧光效价高,但HF 7和HC 6的免疫腹水与SIN病毒无抑制效价和免疫荧光效价。当地人群对这两株病毒感染的抗体阳性率分别为3.3%(15/451)和8.4%(38/451)。结论HF7和HC6为甲病毒的一个新种。海南岛人群存在甲病毒感染。     

铅致职业接触人群遗传损伤效应的研究

目的应用彗星试验和微核试验研究铅致职业接触人群遗传损伤效应。方法3家蓄电池厂的187名职业接触铅工人作为铅接触组,同时选择某镇无铅和其他职业危害接触史的村民179人作为对照组,进行彗星试验和微核试验。结果铅接触组彗星率、彗尾长度和微核细胞率均大于对照组,且差异有统计学意义(P<0.001);随着血铅或尿铅水平的增高,彗星率有增高趋势,微核细胞率仅在血铅>1.45μmol/L组或尿铅>0.58μmol/L组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论铅可引起职业接触人群遗传损伤,彗星试验可作为铅职业接触人群遗传损伤效应的检测方法。