成纤维细胞复合染料染色法

成纤维细胞是疏松结缔组织中常见的细胞,也是功能较重要的细胞.迄今为止,各种书籍、文献均介绍:在光镜下成纤维细胞轮廓不清,只能从核及胞质上辨别.给教学工作带来了极大的不便.为了改变这种状态,我们尝试用复合染料染成纤维细胞,得到了良好的效果.1 材料和方法(1)取材大白鼠肠系膜.(2)固定100%乙醇50ml,甲醇50ml配成的混合固定液,固定10分钟.(3)染色复合染料染色20分钟(复合染料配制:2%碱性品红,2%偶氮焰红,各50ml分别溶解后,两种溶液混合,滤过、沉淀,取沉淀物在烤箱中烤干,取沉淀物0.5克,加70%酒精100ml,再加三聚乙醛1ml为原液.取原液10ml加70%乙醇30ml,再加0.1     

细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)——用微量滴定板培养淋巴细胞7天后直接检查和半定量检查Ig阳性细胞

本文介绍检测免疫球蛋白阳性细胞(IpCS)的一种敏感ELISA技术。作者用5×10~3/mlTNP—SRBC 0.5ml免疫6—8周龄CBA系雌性小鼠,7天后取其脾(Sp)和肠集合淋巴结(Pp)分离淋巴细胞。用组织培养微量滴定板进行培养,分别加入LPS、LPS+ConA、SRBS进行刺激,培养7天后,做细胞ELISA检查IPC,并检查培养上清液Ig总量。细胞ELI-SA方法如下: 1、细胞培养7天后,取其上清液,保存于-20℃,每孔中加含0.05%吐温20的磷酸盐缓冲液(PBS/T)200±μl。在微量滴定板振荡器上振动30秒。2、然后用平板离心器800rpm离心10分钟,弃上清液后,37℃干燥30分钟。3、每孔加甲醇50μl,置室温固定5分钟,除去多余的甲醇,空气干燥微量板。     

甲型肝炎患者肠道内抗HA的IgA抗体的发现

甲型肝炎(HA)病毒在肠道内是否能形成局部免疫,还未有报导。作者报告,从发病早期起每日取HA患者大便作检查材料。结果发现在大便中有抗HA的IgA抗体,证     

发育期大白鼠卵巢对HCG的结合力

从出生前、新生的和出生后不同年令的大白鼠取出卵巢组织,作成匀浆,离心沉淀(100×g,20分钟)取相当于5毫克组织的上清液,加入不同量的~(125)I-hCG和非标记的hCG,在37℃下温培30分钟,而后测定卵巢组织对~(125)I-hCG的特异性结合。     

cAMP和ATP对狗针刺镇痛效应和胃牵拉反应的影响

根据在十三只狗进行的实验,我们看到,外源性cAMP ATP(用含cAMP、ATP各50 mg的生理盐水溶液10 ml,先由静脉缓慢匀速推注5 ml,5分钟注完。另 5 ml加生理盐水至30 ml,进行静脉滴注)能使痛阈     

一种新的快速产前诊断技术探讨——绒毛细胞荧光微核涂片法

取无遗传疾患家族史的6-7周人流绒毛组织20mg左右,共25例,用生理盐水洗净后,严格挑选出质软且具漂浮感的绒毛,然后移入含0.5μg/ml(最终浓度)秋水仙素的RPMI 1640中温育(PH 7.2,37%)1小时:去除培养液后分为二份,一份制备荧光微核:移绒毛组织于锥形离心管中,0.06 M氯化钾低渗6-7分钟,弃上清液后加入甲醇、冰醋酸(3∶1),固定30分钟,弃上     

老年人大肠癌手术前后不同时间内血浆ET-1水平观察

我们对76例老年大肠癌患者手术前、后三个不同时间内血浆中ET-1水平变化进行分析,现将结果报告如下。 资料和方法 一、临床资料:本组76例（男60,女16）,平均年龄62.5（60～76）岁。临床诊断均术前经电子肠镜、活检病理确诊。设30例非癌症肠道患者做对照,平均年龄61.5（60～67）岁。 二、方法:取肘静脉血5ml,置于含10％EDTA-Na_2 30IU和40IU抑肽酶试管中,混匀,4℃3000rpm/分离心10分钟,分离血浆,在-20℃保存待测。     

以全血快速分离染色体DNA新方法

本文介绍一种从冷冻的含柠檬酸盐的全血中快速分离染色体DNA的新方法,该法在90min内即可获得高质量的DNA,可用于限制酶切和PCR扩增等.并且该法不再使用有害的有机试剂,省略了相应烦锁的抽提步骤。具体方法为:将保存在0～20℃中的含柠檬酸盐的血样本(5ml)于37℃迅速溶化,加50ml裂解缓冲液(0.32M蔗糖,5mM MgCl_21％TritonX-100,0.01M Tris-HCI pH7.6)混匀后冰浴15min,4℃离心10min(6 800 g),弃上清液,沉淀溶解于50ml洗涤缓冲液内(10mM NaCl/10mM EDTA,pH8.0),再次4℃离心(6 300 g)10min,小心去除上清液,沉淀(白色)依次加入     

C3b致敏酵母凝集试验检测循环免疫复合物在临床上的应用

本文介绍C3b致敏酵母菌凝集试验经一步改良后提高了敏感度,并用于临床常规检查,得到满意的效果,敏感度近似Raji细胞法和C1q法。 一、方法:将标本血清1:8～64递倍稀释,各取0.1毫升加0.2％C3b致敏酵母菌液5滴(用5号针头滴管),混匀放37℃水浴30分钟后,加GVB缓冲液(5～7毫)混匀、离心、1,500转/分5分钟。倒尽上清液,沉淀再加0.1毫升1:20稀释的兔抗人     

根据外周血嗜中性粒细胞密度的变化评定机体过敏

白细胞功能性成熟度的客观指标之一是细胞的密度,用等密度离心法,白细胞正常密度为1.095～1.120g/cm~3。外周血幼稚的粒细胞比成熟的白细胞密度低。作者用变应原孵育白细胞,用离心法测定粒细胞移动指数,评定机体过敏;因为变应原促使粒细胞脱粒导致密度降低。方法:取静脉血加抗凝剂(肝素10u/ml),每200～500μl 一份,份数取决于变应原数;实验组加变应原,对照组加缓冲生理盐水,试样在37℃孵育60分钟,加入     

血浆环鸟苷酸对胆硷能药物的反应

作者选用200～280g之Wistar株大鼠于饥饿18～20小时后进行实验。在实验前以及注射药物后的不同间歇自尾静脉取血0.1ml,迅即与含10mMEDTA之生理盐水混和以防止环鸟苷酸(cGMP)被磷酸二酯酶水解,离心后,取上清液0.1ml用放射免疫法分析cGMP及cAMP。     

122例海洛因滥用者头发吗啡RIA

随着毒品滥用现象的蔓延,提供简便、经济、有效的毒品检测技术显得日益重要。本文采用本实验室改良的头发消化技术和RIA对122例海洛因滥用者及30名正常人头发吗啡含量进行检测分析,现报告如下。 方法和对象 一、方法: 头发的消化法:取被检者头发0.5g置于50ml梨形瓶内,加入0.3N NaOH溶液10ml煮沸15分钟,用9N HCl溶液调pH为7.0～7.2以3000rpm分~(-1)的速度离心5分钟,消化均匀,未见颗粒呈半透明状液体,取样100μl作RIA ~(125)Ⅰ-吗啡放免试剂盒由海军总医院提供,按说明书操作,用HH600型γ放免分析仪检测。     

固定剂中保存多年的骨髓和外周血标本的细胞遗传学分析

本文介绍的操作方法可以改善染色体的分散,并可对在固定液里保存15年的骨髓和外周血的细胞遗传学材料进行显带分析。材料与方法:将老的固定材料在1,000转/分下离心10分钟,去掉上清液,将细胞再悬浮于7～10毫升新配制的固定液(1:1的醋酸-乙醇)中。更换两次固定液以后,将悬浮的细胞置-15℃中30分钟。再更换     

虎杖有效成分白藜芦醇甙对大鼠内毒素性肺损伤的保护作用

本实验采用红细胞膜碎片生理盐水悬液0.3 ml/100g体重iv以封闭SD大鼠单核吞噬细胞系统(MPS),30min后静注灭活并反复冻融的大肠杆菌(O~(111)B_4)1000亿个细菌/ml的生理盐水悬液0.8ml/100g体重,复     

单克隆抗体免疫印染试验的应用——一种筒便快速特异鉴定虫媒病毒的新方法

应用单克隆体免疫印染法检测或鉴定流行性乙型脑炎等虫媒病毒抗原,方法简单、快速,绝大部分材料国产化,便于推广。 本法基本要点是:将病毒抗原(用PH9.0硼酸缓冲盐水制成的感染乳鼠脑悬液,经10,000转/分离心1小时的上清液)5μl,滴以小方片硝酸纤维膜(浙江黄岩人民化工厂)     

Lactobacillus casei胞外多糖对BALB/c小鼠肠相关淋巴细胞调控的初步研究

目的:探讨干酪乳杆菌胞外多糖(EPS)对BALB/c小鼠小肠相关淋巴细胞增殖及细胞因子TNF-α、IL-17及IFN-γ分泌的影响.方法:Percoll不连续密度梯度分离法从小鼠小肠中分离上皮内淋巴细胞(IEL)、固有层淋巴细胞(LPL)、派氏集合淋巴结淋巴细胞(PPL)和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL).实验组分别加入10、25、50、100和200 μg/ml浓度的干酪乳杆菌胞外多糖.水溶性四氮唑(WST-1)法检测淋巴细胞增殖;ELISA法测定细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-17及IFN-γ的含量.结果:EPS能够一定程度地促进IEL、LPL、PPL的增殖,且均在100 μg/ml浓度时达到最大值,在50～ 200 μg/ml浓度范围内促进MLNL增殖呈剂量依赖性,EPS能够使IEL、LPL和PPL上清液中TNF-α含量降低,且在50～ 200 μg/ml浓度时差异极显著(P＜0.01),但对MLNL分泌TNF-α无明显抑制作用,在200 μg/ml时有显著提高(P＜0.01);EPS可以使IEL、LPL、PPL及MLNL上清液中IL-17含量升高;EPS对IEL、LPL、PPL及MLNL上清液中IFN-γ无明显影响.结论:EPS可以促进小鼠小肠相关淋巴细胞的增殖,并能够调控细胞因子TNF-α及IL-17的分泌水平.     

人主动脉平滑肌细胞对淋巴细胞迁移的影响

一、材料和方法1．人主动脉平滑肌细胞条件培养液制备：取4～6个月水囊引产胎儿生动脉，撕去外膜，刮除内膜后用0.2％胶原酶门型，Sigma公司）消化法收集细胞常规培养，取4～6代细胞由典型峰、谷状生长至基本融合时去除原培养液，PBS洗3次，加入不含抗菌素之10％小牛血清培养液（IMDM，GibCoLab出品）继续培养48／小时，收取培养液，1000r／min离心10分钟，取上清液即为平滑肌细胞条件培养液（SMC－CM），-30℃保存。2．淋巴细胞分离：取正常健康人肝素化全血，分离并去除单核细胞，收集淋巴细胞即求激活淋巴细胞。以5×105个细胞／m…     

脑梗塞患者血浆ET RIA

本文通过脑梗塞患者血浆ET含量的变化,以探讨与脑梗塞的关系。 材料和方法 一,正常对照姐:30例(男15,女15)健康体检人员,年龄20～66岁。 二,脑梗塞组:25例(男15,女10)脑梗塞患者,均为我院住院病人,年龄50～81岁,CT、MRI和临床诊断为急性脑梗塞。 三,标本收集:采静脉血5ml,置于含10％EDTA-Na-2 60μl和10μl抑肽酶试管中混匀,4℃3000rpm离心10min,取血浆2ml,-30℃保存待用。 四,方法:采用RIA血浆样本直接测定法,ET     

小鼠巨噬细胞吞噬功能检测方法的改进

<正> 在徐淑云介绍的用新鲜鸡红细胞(CRBC)作为吞噬物,半体内法测定小鼠巨噬细胞(Mφ)吞噬功能的基础上,我们进行了改进。其一将CRBC进行醛化。取阿氏液抗凝的新鲜CRBC用生理盐水离心洗2次,1ml压积的CRBC中加入24ml生理盐水、0.1ml 25％戊二醛,吹打均匀,室温下摇动30分钟,用生理盐水洗3次,4℃可存1年,使用时配成1％浓度;其二省去Mφ与吞噬物在玻片上于37℃温育使之贴壁的步骤,而将1％醛化CRBC注入小鼠腹腔,待作用1小时后,处死小鼠、用洁净玻片在暴露的腹     

红细胞包蔽小分子物质过程中高渗葡萄糖的脱水效果及其变形性变化

依据红细胞(RBC)的脱水效果 ,研究RBC包蔽小分子物质过程中全血与50%葡萄糖(GS)溶液混合的最佳比例 ,以及脱水RBC置于等渗溶液中变形能力的恢复情况。方法(1)测定全血与50%GS溶液不同容量比混合后的红细胞压积(HCT) ;(2)观测脱水RBC置于生理盐水中变形能力的变化。结果(1)全血与50%GS溶液按不同容量比混合后置于生理盐水的HCT均显著降低 ;混合30min和60min标本HCT的降低均以全血与50 %GS溶液容量比为2ml:1ml混合时的降低程度最大 ;(2)脱水30min的RBC置于生理盐水后其变形性2h左右即恢复正常 ,脱水60minRBC的变形性至8h仍未恢复。结论RBC包蔽小分子物质时 ,全血与50%GS溶液的容量比以2:1混合时RBC的脱水效果最好 ;脱水时间控制在30min左右时 ,脱水RBC于生理条件下其变形性2h左右即恢复正常