芦荟多糖干预的PBMC对肝癌细胞生长的影响

目的:研究芦荟多糖(AP)干预的外周血单个核细胞(PBMC)对体外肝癌细胞(HepG2)生长的影响,从免疫学角度探讨AP的抗肿瘤机理。方法:Alamar Blue法检测AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2对体外培养的PBMC生长的影响;以各组干预后的PBMC为效应细胞,HepG2为靶细胞,MTT法观察各组效应细胞对靶细胞杀伤活性的影响;流式细胞术PI单染法检测各组效应细胞对靶细胞细胞周期及凋亡率的影响。结果:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可显著促进PBMC的增殖;各组效应细胞可显著抑制靶细胞的生长,降低S期比例,提高G1比例和凋亡率。其中AP联合Anti-CD3mAb与rhIL-2干预的PBMC对靶细胞生长的抑制率可达46.30%,靶细胞S期比例,G1期比例和凋亡率明分别为24.37%,75.63%和30.37%。结论:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可提高PBMC抑制肝癌细胞生长的活性。     

光诱导金丝桃素对人鼻咽癌细胞CNE-2的毒作用和凋亡研究

目的:探讨以发光二极管为光源,金丝桃素光动力疗法对体外培养鼻咽癌细胞CNE-2的毒作用和凋亡影响。方法:体外培养CNE-2细胞分别加入不同浓度的金丝桃素,另设血卟啉阳性对照组,避光培养6h,分别用黄色和红色发光二极管照射90min,积累能量为5.67J/cm2,培养24h后用MTT法检测金丝桃素和血卟啉在光照条件下对鼻咽癌细胞CNE-2的影响,并用流式细胞仪进行细胞周期分析和凋亡检测。结果:MTT结果显示光活化金丝桃素和血卟啉呈剂量依赖性抑制鼻咽癌细胞的生长,IC50分别为0.049和0.650μg/mL;流式细胞仪分析表明金丝桃素经光照后,可使细胞停留在S期和G2期,并诱导细胞凋亡,0.20μg/mL金丝桃素作用18、28、48h,凋亡率分别达到9.97%、72.19%、92.24%。结论:金丝桃素经光诱导后,可有效抑制体外培养鼻咽癌细胞的增殖,并诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

黄连提取物对肝细胞生长因子受体的特异性抑制作用

目的:观察黄连提取物对HepG 2细胞生长的影响,探讨黄连提取物的作用机制。方法:HepG 2细胞培养基中加入肝细胞生长因子,形成过量表达受体酪氨酸激酶(RTK)的HepG 2细胞,加入黄连提取物,测定细胞生长活性、HGFR和P-HGFR的表达水平(活性)。结果:黄连提取物对HepG 2细胞生长、HGFR和P-HGFR的表达水平(活性)均有不同程度的抑制作用。结论:黄连提取物通过抑制RTK而抑制肿瘤细胞的生长。     

仙鹤草对人肝癌HepG2细胞凋亡作用研究

目的：探讨仙鹤草丙酮提取物正丁醇层对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的仙鹤草丙酮提取物正丁醇层作用于体外培养的HepG2细胞,MTY法检测细胞生长抑制率,应用FCM检测细胞凋亡率。应用FCM检测细胞内活性氧的变化。结果：仙鹤草可显著抑制HepG2细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。结论：仙鹤草丙酮提取物正丁醇层能诱导细胞发生凋亡;细胞内活性氧的增加可能是其作用机制。     

蒙药梅花草乙醇提取物对肝癌细胞增殖作用的实验研究

目的:研究蒙药梅花草的乙醇提取物对人肝癌细胞(HepG2细胞)的体外增殖抑制作用。方法:采用MTT法检测梅花草乙醇提取物的不同剂量组对HepG2细胞增殖的抑制作用;ELISA检测HepG2细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达变化情况。结果:梅花草乙醇提取物处理HepG2细胞24h后,可以明显抑制HepG2细胞的增殖。与对照组相比,梅花草的乙醇提取物可以明显升高HepG2细胞的Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P0.05和P0.05)。结论:蒙药梅花草的乙醇提取物体外对HepG2细胞的增殖有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究

目的研究水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法以液氮快速冻融法制备水蛭提取物,以常规水提醇沉法水蛭提取物作对照,不同浓度体外干预人肝癌HepG2细胞,MTT法检测两种水蛭提取物对HepG2细胞增殖的抑制作用,并进行细胞计数,吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果水蛭液氮快速冻融法提取物药物浓度为6-15mg／mL时,对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉法提取物比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。吖啶橙染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。结论水蛭液氮快速冻融法提取物可体外抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,其作用明显优于水蛭水提醇沉法提取物。     

何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和 肝癌HepG2细胞的杀伤作用

目的:考察何首乌不同分离部位对入正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用,寻找能明显杀伤肝癌细胞但对正常肝细胞生长影响较小的分离部位,并初步探讨其对2种细胞不同作用的机制.方法:何首乌70％乙醇提取物经AB-8型大孔树脂吸附,依次用水、50％乙醇和95％乙醇洗脱得到何首乌乙醇提取物的水洗脱部位(RW)、50％乙醇洗脱部位(R50)和95％乙醇洗脱部位(R95);体外培养人正常肝L02细胞及肝癌HepG2细胞,用含何首乌各分离部位的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,MTT检测及倒置镜下观察约物对L02及HepG2细胞生长的影响,筛选具有区别杀伤作用的部位,考察其剂量和时间作用效应.进一步通过Giemsa染色观察药物作用后细胞核的变化,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况.结果:MTT和倒置镜下镜检结果均表明,R50对L02细胞和HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用.Giemsa染色和流式细胞术结果表明,R50诱导2种细胞凋亡的程度不同:试验的各个时相下HepG2中凋亡细胞的比例均明显高于L02细胞(HepG2细胞中凋亡细胞的比例在24,48,72 h分别为83.62％,60.52％,74.49％,L02细胞中凋亡细胞的比例则分别为31.02％,20.57％,25.32％,2种细胞阴性对照组中凋亡细胞的比例在各个时相均小于5％),但对2种细胞的细胞周期没有明显影响.结论:何首乌提取物的R50部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用,区别杀伤作用的本质是药物诱导2种细胞凋亡的程度不同.     

人参皂苷Rb1拮抗肝癌细胞抑制NK细胞免疫功能的研究

目的研究人参皂苷Rb1拮抗肝癌细胞下调自然杀伤细胞(NK细胞)免疫功能的作用,并探讨其分子机制。方法获取经过人参皂苷Rb1作用后肝癌细胞(HepG2)的培养上清以及未经其作用的HepG2的培养上清,比较2种上清中TGF-β1的水平(ELISA法);比较2种上清对NK细胞的胞毒效应分子颗粒酶B及NK细胞杀伤功能的影响。结果HepG2培养上清中含有TGF-β1,经过上清预处理的NK细胞表达胞毒效应分子颗粒酶B减少,杀伤功能受抑制。人参皂苷Rb1可以拮抗HepG2的免疫抑制作用:降低HepG2培养上清中TGF-β1的含量;同时经过与未经过人参皂苷Rb1作用的HepG2培养上清分别用来处理NK细胞,前一种上清处理过的NK细胞在颗粒酶B的mRNA水平以及杀伤功能上都较后一种上清处理过的NK细胞有所增加。结论 HepG2通过分泌抑制性细胞因子TGF-β1以及减少NK细胞表达胞毒效应分子颗粒酶B从而抑制NK细胞的杀伤功能,而人参皂苷Rb1通过拮抗HepG2对NK细胞的免疫抑制,使得NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力有所恢复,从而发挥了抗肿瘤效应。     

红藤提取物联合5-氟尿嘧啶抑制肝癌细胞生长作用及机制研究

目的研究红藤提取物联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,以不同质量浓度的红藤提取物作用于细胞,采用MTT法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将HepG2细胞分为对照组、红藤提取物(40 mg/L)组、5-氟尿嘧啶(10μmol/L)组及联合用药(红藤提取物40 mg/L+5-氟尿嘧啶10μmol/L)组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)表达水平。结果 MTT检测结果显示,红藤提取物呈质量浓度依赖性地抑制HepG2细胞增殖,选择其质量浓度为40mg/L用于后续实验。与对照组比较,红藤提取物组和5-氟尿嘧啶组细胞增殖抑制率显著升高,G_0/G_1期细胞比例显著升高,S期和G2/M期细胞比例显著降低,细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白的表达显著降低(P0.05)。与5-氟尿嘧啶组比较,联合用药能显著抑制HepG2细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达(P0.05)。结论红藤提取物联合5-氟尿嘧啶能够增强对HepG2细胞生长的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平有关。     

芹菜素对人肝癌HepG2细胞糖酵解的影响及体内实验研究

目的:探究芹菜素对人肝癌细胞(HepG2)体内、外糖酵解的影响及其作用机制。方法:体外采用溴脱氧尿苷(BrdU)掺入免疫荧光实验检测芹菜素对HepG2细胞增殖的影响;检测芹菜素对肿瘤细胞葡糖糖摄取和乳酸生成的影响;Western blot检测芹菜素对糖酵解相关蛋白-丙酮酸脱氢酶激酶1(PDHK1)、己糖激酶II(HKII)和乳酸脱氢酶A(LDHA)表达的影响;EMSA检测芹菜素对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与DNA结合活性的影响;体内利用HepG2细胞裸鼠模型研究芹菜素对瘤体积、瘤重及瘤组织内糖酵解相关蛋白的影响。结果:在体外,芹菜素在20～80μmol/L可以浓度依赖性地抑制HepG2BrdU阳性细胞的比例(P0.01),抑制HepG2细胞葡糖糖摄取和乳酸生成(P0.01),同时降低糖酵解相关蛋白(PDHK1,HKII,LDHA)的表达(P0.01),并抑制HIF-1α与DNA结合活性(P0.01)。在体内,芹菜素在100、200、400 mg/kg可以抑制裸小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为22.33%、37.32%和53.67%;芹菜素还可以降低瘤组织内糖酵解相关蛋白的表达。结论:芹菜素在体内外均可以抑制肝癌细胞的增殖和糖酵解,其机制可能是通过抑制HIF-1α与DNA结合活性而起作用的。     

钩吻总碱对肝癌细胞HepG2的体外抑制作用

以结晶紫染色法测定钩吻总碱对肝癌细胞HepG2细胞的抑制作用,光镜观察HepG2的细胞形态变化,流式细胞仪测定分析HepG2的细胞周期变化。钩吻总碱浓度为10μg/ml时,显著抑制HepG2细胞增殖（P＜0．05）,其作用具有剂量和时间依赖性。经钩吻总碱作用后,HepG2细胞呈现核染色体断裂、核固缩等形态变化,在细胞DNA直方图上出现明显的亚二倍体峰。结果表明钩吻总碱对肝癌细胞HepG2生长有明显的抑制作用,这种作用可能与其诱导肿瘤细胞产生凋亡相关。     

硇砂提取物治疗小鼠Lewis肺癌的效果初步评价

目的评价硇砂提取物治疗小鼠Lewis肺癌的效果及对免疫系统的毒性.方法采用MTT法及流式细胞仪分别检测Lewis肺癌细胞的增殖和细胞周期,采用小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤模型观察硇砂提取物的抗肿瘤作用,通过小鼠碳粒廓清和迟发性变态反应考察硇砂提取物对免疫系统的毒性.结果硇砂提取物可剂量依赖性抑制Lewis肺癌细胞的增殖,使细胞周期停止于S期.硇砂提取物水溶液连续瘤内给药8 d对小鼠Lewis肺癌皮下肿瘤的抑瘤率为46.7%,但同时灌胃给药对肿瘤的抑瘤率仅为15.7%.硇砂提取物水溶液皮下注射或灌胃给药对小鼠碳粒廓清能力及迟发性变态反应均无明显影响.结论硇砂提取物的抗肿瘤作用与给药途径有关,其对机体自身的免疫功能无明显影响.     

小柴胡汤对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响

目的探讨小柴胡汤45%乙醇提取物对体外培养人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其可能的机理。方法采用ATP-Lite法测定不同浓度小柴胡汤对体外培养的HepG2增殖的作用,同时利用氧自由基清除能(ORAC)法测定样品的抗氧化活性;以LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO),Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察样品对NO生成的影响。结果小柴胡汤在62.5～500mg/L浓度范围内可以显著抑制HepG2增殖,抑制作用呈剂量相关性,计算半数抑制浓度(IC50)为(90.7±23.7)mg/L。小柴胡汤提取物具有一定的抗氧化活性,其抗氧化能力为阳性对照维生素C的1.3倍。小柴胡汤在3.125～50mg/L浓度范围内均可以显著抑制NO的生成(P0.05,P0.01)。结论小柴胡汤具有体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,其抑制作用可能与其抗氧化活性及抑制NO生成有关。     

瑞香狼毒系统溶剂法分离提取部位的体外抗肿瘤活性

目的:分离筛选瑞香狼毒中抗肿瘤活性部位.方法:用系统溶剂法对瑞香狼毒95%乙醇提取物进行分离,MTT比色法对分离得到的部位进行体外抗肿瘤活性的测定.结果:石油醚提取物和氯仿提取物对体外培养肿瘤细胞表现出较强的抑制作用,在测定浓度范围内呈现出良好剂量依赖性抑制作用,而正丁醇和甲醇提取部位在测定浓度范围内则显示出很弱的抑制作用;在各提取部位中石油醚提取物的体外抗肿瘤作用最强.结论:石油醚提取部位是瑞香狼毒中的体外抗肿瘤活性部位.     

红缘拟层孔菌子实体中抗肿瘤活性成分研究

目的对红缘拟层孔菌Fomitopsis pinicola子实体的石油醚提取物、氯仿提取物、水层提取物和氯仿提取物中获得的化合物A(3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸)进行了体内外抗肿瘤活性和细胞凋亡实验研究。方法通过测定脾脏指数、胸腺指数以及血清中白介素-2(IL-2)的含量,检测了各提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果氯仿提取物和化合物A对H22荷瘤小鼠具有较高的抑瘤率,当氯仿提取物剂量为200 mg.kg-1.d-1时,抑瘤率为52.97%,胸腺指数明显高于对照组和环磷酰胺(CTX)组(P<0.05),而接近于正常组(P>0.05);脾脏指数接近于对照组和CTX组而明显高于正常组(P<0.01);IL-2的含量明显升高;化合物A具有较好的抗肿瘤作用,各剂量组之间存在良好的剂量关系;且同对照组相比存在显著性差异(P<0.01);在剂量为10mg.kg-1.d-1时,抑瘤率最高可达到52.31%。体外实验研究结果表明化合物A对人肝癌细胞SMMC-7721和人乳腺癌细胞MCF-7均具有良好的抑制作用,其抑制率最大分别为77.63%和90.29%,IC50分别为213.80μg/ml和123.03μg/ml。化合物A作用后的细胞凋亡率仅为23.2%,接近阴性对照组的20.9%,促进细胞凋亡效果不明显。结论结合体内外实验可推断化合物A(3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸)为红缘拟层孔菌抗肿瘤活性成分之一,提高机体免疫活性可能是其抗肿瘤作用的机理之一。     

青龙衣不同萃取部位抗肿瘤活性研究

目的研究青龙衣乙醇提取物及不同溶剂萃取部位对肿瘤细胞的体外抑制作用,筛选青龙衣抗肿瘤活性部位。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,选用4种细胞株（SGC-7901,HepG-2,HCT-8,Capan-2）进行体外实验,对青龙衣不同萃取部位的抗肿瘤活性进行筛选。结果青龙衣乙醇提取物、石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用。其中青龙衣乙醇提取物对SGC-7901,HepG-2,HCT-8,Capan-2的IC50分别为47．18,31．12,35．45,27．81mg／L;石油醚部位对SGC-7901,HepG．2,HCT．8,Capan-2的IC50分别为56．72,57．14,25．96,15．21mg／L;氯仿部位对SGC-7901,HepG-2,HCT-8,Capan-2的IC50分别为32．08,29．59,32．47,60．72mg／L;乙酸乙酯部位对SGC-7901,HepG-2,HCT-8,Capan-2的IC50分别为35．79,35．48,24．48,25．46mg／L。正丁醇部位和水溶性部位对各肿瘤细胞无抑制作用。结论青龙衣的乙醇提取物、石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位有一定的细胞毒作用,石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位初步确定为青龙衣抗肿瘤活性部位。     

穿山龙米曲霉固体发酵物总皂苷的抗肿瘤活性研究

目的探讨穿山龙药材固体发酵对抗肿瘤活性的影响,并研究其抗肿瘤机制。方法 70%乙醇回流法对穿山龙药材以及穿山龙药材米曲霉固体发酵产物进行提取;D101树脂纯化;MTT法,双染法以及Western blotting探讨穿山龙总皂苷和穿山龙米曲霉发酵物总皂苷对HepG2的作用及机制。结果 MTT法结果显示穿山龙总皂苷和穿山龙米曲霉发酵物总皂苷均能使HepG2细胞存活率下降,呈现剂量依赖性;双染法结果表明不同浓度穿山龙总皂苷和穿山龙米曲霉发酵物总皂苷均可诱导HepG2细胞凋亡(P<0.001),凋亡比例明显呈浓度依赖性的升高;Western blotting结果显示,不同浓度穿山龙总皂苷和穿山龙米曲霉发酵物总皂苷处理的HepG2细胞,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白表达水平无显著差异。结论穿山龙药材经过米曲霉固体发酵前后,均具有抗肿瘤活性,发酵没有使穿山龙药材抗肿瘤活性发生改变,均对HepG2细胞具有促进凋亡的作用,其机制可能为上调caspase-3的表达,对其上游Bax及Bcl-2的表达没有明显影响。     

沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用

目的:观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法:采用MTT法观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的抑制作用,进一步观察沙苑子黄酮对HepG2细胞形态、超微结构、生长曲线以及集落形成的影响。结果:沙苑子黄酮可明显抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和集落的形成,50μg/mL剂量组集落形成率为25.6(P<0.01),远低于对照组;光镜及透射电镜可以发现细胞形态有凋亡特征变化。结论:沙苑子黄酮体外对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

化香树果序挥发油的气相色谱-质谱联用分析及体外抗肿瘤活性研究

目的：研究化香树果序挥发油的化学成分及其体外抗肿瘤活性。方法：采用水蒸气蒸馏法从化香树果序中提取挥发油,通过气相色谱-质谱联用技术对其挥发油成分进行分析;采用MTT法观察其对人肝癌HepG2细胞、人鼻咽癌CNE-2细胞及人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率及半数抑制浓度（IC50）。结果：从挥发油中共鉴定出28个化合物,占总离子流图峰面积的94．10％,其中含量较高的组分为（Z,Z,Z）-9,12,15-十八碳三烯酸（44．48％）、十六烷酸（23．30％）和斯巴醇（3．20％）等。化香树果序挥发油对人肝癌HeDG2细胞、人鼻咽癌CNE-2细胞及人宫颈癌HeLa细胞均表现出不同程度的抑制活性,IC50值分别为848．554、451．835、301．253μg／mL。结论：化香树果序挥发油具有多种活性成分,对人肝癌HepG2细胞、人鼻咽癌CNE2fi~胞及人宫颈癌HeLa细胞均显示出了一定的抑制活性。     

香加皮不同提取部位体外抗肿瘤活性实验研究

[目的]筛选香加皮的抗肿瘤活性部位.[方法]用大孔吸附树脂柱层析法对香加皮的和60%乙醇回流提取物进行分段处理,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定各提取部位体外抗肿瘤活性.[结果]70%乙醇洗脱部位对体外肿瘤细胞表现出抑制活性,并在测定浓度范围内呈现出良好剂量依赖性.95%乙醇洗脱部位的抑制作用较弱.而水洗脱物和20%乙醇洗脱物则未呈现出抗肿瘤活性.在各提取部位中70%乙醇提取物活性最强.[结论]70%乙醇提取部位是香加皮主要的体外抗肿瘤活性部位.