肾阳虚证基因表达谱的研究进展

肾阳虚证的本质一直是中医的研究重点,基因芯片技术为肾阳虚证的微观整体研究开辟了一个前所未有的领域。肾阳虚证动物模型的基因表达谱研究主要包括肾阳虚证皮质酮大鼠和肾阳虚证"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠的基因表达谱研究。临床肾阳虚证基因表达谱研究包括肾阳虚体质青少年差异表达基因研究、肾阳虚骨关节炎基因表达研究、典型肾阳虚家系基因表达研究、老龄肾阳虚证基因表达谱研究。针对肾阳虚证基因表达谱的研究现状,提出了一些自己的思路和看法。     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

运用基因芯片技术分析老龄肾阳虚证与Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的：采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路上基因表达异常间的联系。方法：筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u33Plus2.0基因表达谱芯片,比较两组间在Wnt/β-catenin信号通路上的差异表达基因。结果：芯片数据组间比较后在Wnt/β-catenin信号通路上获得5条差异表达基因。讨论：老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路的调控紊乱之间有必然联系,衰老机制可能是这一联系的关键。     

右归丸调控老龄肾阳虚免疫相关基因表达水平的研究

目的:研究右归丸对老龄肾阳虚体质干预前后其免疫相关基因定量表达水平的差异,探讨右归丸调控的分子靶向。方法:基于课题组前期获得的老龄肾阳虚证差异基因表达谱,筛选免疫相关差异表达基因28条。纳入老龄肾阳虚体质者,给予右归丸治疗28 d,以肾阳虚半定量诊断标准进行疗效评价,采用RT-PCR技术检测右归丸对老龄肾阳虚干预前后28条免疫相关基因的定量表达水平差异。结果:28条免疫相关基因经右归丸干预前后有7条基因存在表达水平差异。结论:经PCR验证的老龄肾阳虚免疫相关差异表达基因集中反映了肾阳亏虚对免疫系统功能的影响,提示肾阳虚体质与肿瘤发生可能存在某种关联机制。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

肾阳虚证患者血液生化、免疫指标与基因表达谱结果的对比研究

目的:对比研究肾阳虚寒证患者血液生化、免疫指标以及差异基因表达谱的临床应用价值。方法:针对一个典型肾阳虚家系15个成员,运用现代检测技术进行血液生化、免疫学指标检测,同时采用人类Oligo芯片杂交技术对其外周血单个核细胞的差异基因表达谱进行分析研究。结果:虽然每个成员分别出现了2-8项异常血液学指标,但整体而言,该家系肾阳虚患者与正常人之间在糖、蛋白质、脂类代谢上和体液、细胞免疫方面无明显差异(P>0.l);而5张芯片的杂交结果显示,共有53个基因反复出现在差异基因表达谱之中,这些基因可能在肾阳虚寒证的发生发展中起着关键性作用。结论:常规血液生化、免疫学指标对肾阳虚寒证的参考意义不太大,而芯片检测技术以及由此获得的差异表达基因谱在中医证候研究中具有潜在的临床应用价值。     

右归丸对围绝经期综合征/肾阳虚证基因表达谱的影响

目的:研究右归丸对围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱治疗前后的异同。方法:以围绝经期综合征肾阳虚证患者为对象,服用右归丸一个月,应用基因芯片技术,分析治疗前后围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱;结合SAM软件对差异表达基因进行筛选并分析。结果:经核酸定量分析仪检测,6例患者RNA的OD260/OD280比值在1.90~1.98,经琼脂糖凝胶电泳检测,28s和18 s条带清晰,28 s条带约是18 s条带的2倍,说明RNA完整性较好;治疗前后基因表达谱存在明显的差异,表达有差异的基因共81条,ratio值≤0.5的基因62条;ratio值≥2的基因19条,下调基因大于70%,获得基因主要是与免疫应答、代谢通路、信号通路、氧化应激、细胞因子相关基因等,差异表达基因的信号值区为治疗前与治疗后两大类,说明与临床治疗结果符合。结论:围绝经期综合征肾阳虚证患者通过右归丸治疗后,下调基因超过70%,且主要与多种代谢途径密切相关。     

肾安冲剂治疗脾肾阳虚型原发性肾病综合征的研究

目的　观察肾安冲剂治疗脾肾阳虚型原发性肾病综合征的临床疗效。方法　选取脾肾阳虚型原发性肾病综合征患者 90例 ,随机分为中医组、西医组及中西医组各 30例 ,分别予肾安冲剂、泼尼松、肾安冲剂与泼尼松口服治疗 ,观察比较治疗前后血脂、血液流变学等指标的变化。结果　 3组疗效比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;但中药组和中西医组尿蛋白明显降低 ,血浆白蛋白明显增加 ,血脂和血液流变学各指标明显改善 ,且中药组在治疗过程中未发现不良反应。结论　肾安冲剂治疗原发性肾病综合征 (脾肾阳虚型 )疗效确切 ,有临床使用价值。     

肾阳虚证辨证诊断标准的专家评价

证候诊断的客观化、标准化一直是制约中医药学科发展的瓶颈。在长期开展肾阳虚证定性和半定量化诊断的理论和临床研究的基础上,向全国23所中医药院校的中医诊断学专家发出了调查咨询,经统计、分析,重新确认了肾阳虚证在临床最常见的33个辨证因子,较以前的肾阳虚证诊断标准更为简便,具有更强的可操作性,同时结合专家意见对证候诊断中的疑惑和困扰提出了新的见解。     

慢性再生障碍性贫血中医证型与经络能量指数的相关性

目的 :探讨慢性再生障碍性贫血(CAA)的中医证型与人体十二经原穴的能量指数关系,为临床疗效评价提供一种中医量化指标。方法:收集符合中医辨证分型诊断标准的肾阳虚组和肾阴虚组各30例,另随机选取30例健康者作为对照。采用中医智能经络检测仪分别对CAA患者及对照组进行能量指数测定。结果:肾阴虚组与肾阳虚组的阴/阳、上/下、左/右、体能分别与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05);肾阳虚组与肾阴虚之间的阴/阳、上/下、左/右比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:经络检测仪可对CAA患者脏腑功能状态进行量化分析,获得的数据可以作为辨证依据用于临床辨证分析,为CAA的证治提供了一种新的思路。     

老年高血压病中医辨证分型与血压变异性

目的：探讨老年高血压病中医辨证分型与血压变异相关参数的关系。方法：监测112例老年高血压患者24小时动态血压和中医辨证分型,计算夜间血压下降率,以此判断血压昼夜节律变化。结果：阴虚阳亢证收缩压变异性和舒张压变异性较其他组均最显著（P〈0.05）。肾阴虚证收缩压夜间下降率、血压变异性明显降低（P〈0．01）。结论：老年高血压患者血压变异性的相关参数、血压昼夜节律与中医不同证型之间可能存在一定关系,通过中医辨证分型能初步判断靶器官损害及预后。     

慢性再生障碍性贫血中医辨证分型与MHC-DRB1*等位基因的相关性研究

目的:探讨慢性再生障碍性贫血中医辨证与MHC-DRB1等位基因多态性之间的关系.方法:采用聚合酶链式反应/序列特异性引物的技术方法,对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者和对照组的MHC-DRB1各等位基因进行检测和分析.结果:肾阳虚型组患者MHC-DRB10301基因频率明显高于健康对照组,两组差异有非常显著性(P＜0.01).MHC-DRB1各等位基因未见与CAA肾阴虚型相关.结论:MHC-DRB10301基因可能是CAA肾阳虚型的易感基因,或者也可能是CAA的易感基因或其一部分,表明该型患者的免疫调控缺陷遗传基础的存在.MHC与CAA的先天体质疾病类型之间有一定的内在联系,能在一定程度上反映中医体质的遗传特征和CAA中医辨证的客观性.     

303例慢性乙型肝炎病毒携带人群的中医症状及证候分析

目的 研究重庆市慢性乙型肝炎病毒携带者的中医症状及证候.方法 303例重庆市慢性乙型肝炎病毒携带者,填写调查表,调查内容包括中医症状、证候、乙肝标志物.结果 中医症状出现率在50％以上的有3项,40％～50％（不含50％）有1项,30％～40％（不含40％）有6项,20％～30％（不含30％）有6项,10％～20％（不含20％）有7项,10％以下（不含10％）有2项.7种证候分布为肝气郁结证（41.25％）、无证可辨（17.82％）、湿热内蕴证（13.86％）、脾虚湿盛证（10.23％）,脾肾阳虚证（9.90％）、血瘀证（4.62％）、肝肾阴虚证（2.31％）.慢性乙型肝炎病毒携带者中HBeAg阳性湿热内蕴证的比例较HBeAg阴性高,HBeAg阴性脾虚湿盛证及血瘀证所占比例明显高于HBeAg阳性者,经χ^2检验均有统计学意义.结论 慢性乙型肝炎病毒携带者症状以脘腹部及精神症状为主.中医证候以肝气郁结证最多,涉及的脏腑以肝为主,脾脏次之,肾脏涉及较少.HBeAg阳性乙肝携带者与HBeAg阴性乙肝携带者的证候分布存在显著性差异.     

温阳补肾汤联合他达拉非治疗肾阳不足型阳痿的疗效观察

目的:观察温阳补肾汤联合他达拉非治疗肾阳不足型阳痿的临床疗效。方法:将126例符合诊断标准的患者随机分为3组各42例。治疗组口服温阳补肾汤和他达拉非,中药对照组口服温阳补肾汤,西药对照组口服他达拉非,疗程均为2个月,采用IIEF-5评分、中医证候评分及复发率作为观察指标。结果:3组患者治疗后比较,治疗组患者IIEF-5评分高于中药对照组和西药对照组,中医证候评分及停药3个月后的复发率均低于中药对照组和西药对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组总有效率为95.2%,中药对照组总有效率为85.7%,西药对照组总有效率为90.5%;治疗组总有效率高于中药对照组和西药对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:温阳补肾汤联合他达拉非治疗肾阳不足型阳痿具有较好疗效。     

肾虚证动物模型研究进展

肾虚证动物模型一直是中医证候研究的重点,提供与人类疾病类似的肾虚证动物模型,有助于深入研究肾虚证本质及其治疗。近年来建立了不少肾虚证动物模型,然而不同的肾虚证模型特点也不尽相同。对临床常见肾虚证型,从肾阳虚、肾阴虚、肾精不足、肾气虚方面进行概述,并对其存在的不足进行思考,以期为肾虚证动物模型的构建及其证候生物学机制研究提供新思路。