斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

猪囊虫体表抗原用于 ELISA 诊断囊虫病的研究

应用猪囊尾蚴体表抗原对66例临床确诊的囊虫病人用 ELISA 进行检测,同时以囊液粗抗原作比较观察。阳性率分别为95.5%和68.2%,两者差异非常显著(P<0.005)。两种抗原对同批血清的反应强度也呈现明显差异(P<0.05)。用囊虫体表抗原和囊液粗抗原同时检测50名健康人血清,假阳性率分别为2%与12%;两种抗原与10例包虫病人血清分别有8例和4例出现交叉反应。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

ELISA检测脑囊虫病人脑脊液循环抗原

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑囊虫病人循环抗原(CAg)一些学者已做了不少工作。我们于1990年用 ELISA 检测瞄囊虫病人脑脊液 CAg 获得了较好的效果。一、材料与方法(一)抗原制备自新鲜病猪肉摘取囊尾蚴,抽取囊液,经离心和上清液透析后为抗原,保存于-20℃备用。(二)兔抗囊尾蚴抗体制备取囊尾蚴囊液抗原多点注射健康兔,效价在 ELISA 1∶5000时,取血分离血清,分装冰冻干燥,置于-20℃备用。(三)脑脊液(CSF) 脑囊虫病患者的 CSF 均采自本所根据临床症状、皮下结节活检及头颅 CT 扫描等确诊的住院病人,共68份。其他脑部疾病(病毒性脑炎、脊     

猪囊尾蚴的表面蛋白及其抗原性的初步测定

近年来有关猪囊尾蚴抗原的研究证实,其抗原可分为虫体和囊液抗原,成分极为复杂。作者在对囊虫抗原进行纯化研究的过程中发现,囊虫体表存在一定量的蛋白质,可经漂洗后脱离虫体。为探讨这种“表面蛋白”的来源和性质,本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGESDS),对囊虫漂洗液蛋白进行初步分离鉴     

间接血凝试验在囊虫病诊断中的应用

囊虫病是人畜共患疾病,严重损害人民健康。本文报道用间接血凝试验检测人血清中囊虫抗体,具有较高的特异性和敏感性。 1 囊虫抗原致敏血球的制备 1·1 囊虫抗原的制备,选取新鲜的含猪囊蚴的猪肉,用消毒空针抽取囊液,经3000rpm/分离心10min,上清即为囊液抗原。用分光光度计测量蛋白     

人体囊尾蚴抗原在临床试验中应用价值的探讨

目前 ,在囊虫病的临床血清学诊断试验中所用的抗原均采自猪体囊尾蚴。为探讨人体囊尾蚴抗原在临床试验中的应用价值 ,我们进行了下列试验。材料和方法1　抗原的制备　在无菌条件下 ,切除已确诊的人体皮下囊虫结节 ,置生理盐水中 ,洗涤数次。用 1ml的皮试针吸取囊液放入离心管中 ,2 0 0 0 r/min离心 2 0 m in后收集上清液 ,放入透析囊内置 4℃ ,以生理盐水透析 48h。然后测其蛋白含量(4 0 2 μg/ml) ,放 - 2 0℃ ,保存备用。2　试验血清　囊虫病病人血清 10 1份 ,均经囊虫血凝和囊虫酶标反复筛选。正常人血清 145份 ,采自济宁师专学生。3　结…     

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的　建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法　应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果　对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论　DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。     

应用多糖抗原酶联免疫吸附试验诊断包虫病的研究

本文应用包虫囊液多糖抗原对45例包虫病患者血清、77例其它寄生虫病患者血清和106例正常人血清进行ELISA测定,并与囊液热稳定抗原和粗抗原比较。其阳性率多糖抗原为93.33％,热稳定抗原为91.11％,粗抗原为95.55％。正常人血清的假阳性率分别为4.70％、3.77％和7.54％。结果显示3种抗原的敏感性无显著差异,而多糖抗原和热稳定抗原的非特异反应(假阳性率)则有所降低,尤以囊虫病更为明显。     

猪囊尾蚴蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦分析

猪囊尾蚴粗抗原在进行人体囊虫病的免疫诊断中有比较好的效果。但猪囊尾蚴抗原成分复杂,为了进一步提高阳性率,减少交叉反应,需要纯化抗原,分离出特异的抗原组分。我们用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦(IEF)对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊抗原蛋白质组分进行了比较分析。     

猪肉和人皮下猪囊虫囊液抗原的免疫印迹分析

应用SPA-ELISA、SDS-PAGE和IB(免疫印迹)技术对猪肉及人皮下结节内猪囊虫囊液的抗原成份进行了分析比较。结果表明,凝胶中考马氏亮蓝和氨基黑染色所示的蛋白条带以及血清抗体所识别的特异性抗原成份中,取自猪肉中的囊虫囊液较取自人体的囊液含量高,免疫反应性强。两种抗原用于SPA-ELISA诊断未见有明显差异。     

细粒棘球蚴囊液抗原纯化方法的比较评价

对于绵羊肝脏细粒棘球蚴囊液用常规粗制法,通过抗绵羊全血清抗体免疫吸附柱的亲和层析法,Oriol氏纯化法,Burstein氏纯化法,以及将纯化抗原再经酚提取法制备的六种抗原,以SDS-PAGE,免疫电泳,ELISA,IHA等方法进行了抗原得率、纯度、组份、免疫活性和特异性等方面的比较。结果表明:亲和层析抗原得率最高(l6.25％～22.64％),Oriol氏法纯化抗原最低(3.35％)。与囊液粗抗原相比,纯化抗原中Burstein抗原组份最多。经酚提取的纯化抗原组份最少。各种抗原组份数目显然相差明显,但在免疫电泳中均出现弧5沉淀线。酚提取法不能达到将抗原5和抗原B分离的目的。在ELISA和IHA中,Burstein法纯化抗原的活性最高。作者分析了亲和层析抗原活性低于Burstein和Oriol两种抗原的原因可能是亲和层析抗原缺少68kDa和36.5kDa两种宿主组份。因而认为这两个组份可能同时具有寄生虫抗原的性质。在ELISA试验中,各种纯化抗原均与囊虫病人血清产生部分交叉反应,但比粗抗原低。在IHA试验中,纯化抗原均不与囊虫病人血清产生交叉反应。作者推荐由于Burstein法纯化抗原得率高,提纯程序较简单,抗原活性高而且在IHA中没有与囊虫病人血清的交叉反应,因而可作为常规诊断抗原使用。     

纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较

目的比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果。方法用 Burstein法纯化抗原 ,与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清 ,以标化阳性预告值 ( SPPV) ,标化阴性预告值 ( SNPV) ,标准化准确度 ( SAc)等计算综合积分指数 ( SII)。结果两种抗原检测包虫病病人与健康人 ,其 SII值 :纯化抗原为 96 .0 % ,粗抗原为 95 .5 %。包虫病与其他寄生虫病 ,其 SII值 :纯化抗原为 94 .9% ,粗抗原为92 .8%。结论表明 Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原。     

包虫与囊虫间共同抗原的实验探讨

本文用E.gCF和C.cCF致敏血球检测了四种抗原(E.gCF、E.gPS、C.cCF和C.cSCW)免疫的小白鼠。结果发现:囊虫头节及囊壁不仅是囊虫特异性抗原的载体而且是与包虫发生交叉反应的共同抗原的主要来源;原头节共同抗原较少。包虫囊液特异性抗原性比囊虫囊液要强。     

ELISA法间接检测囊虫患者血清特异抗原的探讨

目的 探讨简便的检测囊虫抗原的方法。方法 囊液抗原包被酶标板，ELISA法检测待检血清与含ELISA法1：8( )的囊虫抗体兔血清的混合液的抗体，滴度低于1：2(#)为阳性。结果 囊虫患者阳性率在82．69％-85．37％之间。讨论囊液抗原间接检测囊虫患者血清特异抗原结果稳定，方法简便，临床符合率较高。     

包虫和猪囊虫抗原免疫化学性质及酶联免疫印斑技术临床应用研究

用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印斑技术分别对人源细粒棘球蚴囊液、棘球蚴砂、猪囊尾蚴囊液抗原组分进行分析研究,并对两种病血清学交叉反应进行了试验。结果显示包虫囊液抗原有29条蛋白区带,有两条糖蛋白带。猪囊虫囊液抗原显示36条蛋白带谱,两条糖蛋白带。棘球蚴砂显示23条蛋白带谱。包虫病人血清与印有包虫囊液抗原的硝酸纤维膜反应显示23条反应带,其中特异带为6条。包虫病人、猪囊虫病人血清与此膜反应显示4条共同反应带。包虫病人血清与棘球蚴砂抗原膜反应显示4条主要特异反应带,包虫病人血清、猪囊虫病人血清与此膜反应显示1条共同反应带。猪囊虫病人血清与猪囊虫囊液抗原膜反应显示22条反应带,其中有5条特异反应带;包虫病人和囊虫病人血清与此膜反应显示3条共同反应带。     

猪囊尾蚴抗原的研究

应用高效液相色谱仪对猪囊尾蚴囊液抗原(CFAg)、全囊虫抗原(CWAg)、头节抗原(CSAg)进行了分析,分别分离出12、12、14个峰,主峰的数目分别是4、3、3个。CFAg与CWAg有7个相同的峰,第一峰的蛋白质分子量均为669kD。CFAg与CSAg有5个相同的峰,除其中一个峰的蛋白质分子量在29～66kD之间外,其余均在29kD以下。CWAg与CSAg有6个相同的峰。     

应用酶联免疫吸附试验检测猪囊虫病特异抗体的研究

用猪囊虫粗抗原、B 抗原、等电聚焦技术分离的抗原组份和特异单克隆抗体亲和层析抗原,以ELSA间接法检测猪囊虫病血清抗体,结果特异性均不理想。应用单克隆抗体分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原位点,又有非特异性位点。用特异单克隆抗体以ELISA抑制法检测猪囊虫病血清抗体,结果完全消除了假阳性反应,病猪血清检出率为86.41％(89/103)。     

使用不同抗原的间接血凝试验在包虫病诊断中应用的评价

本文报告了使用不同抗原的包虫病间接血凝试验方法的实验结果。采用高浓度戊二醛化和1/20000鞣酸处理的绵羊红细胞,用绵羊肝包囊液粗抗原和部分纯化抗原致敏。用包虫病人血清进行方阵滴定,包囊液粗抗原,亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原的最适致敏浓度分别为250、25、25和6.25μg/ml。血清终点稀释度的倒数皆为1024。用包囊液粗抗原对1295名健康人血清做间接血凝试验(IHA)结果,抗体滴度≥64者仅6例(0.46％)。95例牛肉绦虫病人血清的阳性率为1.05％(1/95)。这种致敏红细胞的冻干制剂,在室温下存放18个月后,仍保持稳定。囊液粗抗原、亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原致敏红细胞,对47例包虫病人血清做IHA结果阳性率各为91.49％、44.68％、76.59％和85.12％,阳性血清抗体滴度的几何均值分别为389.29±2.55、247.69±4.20、271.21±2.45和343.65±2.43。29份囊虫病人血清IHA的结果为囊液粗抗原致敏红细胞的阳性率为27.5％,阳性血清的几何均值为128。其他三种抗原致敏的红细胞均为阳性。说明三种纯化抗原致敏红细胞与囊虫病人血清不发生交叉反应。根据本项实验结果建议将Burstein氏法纯化抗原致敏绵羊红细胞的间接血凝试验做为常规方法。     

检测血清、脑脊液中循环抗原用于脑囊虫病诊断及疗效评估的研究

以猪囊尾蚴囊液抗原免疫家兔制备抗体,用常规ELISA法和斑点ELISA法(Dot-ELISA分别检测脑囊虫病人血清和脑脊液(CSF)中循环抗原(CAg),结果两法用于检测的敏感性与特异性相近。以Dot-ELISA法检测,脑囊虫病人血清和(CSF中CAg检出率分别为72.2％和77.7％,特异性为93.7％。吡喹酮治疗后,CSF中循环抗原消失较血清中明显缓慢,2疗程治疗后CSF中CAg检出率仍达74％,而血清中CAg检出率为40.7％,说明常规吡喹酮治疗后脑囊虫较外周组织中囊虫死亡缓慢,因此治疗后检测CSF中CAg更能判定疗效。