罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响。方法用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平。结果不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18．9％、23．7％、35．1％、44．6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。罗格列酮处理HaCaT细胞后,p-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调。结论罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关。     

罗格列酮对HaCaT细胞体外分化影响的研究

使用浓度为10,20,40,80 μmol/L的罗格列酮分别对体外培养的HaCaT细胞作用48h后,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)半定量检测分化标记物外皮蛋白、转谷胺酰胺酶1mRNA的表达水平.随着罗格列酮药物浓度的增高,外皮蛋白、转谷胺酰胺酶1的表达明显增高.一定浓度下罗格列酮能上调HaCaT细胞体外分化标记物外皮蛋白、转谷胺酰胺酶1mRNA的表达,促进HaCaT细胞的分化.     

他克莫司联合罗格列酮对TNF-α诱导的HaCaT细胞细胞周期变化的影响

目的:研究他克莫司和罗格列酮单独或联合应用对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的HaCaT细胞细胞周期变化的影响,并初步探讨其机制.方法:体外培养HaCaT细胞,经TNF-α诱导,他克莫司、罗格列酮单独以及联合作用后,流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、P21的表达.结果:TNF-α诱导后HaCaT细胞G0～G1期的细胞比例明显降低(37.91±0.72)％,他克莫司和罗格列酮单独或联合应用可增加停滞在Go～G1期的细胞比例,其中联合组的G0～G1期的细胞比例分别为(46.47±0.43)％、(48.39±0.71)％,较相应单药组(39.62±0.07)％、(40.99±1.05)％明显升高(P＜0.05).他克莫司和罗格列酮单独或联合应用均可致HaCaT细胞cyclin D1表达下调,P21表达上调,其中他克莫司和罗格列酮联合用药组效应显著高于相应单独用药组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:他克莫司和罗格列酮单独或联合应用可以有效阻滞TNF-oα诱导的HaCaT细胞细胞周期进程,且联合用药作用更强,该作用可能与cyclin D1、P21的表达改变有关.     

细胞外基质蛋白1对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的:确定细胞外基质蛋白1(ECM1)对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响.方法:将转染pEGFP- N2 - ECM1的含有ECM1的MCF-7细胞上清液作用于HaCaT细胞.MIT法检测HaCaT细胞的增殖,FCM法测定细胞周期变化.结果:与对照组相比,经ECM1作用48h后,细胞G1期比例显著降低,S期与G2期比例则显著升高.结论:ECM1对培养的HaCaT细胞具有诱导增殖的作用.     

活化Stat 3和细胞周期蛋白D1蛋白在寻常性银屑病中的表达

目的 探讨寻常性银屑病中磷酸化信号传导和转录激活因子(p-Stat 3)和细胞周期蛋白(Cyclin D1)的表达及其相关性。方法 通过免疫组化方法研究p-Stat 3和Cyclin D1蛋白在寻常性银屑病中的表达,并探讨p-Stat 3和Cyclin D1蛋白表达的相关性。结果 在22例的寻常性银屑病标本中,19例p-Stat 3和20例Cyclin D1染色阳性,且染色均位于表皮棘细胞层的细胞核中,但一些血管内皮细胞p-Stat 3染色呈阳性。而且,p-Stat 3蛋白表达与Cyclin D1的表达有显著相关性(P<0.01)。结论 Stat 3信号途径在银屑病的发病机制中起作用。     

重组人甲状旁腺素(1-34)对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察重组人甲状旁腺素(1-34)[ rhPTH(1-34)]对肿瘤坏死因子-α(TN F-α)诱导的永生化人角质形成细胞( HaCaT)增殖的影响.方法 不同浓度rhPTH( 1-34)作用于由TNF-α诱导的HaCaT细胞,观察细胞形态变化;噻唑蓝法检测不同浓度rhPTH(1-34)作用后细胞增殖情况;流式细胞检测药物作用后细胞周期变化.结果 相差显微镜下可见,HaCaT细胞经rhPTH(1-34)作用后,细胞生长状态和生长速度受抑制;噻唑蓝法显示rhPTH( 1-34)(0.05、0.2、0.8、3.2、12.8 μmol/L)分别作用HaCaT细胞36 h、48 h后,细胞增殖受到明显抑制(P＜ 0.05或0.01);流式细胞检测显示,rhPTH( 1-34) (0.2、0.8、3.2、12.8 μmol/L)作用细胞48 h后,G1期细胞比例明显增加(P值均＜0.01),S期比例下降(P值均＜0.01).结论 在体外rhPTH(1-34)对TNF-α诱导的HaCaT增殖有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.     

决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响北大核心CSCD

目的观察决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法用CCK-8法检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞增殖的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照;用流式细胞仪检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞周期的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照。结果 CCK-8法检测显示5%浓度的决银方作用HaCaT细胞24h,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测显示,5%浓度的决银方作用于HaCaT细胞24h,G_1期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 5%浓度的决银方对HaCaT细胞增殖有明显抑制作用,其主要作用在细胞周期的G_1期。     

皮肤鳞状细胞癌中p16蛋白、细胞周期蛋白D1的表达及其意义

皮肤鳞状细胞癌(以下简称鳞癌)的发生发展是一个多因素、多阶段逐渐演进的过程。其中包括多种癌基因和抑癌基因的异常表达。p16蛋白、细胞周期蛋白(cyclin)D1表达异常在多种肿瘤的发生过程中起重要作用。为了检测p16蛋白、细胞周期蛋白D1在皮肤鳞癌组织中的表达情况及其相互关系．笔者应用免疫组化方法对40例原发性皮肤鳞癌组织和10名正常人皮肤组织进行研究分析，现将结果报告如下。     

依曲替酸对HaCaT细胞维生素D受体表达的影响

目的探索依曲替酸治疗银屑病的机制。方法免疫组化法检测银屑病皮损和正常表皮维生素D受体(VDR)蛋白表达;Western印迹法半定量检测依曲替酸对HaCaT细胞VDR蛋白表达的影响。结果银屑病皮损VDR蛋白表达水平(33.41±2.22)明显高于正常皮肤(14.87±3.18),差异有统计学意义(P<0.01);不同浓度依曲替酸作用HaCaT细胞24h,48h和72h后细胞VDR蛋白表达均较阴性对照组降低,呈明显的时间和剂量依赖性。结论银屑病皮损VDR蛋白表达异常,依曲替酸可降低HaCaT细胞VDR蛋白表达。     

miR-34a-5p对HaCaT细胞增殖及其靶基因Notch1表达的影响

目的: 检测miR-34a-5p对人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖及其靶基因Notch1 mRNA表达的影响。方法: HaCaT细胞体外培养,优化转染浓度,分为4组进行转染：miR-34a-5p 模拟物组（minic 组）,阴性对照组（NC组）,miR-34a-5p 抑制物组（inhibitor组）,抑制物阴性对照组（inhibitor NC组）。MTT检测细胞增殖情况; RT-qPCR检测Notch1的mRNA表达情况。结果: 转染后48小时minic 组、inhibitor组细胞增殖活力分别为39.7%和15.7%,minic 组、inhibitor组与NC组（21.3%）相比,差异有统计学意义(Ps<0.05)。HaCaT细胞转染后,minic 组和inhibitor组Notch1表达量分别为2.78±1.30和0.37±0.46,与NC组(1.0±0.06)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-34a-5p促进HaCaT细胞体外增殖,机制可能与Notch1 mRNA表达上调有关。     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞周期的影响

目的 探讨中药清热利湿饮水提液对经肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导活化的人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测TNF-α对HaCaT细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测清热利湿饮提取液对HaCaT细胞周期的影响.结果 经2.5×10^5 u/L的TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖率比对照组增加了（14.11±2.97）％,12.5g/L和15 g/L清热利湿饮可使HaCaT细胞阻滞于S期,与TNF-α对照组相比,S期比率分别增加了10.63％和21.55％.结论 TNF-α可使HaCaT细胞活化及过度增殖,一定浓度的清热利湿饮以浓度依赖的方式干扰正常的HaCaT细胞周期,通过阻滞细胞的周期时相而抑制HaCaT细胞的分裂和过度增殖.     

依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响.方法: 采用MTT比色法检测依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡并于透射电镜下观察凋亡细胞形态.结果: 依曲替酸和黄芪均对HaCaT细胞增殖有明显的抑制作用;在一定浓度范围内其抑制率呈时间和剂量依赖性,但黄芪的抑制率较依曲替酸为低.细胞明显阻滞于G1期,有明显的凋亡峰出现,电镜下见典型的凋亡细胞形态学特征.结论: 依曲替酸和黄芪均可抑制HaCaT细胞的增殖并诱导其凋亡,提示二者治疗银屑病机制可能与此有关.     

寻常型银屑病皮损中细胞周期蛋白A、D1、B1和E的表达

目的：探讨细胞周期蛋白A（Cyclin A）、Cyclin B1、Cyclin D1和Cyclin E在寻常型银屑病皮损中的表达和意义。方法：采用免疫组化法对28例寻常型银屑病患者的皮损和18例正常人对照皮肤中的Cyclin A、D1、B1和E的表达进行了检测。结果：28例寻常型银屑病患者中26例皮损表达Cyclin A和Cyclin B1，27例有Cyclin D1和Cyclin E表达，正常组织无表达或弱表达。结论：细胞周期蛋白A、D1、B1和E可能通过诱导细胞增殖参与了银屑病的发病。     

细胞周期相关蛋白在皮肤基底细胞癌中的表达及意义

目的:确定细胞周期素D1( CyclinDl)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)和p16蛋白3种细胞周期相关蛋白在皮肤基底细胞癌( BCC)中的表达及其意义.方法:采用PV-9000免疫组化法,检测30例基底细胞癌(BCC)皮损及30例正常皮肤中CyclinD1、CDK4、p16 3种蛋白的表达.结果:CyclinD1和CDK4在BCC组织中阳性表达率分别为83.3％和80.0％,p16在BCC组织中阳性表达率为53.3％,与正常皮肤相比,结果均具有统计学意义(P＜0.05).CyclinD1与CDK4表达呈正相关(r=0.83395,P＜0.05),CDK4与p16表达呈负相关(r=- 0.84458,P＜0.05).结论:CyclinD1、CDK4和p16 3种细胞周期相关蛋白协同作用,可能与BCC发病密切相关.     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

银屑病患者皮损中诱生型一氧化氮合酶mRNA、热休克蛋白70和细胞周期蛋白D1的表达

一氧化氮 (NO)作为小的气体分子有多种活性,热休克蛋白（ heat shock proteins, HSPs ）可保护细胞之间平衡,细胞周期蛋白 D1（ cyclinD1）是哺乳动物 G1期的限速控制器。 Sirsj等发现诱生型一氧化氮合酶（ iNOS）在银屑病皮损中过表达,为探讨iNOS过表达是由于银屑病表皮角质形成细胞摄取外源性 iNOS还是角质形成细胞自身产生合 成,并且作为与炎症和免疫调节有关以及和细胞增生有关的 iNOS、 HSP70、 cyclin D1在 银屑病皮损中表达情况和相互关系,我们研究了银屑病皮损中 iNOSmRNA、 iNOS、 HSP70和 cyclin D1的表达…     

Cyclin D1,CDK4和p16在银屑病皮损中的表达

目的:检测细胞周期素D1 (cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)和p16蛋白3种细胞周期相关蛋白在寻常型银屑病(PV)皮损中的表达.方法:采用免疫组化PV - 9000二步法检测35例PV患者皮损和20例对照组皮肤组织中cyclin D1、CDK4、p16蛋白的表达.结果:cyclin D1蛋白在PV组织中阳性表达率为68.6％,在对照皮肤组织中阳性表达率为15.0％.CDK4蛋白在PV组织中阳性表达率为77.1％,在对照组组织中阳性表达率为80.0％.p16蛋白在PV组织中阳性表达率为14.3％,在对照组组织中阳性表达率为60.0％.Cyclin D1蛋白在PV皮损中表达明显上调(X2=15.46,P＜0.05),CDK4蛋白在PV皮损中与对照组皮肤相比表达未见明显差异(X2 =4.37,P＞0.05),p16在PV皮损组织中表达明显下调(X2=12.88,P＜0.05).结论:3种细胞周期相关蛋白可能与PV皮损中角质形成细胞(KC)异常增殖密切相关.     

FoxM1对HaCaT细胞增殖、细胞周期的影响

目的:确定FoxM1对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法:采用DNA重组技术构建FoxM1的表达载体pEGFP-N2-FoxM1,脂质体法转染HeLa细胞并将其上清液按原浓度、1:1、1:2稀释后作用于HaCaT细胞。采用MTT法检测HaCaT细胞增殖情况;采用流式细胞仪测定HaCaT细胞周期变化。结果:FoxM1促进HaCaT。细胞的增殖,随着浓度增加,增殖作用愈明显;HaCaT细胞经FoxM1作用后,G1期细胞比例显著降低,S期与G2期比例则显著升高。结论:FoxM1对HaCaT细胞具有诱导增殖作用,呈剂量依赖性。     

p27、细胞周期素D1在恶性角质形成细胞肿瘤中的表达

目的：探讨恶性皮肤角质形成细胞肿瘤中p27、细胞周期素D1的蛋白表达与角质形成细胞肿瘤的关系。方法：用免疫组化法检测肿瘤细胞p27与细胞周期素D1蛋白表达。结果：p27在Bowen病和日光性角化病均为高表达,基底细胞癌和麟状细胞癌为低表达,而且前两者的表达显著高于后两者（P＜0．05）。细胞周期素D1在Bowen病、基底细胞癌及日光性角化病均无表达,而在麟状细胞癌表达率很高。结论：p27和细胞周期素D1蛋白表达在皮肤角质形成细胞肿瘤中的改变具有一定肿瘤特异性,可作为判断角质形成细胞肿瘤恶性程度、评估预后的指标。