Epstein-Barr病毒在肝细胞癌组织中的检出

目的：探讨Epstein-Barr病毒(EBV)与肝细胞癌(HCC)的关系。方法：采用PCR及免疫组化方法检测石蜡包埋HCC标本中EBV。结果：PCR测EBV DNA[BamHIW和(或)LMP1]阳性率为28．2％(22／78)。免疫组化测EBV LMP1多定位于肿瘤细胞中。结论：EBV在HCC组织中有较高的检出率,可能在HCC的发生中起一定作用。     

原发性肝细胞癌中P16蛋白的表达

目的;探讨原发性肝癌（HCC）中P16蛋白的表达。方法：用免疫组化（ABC）法对43例原发性肝癌和26例癌旁组织的P16蛋白进行检测。结果：P16的缺失率在HCC中为65.1%,在癌旁组织为11.5%,2者差异显著（P＜0.01）;Ⅲ级和Ⅰ、Ⅱ两相比较P16缺失率显著升高（P＜0.05）。结论：P16蛋白缺失和肝癌的发生密切相关,P16蛋白和HCC的恶性程度有关。     

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的：分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌（HCC）及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果：survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联（P<0.05）,与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白（AFP）水平及HCC病理分期均无关联（P＞0.05）;流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织（P<0.05）,癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义（P＞0.05）;荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。     

肝细胞癌患者D-二聚体和γ-纤维蛋白原多肽的改变

目的　探讨在肝细胞癌 (HCC)患者中 D-二聚体和 γ-纤维蛋白原多肽 (FGG)的生化改变及其临床意义 .方法　采用酶联免疫吸附反应定量检测了 5 7例 HCC患者的血浆 D-二聚体 ,通过 RT- PCR分析了编码 FGG的 m RNA在病变组织的转录水平 .结果　 HCC患者的血浆 D-二聚体含量(0 .81± 0 .2 1) m g· L- 1 显著高于正常对照组 (0 .15± 0 .0 7)mg· L- 1 (P<0 .0 1) ;在各临床分期之间 D-二聚体含量差别非常明显 ,尤以转移期癌 D-二聚体测定值的升高最为显著 .FGG的 m RNA在癌组织中的表达较癌旁非癌组织明显上调 ,同时还发现这种表达增强与淋巴结转移相关 .结论　 D-二聚体的异常增高、FGG m RNA的高表达与 HCC的临床分期和淋巴结状况关系密切 .     

Superoxide dismutase activity in tissues from 19 cases of hepatocellular carcinoma

Superoxide dismutase (SOD) activity in hepatocellular carcinoma (HCC) tissue was studied. It was observed that activities of total SOD, Cu, Zn-SOD and Mn-SOD in HCC tissue were lower than those in normal liver tissues respectively (P less than 0.001 & 0.01 less than P less than 0.05). SOD activity in poorly differentiated HCC tissue was lower than that in well differentiated HCC tissue. Contents of copper, zinc and manganese in HCC tissues were lower than those in normal liver tissues respectively (P less than 0.001 & P less than 0.01). This study suggests that decreased content of copper, zinc and manganese may be one of the factors that lead to impairment of SOD activity. The characteristic of lower SOD activity in HCC tissue and poorly differentiated HCC tissue may be a negative regulation to limitless proliferation and poor differentiation of liver cancer cells.     

Hepatic local micro-environmental immune status in hepatocellular carcinoma and cirrhotic tissues

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumours in the world, especially in Guangxi, China. The causes and mechanism of its tumourigenesis and development have not been completely clarified Some studies revealed that the hepatic local cellular immune function was one of the factors. In the present study, the local micro-environmental immune status was explored by investigating the number, distribution and function of CD3, CD57, CD20, CD68, and granzyme B (GrB) positive cells in 60 patients with HCC and 62 patients with liver cirrhosis (LC) and its relationship with the prognosis of the patients. The results showed that the number of T and B lymphocytes and natural killer (NK) cells in the liver of HCC patients was significantly higher than that in the LC and normal controls; while the number of macrophages (Mphi) was significantly lower The number of Mphi in the tissues decreased successively with the decrease of HCC differentiation; GrB-expressing cells in the liver predominantly consisted of CD57 positive cells. The number of NK cells, B lymphocytes and GrB-expressing cells in the cancerous tissues of stage I and II was significantly higher than that of stages III and IV. The number of T lymphocytes, NK cells, Mphi, and GrB-expressing lymphocytes in HCC cases without metastasis in 15 months was significantly higher than in the metastatic counterparts. The number of T and B lymphocytes, NK cells, and GrB-expressing cells decreased in patients with the progression of the HCC. These results suggest that the number of T and B lymphocytes, NK cells, Mphi and GrB-positive lymphocytes might be important markers in the estimation of hepatic local immune status and be useful factors for predicting the prognosis of HCC patients.     

肝癌组织GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达

目的: 探讨肝细胞肝癌(HCC)中GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达以及二者单独和联合检测的诊断价值.方法: 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测HCC 41例,其他肝肿瘤15例,健康人11例肝组织标本中两个基因的表达.结果: GPC3 mRNA在HCC、癌旁、其他肿瘤、远离HCC与正常肝组织的相对表达量分别为78.9±35.5,30.6±21.6,36.6±25.2,23.8±15.5;而AFP mRNA的相对表达量依次为61.2±32.6,31.5±23.6,29.0±24.7,21.2±15.9;各基因在HCC与其他组织间表达差异显著(P<0.01).以各自远离癌灶与正常组织相对表达量的上限(x 1.96s)为界值,HCC中GPC3 mRNA,AFP mRNA的高表达比率分别为80.5 %与63.4 %,而两者联合检测的比率达92.7 %.AFP mRNA与血清AFP水平和HCC分级有关,GPC3 mRNA的表达与HCC的分级及侵袭性有关.HCC中两个指标相对表达量无显著相关性(r=-0.145,P=0.365).结论: GPC3 mRNA可能是一个潜在的特异性HCC标记,与AFP mRNA联检可提高HCC筛查与诊断的比率.     

肝细胞癌组织GRIM-19和STAT3蛋白的表达

目的 探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)和信号转到子与转录激活子3(STAT3)蛋白在肝细胞癌中的表达、相互关系及在肝细胞癌发生发展中的意义.方法 应用免疫组化方法检测GRIM-19和STAT3在31例肝细胞癌组织和癌周肝组织、20例肝硬化组织及10例正常肝组织的表达水平.结果 肝硬...     

肝癌组织中多种自体吞噬的形态测量学分析

目的调查不同类型自体吞噬在肝癌及癌旁组织中的分布情况。方法通过电子显微镜观察15对肝癌组织标本的超微结构,并使用相关软件量化图像指标以分析不同类型自体吞噬分布与细胞超微结构特征之间的联系。结果数据提示肝癌细胞中主要分布巨型自噬,分布与肿瘤细胞的活动及代谢情况相关;而癌旁细胞主要分布微型自噬,且分布与细胞的炎症损伤程度相关。结论巨型自体吞噬和微型自体吞噬在肝细胞癌组织及癌旁组织中呈现不对称分布,该现象可能与肝癌的发生相关。     

肝细胞癌组织中ZEB-1的表达及意义

目的 探讨ZEB-1在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学SP法和蛋白质印迹分析法检测ZEB-1在62例HCC组织、48例相应癌旁肝硬化组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与HCC临床病理特征的关系.结果 免疫组化结果显示ZEB-1在HCC组织及癌旁肝硬化组织中呈阳性表达,阳性率分别为93.5％(58/62)和83.3(40/48).蛋白质印迹分析显示ZEB-1蛋白在HCC组织中的表达高于相应癌旁肝硬化组织和正常肝组织(P＜0.05).ZEB-1在HCC组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度、有无发生转移、有无门脉癌栓及有无术后复发等因素相关(P＜0.05),与肿瘤直径、肿瘤数目、血清AFP水平等因素无关(P＞0.05).结论 ZEB-1的高表达与肝癌的发生、发展密切相关,并且有可能参与HCC细胞的上皮间质转化而促进肝癌的侵袭和转移.     

原发性肝细胞癌组织中P16蛋白表达的意义

本研究检测了 3 3例原发性肝细胞肝癌 (ＨＣＣ)中Ｐ16蛋白的分布与表达 ,并对Ｐ16蛋白与肝癌发生的关系进行了初步探讨。1　材料与方法1.1　标本　　 3 3例肝癌组织取自西南医院肝胆科 1996～ 1999年手术切除 ,并经病理证实为原发性肝细胞癌 ,2 0例距肝癌 2ｃｍ的相应癌旁肝组织作为对照。标本用 10 %福尔马林固定 ,常规石蜡包埋 ,连续切片 ,厚 4μｍ ,ＨＥ染色。1.2　免疫组化　　采用敏感的链霉菌素 生物素 (Ｓ Ｐ)法。兔抗Ｐ16为美国Ｓａｎｔａｃｒｕｚ产品 ,Ｓ Ｐ试剂盒购自福州迈新生物技术公司 ,ＤＡＢ显色试剂盒为武汉博士德生物工…     

反相高效液相色谱法测定无花果中游离氨基酸的含量

目的　测定无花果中游离氨基酸的含量。方法　用OPA与 2 -ME作衍生剂 ,在梯度洗脱、荧光检测下 (λex =335nm ,λem =4 30nm) ,采用反相高效液相色谱法测定 15种游离氨基酸的含量。结果　无花果果实中含有多种人体必须氨基酸 ,其含量占总游离氨基酸的4 0 .2 0 %。其中 ,丙氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸和赖氨酸含量较高。结论　无花果果实是富含氨基酸的物质 ,具有较高的食用价值和保健作用     

乙型肝炎病毒X蛋白羧基端氨基酸缺失对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)羧基端缺失了40个氨基酸的突变体(HBx3′-40)和野生型HBx对Huh7和SMMC-7721肝癌细胞的生物学行为的影响。方法脂质体和磷酸钙法介导pcDNA3HBx3′-40和pcDNA3HBx重组体转染HBV(-)的人肝癌细胞Huh7和SMMC-7721。Neo基因PCR及Western印迹方法检测质粒DNA片断插入和HBx蛋白质的表达。借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期、凋亡和裸鼠成瘤实验以及氯霉素乙酰转移酶(CAT)-ELISA法对转染细胞的生物学活性进行检测。结果pcDNA3HBx3′-40组细胞生长速度明显快于pcDNA3HBx和pcDNA3组;pcDNA3HBx3′-40组克隆形成率明显高于pcDNA3HBx和pcDNA3组(P<0·05);流式细胞仪检测结果显示pcDNA3HBx3′-40表达能加速Huh7细胞由G0/G1期→S期的进程;但细胞凋亡检测显示无血清诱导的SMMC-7721细胞HBx3′-40组能部分取消HBx的促凋亡效应,并且该组几乎丧失了HBx的反式激活作用;裸鼠成瘤实验显示,pcDNA3HBx3′-40组成瘤体积明显大于pcDNA3HBx组和pcDNA3组,瘤体重量间差异具有统计学意义(P<0·05)。表明HBx3′-40对肝癌细胞的生长具有明显促增殖作用。结论HBx碳端缺失了40个氨基酸的突变体转染细胞对比野生型HBx显示促增殖能力明显增强,推测HBx通过缺失突变修饰其生物学功能,取消了野生型HBx的反式激活功能和抗增殖效应。另一方面,HBx114~154个氨基酸位点的缺失可能导致p53无法发挥其抑癌作用。     

肝癌及癌旁组织中HSP70和bcl-2表达及意义

目的 探讨肝癌及癌旁组织中HSP70和bcl-2表达及意义。方法 应用免疫组织化学Elivision法检测58例肝细胞癌及癌旁组织HSP70和bcl-2表达,并作HE染色,进行肝癌组织学分级（Ⅰ-Ⅳ级,Edmondson-Kondo标准）。结果 58例肝癌中Ⅰ级7例,Ⅱ级28例,Ⅲ级18例。Ⅳ级5例,癌旁有肝硬化改变者47例（81．0％）;HSP70阳性反应产物呈棕黄色颗粒状,主要定位于胞质,部分细胞同时出现核及胞膜着色。癌组织HSP70阳性率（70．7％）及阳性强度明显高于癌旁肝组织（37．9％）,肝癌分化越差,HSP70表达越强。另外,癌旁肝硬化组织中增生的小胆管上皮细胞内HSP70呈普遍中度阳性表达;癌旁肝组织的bcl-2阳性率为77．6％,呈簇状和／或片状分布,癌组织中bcl-2阳性率为19．0％,且阳性细胞数明显少于癌旁组织,多呈碎点状。结论 HSP70表达水平可反映肝癌细胞的增殖及恶性程度,有一定诊断和预后价值;肝癌和癌旁组织bcl-2染色对比显示肝癌细胞发生发展过程中抑凋亡机制减弱;HSP70可能参与肝癌及癌旁细胞的凋亡调控。     

精氨酸酶2在肝细胞癌组织中的表达及临床病理意义

目的 研究精氨酸酶2(Arg-2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床病理意义.方法 收集113例HCC组织及癌旁肝组织,其中29例伴有癌旁异型增生结节(DN),另取12例正常肝组织.运用蛋白质印迹分析法检测Arg-2蛋白在15例HCC组织、癌旁肝组织和12例正常肝组织中的表达;运用免疫组织化学方法检测Arg-2在113例HCC、癌旁肝组织及DN中的表达情况,并分析其与HCC各临床病理特征间的关系以及鉴别诊断价值.结果 蛋白质印迹分析结果显示,Arg-2在正常肝组织和癌旁肝组织中均不表达,在HCC组织中表达升高(P＜0.01);免疫组织化学结果显示,Arg-2阳性表达于肝癌细胞质内,阳性率为77.0％(87/113),其表达与HCC组织学分级相关(P＜0.05);Arg-2在低级别DN中无表达,在高级别DN中阳性表达率为14.3％(2/14),而在高分化HCC中阳性表达率为66.7％(8/12),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Arg 2在HCC中高表达,并且与HCC组织学分级相关,其可能参与HCC的发生、发展过程.检测Arg-2表达有助于鉴别高分化HCC与DN.     

HBV相关性HCC患者癌组织与癌旁组织的蛋白质组差异分析

目的:应用双向凝胶电泳和质谱技术分析HBV相关性HCC癌组织与非癌肝组织蛋白质组之间的差异,鉴定肝组织蛋白质组中与HBV相关性HCC癌变相关的蛋白.方法:收集HBV相关性HCC患者手术切除的癌组织和癌周组织标本,固相pH梯度2-DE,凝胶银染、扫描图像、ImageMaster 2-DE Elite4.01软件分析差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱(PMF),联网到ExPASY服务器查询相关数据库鉴定获得的差异蛋白质点.结果:癌组织、肝硬化组织和慢性肝炎组织平均每张蛋白斑点数为(1281±51),(1188±41)和(1235±31)个,重复性分析发现在等电聚焦(IEF)方向上平均偏差为(2.47±0.25)mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为(2.86±0.31)mm.47个差异蛋白质点经质谱分析获得28张PMF,初步鉴定了其中的17张PMF.结论:HBV相关性HCC的癌组织、肝硬化组织、慢性肝炎组织蛋白质组之间存在较明显的差异,鉴定出的差异蛋白质可能有助于研究HBV相关性HCC.     

Expression and clinicopathological significance of miR-146a in hepatocellular carcinoma tissues

Background. Aberrant expression of microRNA-146a (miR-146a) has been found in several classes of cancers. However, its expression and clinicopathological contribution in hepatocellular carcinoma (HCC) has not been fully elucidated.

Objective. To explore the clinicopathological significance of the miR-146a level in HCC formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue.

Methods. Eighty-five HCC samples and their para-cancerous normal liver tissues were collected. Total mRNA including miRNA was extracted, and miR-146a expression was determined using real-time RT-PCR. Furthermore, the correlation between the miR-146a expression and clinicopathological parameters was investigated.

Results. MicroRNA-146a expression in HCC tissues was lower compared with that in adjacent non-cancerous hepatic tissues. MicroRNA-146a expression was also related to clinical TNM stage, metastasis, portal vein tumor embolus, and number of tumor nodes.

Conclusions. Down-regulation of miR-146a is related to HCC carcinogenesis and deterioration of HCC. MicroRNA-146a may act as a suppressor miRNA of HCC, and it is therefore a potential prognostic biomarker for HCC patients.     

hOGG1和PARP在原发性肝癌组织中的表达及意义

目的 检测DNA修复酶hOGG1及PARP在原发性肝癌及肝硬化组织中的表达,探讨hOGG1和PARP在HCC和肝硬化组织中的表达特点及其与临床病理的关系.方法 应用EnVision免疫组化法检测41例非HCC正常肝组织、99例HCC组织、51例HCC癌旁肝硬化组织中hOGG1和PARP表达情况.结果 在HCC组织中hOGG1和PARP在细胞核与细胞质中均有表达,其中hOGG1细胞核阳性分度在正常组、肝硬化组、HCC组之间依次增高(P＜0.001);PARP细胞核阳性分度在正常组、肝硬化组、HCC组之同依次降低(P＜0.001).多因素分析显示:hOGG1蛋白在细胞核表达与ALT有关(相对危险度为1.022,P=0.041),hOGG1蛋白在细胞浆表达与总胆红素有关(相对危险度为1.155,P=0.018),PARP蛋白在细胞浆表达与外周血白细胞数(相对危险度为0.757,P=0.037)有关.结论 在HCC发生过程中hOGG1蛋白在肝细胞核中的表达可能随着病程进展而增强,PARP蛋白在肝细胞核中的表达可能随着病程进展而降低,可能反应了从肝硬化到肝癌进程中肝细胞内氧化应激状态的改变.