基因沉默的维持——长效RNA干扰

自揭示了哺乳动物细胞中的RNA干扰（RNAi）现象以来,对其进行了大量的研究与资金投入,期望将其发展成一种切实可行的治疗手段。毫无疑问,RNAi是最具发展潜力的基因治疗策略。由于许多采用RNAi治疗的疾病需要长期用药,因此,有关RNAi类药物长期应用的安全性问题成为关注重点。     

小干扰RNA介导的多靶点肿瘤治疗

在各种不同的肿瘤中估计有多达数百个基因失调,但大多数肿瘤治疗是针对单癌基因。近来,肿瘤治疗模式发生了变化,已开始思考从单靶点治疗向多靶点治疗转变。有相当多的证据表明,多靶点治疗比单靶点治疗有较高的成功可能性,多靶点治疗将是今后最有吸引力的肿瘤治疗策略。本文综述了小干扰RNA在多靶点肿瘤治疗中的作用。     

全身RNA干扰的重大突破

RNA干扰已经成为一种强有力的研究工具，然而这项技术在临床治疗应用方面的进展最近才开始起步。这个领域最主要的进展是Zimmermann等在Nature上首先报道的在灵长类动物中全身递送小分子干扰RNA（siRNA）后的基因沉默效应。     

小干扰RNA的靶向运送体系

靶向运送是小干扰RNA(siRNA)药物进入临床应用最关键的环节。研究人员利用配体、抗体和适配子构建了非常有效的靶向特异性细胞组织的siRNA运送体系。制备运送体系分3步:先使脂质体或多聚物与siRNA自发结合形成微粒,利用聚乙二醇等作为桥接分子包被在微粒外层,最后将配体、抗体或适配子等靶向性分子与桥接分子连接。     

RNA干扰类药物开发策略及临床研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的特异性基因表达沉默.利用RNAi技术可使某些与疾病发生有关的基因沉默或表达水平降低,从而有效治疗疾病.目前RNAi类药物的研究已在多种疾病治疗领域取得了较好进展.本文综述RNAi类药物的开发策略及其临床研究进展.     

癌症治疗中小干扰RNA治疗方法及载体的研究概况

癌症是当前危害人类健康的主要疾病之一。采用传统的手术、化疗等治疗手段无法完全根除或杀死肿瘤细胞,且易发生转移和复发等现象。由于小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默技术可通过破坏目的蛋白mRNA的完整性,达到抑制疾病相关基因表达的作用;且siRNA因其高效性、特异性特点以及作为基因药物的巨大潜力,备受研究者的青睐。本文就小干扰RNA技术的作用机制、小干扰RNA药物传递系统及其在抗肿瘤领域的相关应用进行综述。     

RNA干扰与药物的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱导的序列特异性的基因沉默，目前被广泛用于药物研究，特别是针对肿瘤、病毒感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等的治疗药物。随着核酸药物在体内靶向转运技术的不断发展，RNA干扰有可能成为一种新型的治疗途径。     

RNA干扰及其在肿瘤医学中的应用

RNA干扰是一种古老的机制,植物的基因共抑制属于转基因后的基因沉默,是信使RNA受到特异性的降解所造成的。18个碱基对以上的双链RNA足以引起显著的转录后基因沉默。肿瘤是多种基因突变的累积以及这些基因相互作用形成的基因网络调控的结果,目前RNAi技术越来越多地拓宽到肿瘤医学的研究领域。     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNAi）是由双链RNA介导，在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术，在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。同时，RNAi的分子机制研究也不断取得进展，包括对基因转录后水平、翻译水平、基因甲基化及沉默信号的传递等层次的研究。清晰阐述RNAi作用机理将为大规模的基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要理论依据和有力工具。     

纳米微粒系统介导小干扰RNA体内递送的研究进展

目的:为开发新型纳米微粒系统用于体内递送小干扰RNA(siRNA)提供参考。方法:总结siRNA体内递送障碍并综述近年来纳米微粒系统介导siRNA体内递送的研究现状。结果与结论:siRNA需要解决肾滤过、吞噬细胞摄取、血清蛋白凝聚以及内源性核酸酶降解等障碍。聚乳酸-乙醇酸共聚物纳米微粒系统能有效包载siRNA,改善其体内稳定性,但存在内含体逃逸及不能及时释放siRNA的缺陷;壳聚糖纳米微粒系统包载siRNA稳定性高、包封率达83%～94%、基因沉默效率接近80%;环糊精纳米微粒系统包载siRNA未见严重毒副作用;胶束纳米微粒系统能有效保护siRNA免受核酸酶降解,并能适时释放siRNA;阳离子共聚物纳米微粒系统能有效防止siRNA被核酸酶降解,但转染效率低;脂质纳米微粒系统可显著提高siRNA对靶基因的沉默效果,但存在一定毒性及易引起siRNA脱靶效应。部分荷载siRNA的纳米微粒系统用于临床试验已得到了令人鼓舞的成果,但仍有较多问题亟待解决。联合应用多种递送系统传送siRNA可能是未来研究发展趋势。     

RNA干扰技术及其抗乙型肝炎病毒的相关研究

目前寻找新的更有效的治疗乙型肝炎病毒（HBV）的方法成为广大学者关注的焦点，RNA干扰技术的出现为治疗慢性HBV感染开辟了新途径。本文就RNA干扰技术及其在抗HBV感染中的研究进展作一综述。     

反义，RNA干扰，基因沉默策略用于疾病治疗是否可行

反义寡核苷酸能调节基因表达，调控细胞功能和分化及细胞对于内外刺激的反应。虽然其作为治疗手段在临床前和临床研究中均已取得了令人鼓舞的结果，但实际运用中，仍有几大难点有待解决，包括效价、脱靶效应、转运及不良反应等。从反义寡核苷酸研究中获得的经验有助于其他基于寡核苷酸药物的研发，如CpG寡核苷酸、RNA干扰和微小RNA等。     

靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

N-乙酰半乳糖胺偶联小干扰RNA类药物的非临床毒性研究进展

小干扰核糖核酸（siRNA）作为核苷酸类药物,通过RNA干扰（RNAi）特异性诱导基因沉默而发挥作用,在代谢性疾病、抗感染及肿瘤等领域被广泛应用。目前已获批上市4款基于N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）偶联技术siRNA药物,汇总分析已上市GalNAc偶联药物的非临床毒性特征及临床不良反应,初步明确非临床研究中毒性常见类型,包括脱靶与非脱靶毒性等。结合GalNAc-siRNA类药物非临床研究实践,了解可预测的脱靶毒性及对于非临床安全性评价中的毒性关注点,以期为GalNAc-siRNA药物临床研究提供参考。     

RNA干扰技术抑制乳腺癌表皮生长因子受体的表达

目的 探讨采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）技术是否能有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞表皮生长因子受体（EGFR）表达,以及抑制EGFR基因表达后乳腺癌细胞生物学特性的改变,以期为肿瘤治疗提供新的思路和实验依据.方法 （1）建立检测EGFR数量的方法,测定MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞株EGFR的表达.（2）观察dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000对EGFR表达的抑制作用.（3）采用流式细胞仪测定细胞周期,采用ELISA法观察抑制EGFR表达后,MDA-MB231,MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞生物学特性的改变.结果 MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞株存在EGFR高表达.转染dsRNA-EGFR后可将MDA-MB231、MDA-MB-453S细胞对5-Fu的敏感性提高约4倍.细胞周期分析结果表明dsRNA-EGFR组G0-G1期细胞百分数较对照组增加了17.48%,进入S期的细胞百分数较对照组减少了19.20%.转染dsRNA-EGFR后可将ZR-75-30、ZR-75细胞对5-Fu的敏感性提高约7倍.结论 （1）乳腺癌细胞株存在EGFR高表达.（2）dsRNA-EGFR可序列特异性下调乳腺癌细胞EGFR基因水平,显著降低EGFR蛋白表达.（3）dsRNA-EGFR通过抑制EGFR表达可显著抑制细胞增生和细胞迁移,降低配体EGF的含量,将更多的细胞阻滞在G0-G1期,增加细胞对5-Fu的敏感性,有效逆转乳腺癌细胞的恶性表型,从而为乳腺癌基因治疗提供了新策略.     

不对称RNA干扰研究进展

RNA干扰是生物医学研究,特别是基因功能研究中的重要工具.目前在哺乳细胞和临床研究中的RNA干扰技术主要由相同长度对称的双链小干扰RNA(siRNA)介导.正义链和反义链长度不一致的不对称双链小干扰RNA(aiRNA)能更有效地使相应的靶基因沉默,并且降低脱靶效应,提高体内外稳定性,成为疾病治疗的新希望.本文就aiRNA的研究进展作一综述.