我国嗜人按蚊和雷氏按蚊分类地位的探讨

我国嗜人按蚊和雷氏按蚊的分类地位虽经多次修订,其存疑问题迄今未获解决,蚊媒分子鉴别研究的发展为澄清问题提供了有利条件。本文综合国内外文献作历史性回顾评述,并根据分子鉴别研究新进展对我国嗜人按蚊和雷氏按蚊的分类地位和正确命名修订作探讨。     

我国嗜人按蚊订正为雷氏按蚊的学术探讨

本文对我国重要传疟媒介嗜人按蚊和雷氏按蚊的分类地位和学名使用作了历史性回顾和探讨。根据当前我国文献记载,已具有充足的形态学和分子生物学论据,表明嗜人按蚊为雷氏按蚊的同物异名,订正并恢复使用雷氏按蚊学名已刻不容缓。     

江苏省洪泽县首次发现嗜人按蚊

洪泽县位于北纬32°56′—33°36′,东经118°15′—119°09′。年平均气温14.8℃,雨量887.5mm。属北亚热带气候,农作物以稻麦为主,稻田面积约占可耕地面积85％。历年来以间日疟流行为主,1978年前曾发生过少量恶性疟病例。1989年间日疟在局部地区发生暴发流行,发病率高达4.17％(1449/34739)。为探讨其原因,我们选择东双沟乡于1991年7—10月份进行蚊种调查,发现当地有嗜人按蚊存在。现将调查结果报告如下:     

山东省赫坎按蚊复合体成员种的分子鉴别研究

目的 进一步确认山东省赫坎按蚊复合体成员种。方法 采用鉴别PCR方法，对采自山东省8个地点经形态学初步鉴定的645只蚊虫进行检测，并对已检测的标本随机抽取数个样本，进行rDNA-ITS2序列测定。结果 645份样本中，中华按蚊占90．85％(586／645)、雷氏按蚊占5．27％(34／645)，无扩增条带的标本占3．88％(25／645)。测定已鉴别的山东省中华按蚊、雷氏按蚊的ITS2序列长度分别为469bp和451bp，经Blast比对分析，显示与已公布的序列完全相同；3份无扩增条带标本的序列经核对为库蚊。结论 山东省分布的赫坎按蚊复合体成员种主要为中华按蚊、雷氏按蚊，其它成员种有待进一步证实。     

PCR-RFLP技术用于鉴别赫坎按蚊复合体近缘种按蚊的研究

目的区别赫坎按蚊种团内近缘种.方法应用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)技术,对辽宁省现场捕获的按蚊用特异性ITS2引物进行PCR扩增,限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分析.结果中华按蚊的PCR扩增产物能被限制性内切酶RsaⅠ酶切成350 bp和200 bp两条酶切DNA条带;嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)的PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfⅠ酶切成410 bp的酶切DNA条带; 雷氏按蚊的ITS2基因PCR扩增产物能分别被限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ酶切,分别显示350 bp和400 bp的酶切DNA条带;八代按蚊的PCR扩增产物没有显示明显的限制性内切酶RsaⅠ或HinfⅠ酶切条带.结论依据rDNA的ITS2区段基因特征建立的PCR-RFLP技术可用于鉴别赫坎按蚊种团的中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4个近缘种按蚊.     

湖南省嗜人按蚊分布调查

河南省嗜人按蚊分布调查结果显示：嗜人按蚊在河南省分布于淮 南的山区,丘陵地区的水稻区,其分布范围与河南省历史上的恶性疟流行区相一致,也是当前该省疟疾疫情尚不稳定的地区。     

河南省嗜人按蚊分布调查

河南省嗜人按蚊分布调查结果显示嗜人按蚊在河南省分布于淮河以南的山区、丘陵地区的水稻区,其分布范围与河南省历史上的恶性疟流行区相一致,也是当前该省疟疾疫情尚不稳定的地区。     

一种简便的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别新技术

目的 建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术。方法 依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物，建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术，并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较。结果与结论 新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊。具有比传统的形态学分类方法准确，比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点。适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测。     

我国嗜人按蚊不同地理株基因鉴别的初步研究

目的　分析不同地区嗜人按蚊的基因特征。　方法　选择 13种随机引物对嗜人按蚊江苏、广西和四川实验株以及从湖北和广东现场捕获的嗜人按蚊进行随机引物 PCR扩增 ,并以中华按蚊江苏实验株为对照。　结果　 13种随机引物中有 7种随机引物对中华按蚊和 5个地区的嗜人按蚊 PCR扩增的结果存在差别。S-随机引物对中华按蚊和不同地区嗜人按蚊的扩增结果出现明显差异。中华按蚊和不同地区的嗜人按蚊均出现 4 5 0 bp较强扩增条带。但 2 4 0 bp的强扩增条带为中华按蚊所特有。嗜人按蚊江苏和四川实验株分别在 2 30 bp和 32 0 bp处有 1条强扩增条带 ,而从湖北和广东现场采集的嗜人按蚊分别在 4 0 0 bp和 2 6 0 bp处出现较强的扩增条带。　结论　采用随机引物 PCR技术对不同地区嗜人按蚊的基因分析已显示明显差异。已发现的一些特有的 DNA扩增条带可被用作进一步的基因特征分析和鉴别。     

DNA探针用于中华按蚊和嗜人按蚊的分类研究

本项研究首次报道了我国中华按蚊和嗜人按蚊DNA基因库的建立,并从中华按蚊DNA基因库中筛选出一特异的DNA片段,以此为DNA探针,分别与中华按蚊DNA和嗜人按蚊DNA进行斑点杂交试验,其结果证明该DNA探针可与任何发育期的中华按蚊DNA杂交而不与嗜人按蚊DNA杂交,该探针敏感性高,可检测出7.5ng的中华按蚊DNA,大约相当于1个蚊虫总DNA的1/150,可用于区别中华按蚊和嗜人按蚊。     

EFFECT OF ALPHAMETHRIN ON ESTERASE ISOZYME IN LARVAE OF ANOPHELES STEPHENSI AND ANOPHELES ANTHROPOPHAGUS

分别用０。６９７ｎｍｏｌ／Ｌ和１．３９３ｎｍｏｌ／Ｌ顺式氯氰菊酯处理斯氏按蚊和嗜人按蚊３龄幼虫，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其４龄幼虫酯酶同工酶。与对照组相比，两种蚊幼虫酯酶同工酶均发生明显变化，表明顺式氯氰菊酯对两种蚊幼虫酯酶同工酶均有明显影响。     

四川省嗜人按蚊、中华按蚊的栖息习性和嗜血习性调查

目的　进一步了解嗜人按蚊和中华按蚊的栖息习性和嗜血习性及变化情况。　方法　选择不同类型栖息场所进行按蚊密度调查 ,在人房、牛房分别安装外逸窗阱观察蚊虫外逸情况 ,采取全捕法将人房、牛房、猪房内捕获的吸血蚊作胃血沉淀试验。　结果　人房、牛房、猪房中的嗜人按蚊密度分别为 3 .3 5、18.2 5和 9.3 8只 /人工小时 ;人房、牛房、猪房的嗜人按蚊平均数分别为 0 .63、9.5 5、1.68只 /间。人房、牛房及猪房中的中华按蚊密度分别为 2 .72、88.86、61.2 5只/人工小时 ;人房、牛房、猪房的中华按蚊平均数分别为 0 .3 2、3 3、3 .78只 /间。胃血沉淀试验 ,人房中的嗜人按蚊吸人血率为 94.5 7% (87/92 ) ,牛房为 5 .0 4% (6/119) ,猪房为 6.15 % (4 /65 )。中华按蚊吸人血率在人房、牛房和猪房分别为11.43 % (4 /3 5 )、3 .17% (2 /63 )和 0。　结论　嗜人按蚊和中华按蚊的主要栖息场所为牛房 ,其次为猪房和人房。嗜人按蚊主要嗜吸人血 ,中华按蚊则嗜吸其它动物血。     

奋斗呐对嗜人按蚊血淋巴蛋白和蛋白酶的影响

分别用１．３９３ｎｍｏｌ／Ｌ、０．６９７ｎｍｏｌ／Ｌ奋斗呐处理嗜人按蚊４龄幼虫，用离心法收集成蚊血淋巴，测定其蛋白含量和蛋白酶活性。与对照组相比，用药组血淋巴蛋白含量显著增加，蛋白酶活性显著降低，具有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），表明奋斗呐对蚊虫血淋巴蛋白含量和蛋白酶活性均有明显的影响。     

嗜人按蚊和中华按蚊实验种群寿命的比较观察

本文应用简略寿命表的方法在现场实验室内对嗜人按蚊和中华按蚊实验种群的寿命作了比较观察.嗜人按蚊雌、雄蚊的期望寿命分别为16.75d和15.91d,中华按蚊雌、雄蚊分别为21.63d和17.51d.两种按蚊雌蚊期望寿命都足够疟原虫在蚊体内完成孢子增殖.     

我国辽宁省嗜人按蚊群体与其它分布地群体的遗传分化研究

目的　研究我国辽宁省嗜人按蚊群体与其他分布地群体的遗传分化现象。　方法　应用 RAPD- PCR技术研究我国辽宁、四川和河南 3省 5个代表点的嗜人按蚊自然群体和江苏省实验室群体共 5 2个样本的遗传多态现象 ,依据 5 9个 RAPD等位基因座进行分析。　结果　嗜人按蚊群体的多态位点比例为 4 5 .8%～ 71.2 % ,平均 6 1.5 8% ,期望杂合度为 0 .16 3～ 0 .2 5 6 ,平均 0 .2 2 4 ;分别用 Wright(Fst)、L ynch和 Milligan(Fst)、Weir和 Cockerham (θ)的方法计算固定指数 ,平均值分别为 0 .2 2 4、0 .198和 0 .2 81,其相应的 N m分别为 0 .9、1.0和 0 .6 ,可见嗜人按蚊的基因流水平极低 ,致使群体产生了分化 ;嗜人按蚊各群体间的遗传差异性为 0 .0 2 87～ 0 .1397,属种内变异 ;聚类图显示 ,辽宁省的 3个群体与其他群体分为两枝。　结论　辽宁省的嗜人按蚊群体与其他分布地的群体已出现分化现象     

嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性发生发展规律的初步研究

目的 研究嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性的发生发展规律。方法 在实验条件下,以嗜人按（Anopheles anthropophagus）幼虫为试虫,用溴氰菊酯乙醇液选育,至子35代后分别采用3种不同方法继续选育至子40代。结果 嗜人按蚊经溴氰菊酯选育至子27代时,LC50由0.0047mg/L上升至0.2822mg/L,抗性系数高达60,其后逐代下降,至子40代时,LC50为0.0165mg/L,抗性系数降至3.5;从子35代起分别用LC50逐代、LC50隔代、LC90逐代选育方法继续选育至子40代,抗性系数分别为敏感品系的9.96、18.85倍。结论 嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性呈缓慢上升-稳定-趋于下降的态势;LC50隔代、LC90逐代选育方法可延缓抗性下降速度。     

随机引物聚合酶链反应用于鉴别嗜人按蚊不同地理株的初步研究

目的探讨嗜人按蚊是否存在亚种（或地理株）。方法应用随机引物聚合酶链反应技术（ＲＰ－ＰＣＲ），选用３种引物对嗜人按蚊江苏株、广西株、广东株的ＤＮＡ扩增片段进行分析并以中华按蚊江苏株作对照。结果中华按蚊和嗜人按蚊的扩增条带存在明显差别，３种引物对嗜人按蚊江苏株、广西株和广东株的扩增图谱均存在明显差异。结论 ＲＰ－ＰＣＲ显示嗜人按蚊江苏株、广西株和广东株之间存在差异，但这种差异在嗜人按蚊种或种下分类上的意义有待进一步分析。     

我国昆明按蚊与凉山按蚊rDNA-ITS2序列和形态比较及分类地位的探讨

[目的 ]论证昆明按蚊 (Anopheles kunmingensis)和凉山按蚊 (An. liangshanensis)的分类地位。 [方法 ]比较两种按蚊 r DNA- ITS2序列差异和主要形态特征的变化幅度。 [结果 ]两种按蚊 8个样本 r DNA- ITS2序列同源性为 97.1%～ 99.8%。昆明按蚊雌蚊翅 V5 .2缘缨白斑、后跗 基白环 (斑 )及幼虫头毛 2 - C具叉枝等特征出现率分别为 43% (9/ 2 1)、 89% (17/ 19)及 40 % (4/ 10 ) ,而凉山按蚊则分别为 79% (34 / 43)、 44 % (17/ 39)及 2 0 % (4/ 2 0 ) ;如以不同群体作统计分析 ,各特征出现率波动幅度很大 ,交叉重叠 ;表明两蚊种间缺乏明确与稳定的鉴别特征 ,缺乏实质性的形态差异。 [结论 ]两种按蚊形态特征和分子序列差异极小 ,应属种内变异范围 ,可以确认两者是同一蚊种 ,昆明按蚊为凉山按蚊的同物异名。