电针治疗大鼠脑缺血再灌注期血清白细胞介素8水平的调节

目的：通过观察脑缺血后不同时间段白细胞介素8血清的表达及电针对其表达的调节，以探讨电针治疗缺血性脑损伤的可能作用。 方法：实验于2005—08／11在南方医科大学附属南方医院神经内科实验室内进行。取135只雄性清洁级SD大鼠随机数字法分成假手术组，缺血再灌注3，6，12，24h组。缺血再灌注3，6，12，24h＋电针组。每组15只。采用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血1h后再灌注模型，于造模成功后电针缺血再灌注＋电针组大鼠的足三里、内关穴，频率2Hz，电压1．5V，连续渡30min／次。再利用夹心酶联免疫吸附法，检测每组白细胞介素8浓度；并对每组进行神经功能缺陷评分。 结果：实验过程中有2只动物死亡，133只动物进入结果分析。①缺血再灌注3h白细胞介素8表达开始增加，6h达高峰，12h开始下降，24h恢复正常；其中缺血再灌注3，6及12h组与假手术组比较差异有显著性意义[假手术组（73．56&;#177;8．27）μg／L，缺血再灌注3h（85．18&;#177;9．56）μg／L，6h（109．82&;#177;10．82）μg／L，12h（95．27&;#177;9．71）μg／L，24h（75．61&;#177;8．43）μg／L，P〈0．05]。②缺血再灌注3，6，12h＋电针组血清白细胞介素8与缺血再灌注相应时间点组比较。差异有显著性意义[缺血再灌注3h＋电针组（80．39&;#177;8．68）μg／L，缺血再灌注6h＋电针组（98．35&;#177;9．29）μg／L，缺血再灌注12h＋电针组（86．81&;#177;8．09）μg／L，P〈0．05]。③缺血再灌注3，6，12，24h＋电针组神经功能缺陷评分与相应时间点缺血再灌注组比较明显降低[缺血再灌注3，6，12，24h＋电针组分别为（2．85&;#177;0．38），（3．06&;#177;0．55），（2．98&;#177;0．46），（3．02&;#177;0．52）分；缺血再灌注3，6，12，24h组分别为（3．38&;#177;0．57），（3．86&;#177;0．43），（3．52&;#177;0．52），（3．56&;#177;0．62）分，P〈0．05]。 结论：电针治疗能降低大鼠脑缺血再灌注期血清白细胞介素8水平。     

红景天对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的：利用SD大鼠制备肠缺血再灌注模型，观察红景天对肠缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。 方法：实验于2005—08／2006—05在第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。雄性SD大鼠30只，体质量200～250g，随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、红景天处理组，每组10只。红景天液制法参照中药质量标准：取红景天生药102g，加水煎煮2次。第1次1．5h，第2次1h。滤过，滤液合并后加水调至120mL，每只大鼠2mL／d，相当于生药5g／（kg&;#183;d）。缺血再灌注模型制备：动物于术前12h禁食．不禁水。以2％盐酸氯胺酮（100mg／kg）腹腔注射麻醉。生理盐水2mL／d，连续灌胃5d后，取正中切口入腹后分离肠系膜上动脉，以无创伤血管夹阻断肠系膜上动脉根部造成小肠完全缺血60min。然后松夹进行再灌注60min。假手术组：生理盐水2mL／d，连续灌胃5d后，只分离肠系膜上动脉，但不作阻断。红景天处理组：红景天按5g/kg生药，溶于2mL水中灌胃给药，连续5d后，分离肠系膜上动脉。夹闭肠系膜上动脉60min后再灌注60min。检测各组大鼠小肠黏膜中肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6水平，以及其中的超氧化物歧化酶和丙二醛的含量。 结果：30只大鼠均进入结果分析。①缺血再灌注组肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6水平均高于假手术组和红景天处理组[肿瘤坏死因子α：（2．57&;#177;0．29），（0．32&;#177;0．06），（1．06&;#177;0．11）μg／L；白细胞介素-6：（965．73&;#177;42．01），（122．46&;#177;1．74），（385．03&;#177;13．50）ng／L。P〈0．01]。②缺血再灌注组丙二醮水平高于假手术组和红景天处理组[（0．68&;#177;0．11），（0．33&;#177;0．10），（0．54&;#177;0．12）nmol／g，P〈0．01]；超氧化物歧化酶水平低于假手术组和红景天处理组[（34．12&;#177;5．31），（92．63&;#177;3．82），（55．66&;#177;5．92）NU／g，P〈0．01]。 结论：红景天可通过抑制细胞因子表达及清除氧自由基的方式，对肠缺血再灌注损伤起到保护作用。     

α-黑素细胞刺激素对抗大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及机制

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对抗大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及机制。方法：60只大鼠随机数字表法分3组：假手术组、缺血再灌注组和治疗组，每组20只。采用大鼠小肠缺血60min再灌注模型，治疗组静脉注射α-MSH，用放免法检测血中肿瘤坏死因子α-(TNFα-)、白细胞介素6含量，用髓过氧化物酶(MPO)定量测定法评价缺血后肠组织中中性粒细胞浸润程度，免疫组化法检测肠黏膜Fas蛋白表达情况，并电镜观察超微结构的改变。结果：α-MSH能明显改善电镜下细胞超微结构的损害；与缺血再灌注组比较，治疗组再灌注后肠组织Fas表达下调，其光密度值由1．4509&;#177;0．0192下降为1．3241&;#177;0．0140，MPO，TNF-α，白细胞介素6含量于再灌注后6h，分别由(8．50&;#177;0．150)nkat／g下降为(5．17&;#177;0．317)nkat／g，(1．86&;#177;0．53)ltg／g下降为(1．41&;#177;0．39)μg／g．(301．06&;#177;67．23)ng／g下降为(201．56&;#177;26．42)ng／g，两组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：α-MSH可能通过减轻肠缺血后炎症反应以及阻止肠组织细胞凋亡的发生等机制对肠缺血再灌注损伤具有保护作用。     

脊髓再灌注损伤后细胞间黏附分子1及白细胞介素1β表达的变化

背景：目前国外有探讨细胞因子和黏附分子在缺血再灌注损伤时的表达，但均未涉及内源性细胞因子和微血管内皮细胞表面黏附分子在损伤后相关性的研究，对内源性白细胞介素1在损伤中的表达也仅限于mRNA水平。 目的：探讨细胞间黏附分子1及其调节因子白细胞介素1β的表达在脊髓缺血再灌注损伤中作用机制。 设计：随机分组设计、动物实验。 单位：吉林大学体育学院运动医学系。 材料：实验于2003—03／2004—01在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠77只，随机数字表法分为正常对照组7只，单纯缺血组14只和缺血再灌注组56只。单纯缺血组：阻断血流30min7只，阻断血流60min7只；缺血再灌注组：根据脊髓缺血30min后再灌注30，60min，2，4，6，9，12，24h又分为8个时相点，每个时相点7只。 方法：采用Zivin法复制脊髓缺血再灌注损伤动物模型。采用反转录-聚合酶链反应、免疫组织化学及免疫荧光激光共聚焦扫描显微镜技术检测脊髓缺血再灌注损伤后血管内皮细胞间黏附分子1 mRNA和白细胞介素1 BmRNA表达量。 主要观察指标：白细胞介素1βmRNA表达、白细胞介素1多肽活性、细胞间黏附分子1mRNA和蛋白的表达、髓过氧化物酶活性。 结果：纳入动物77只，均进入结果分析。①缺血再灌注组白细胞介素1βmRNA（A值）表达量明显高于单纯缺血组和正常对照组，差异显著（分别为1．07&;#177;0．33，0．60&;#177;0．22，0．57&;#177;0．12，t=3．7517，11．8526，P〈0．01）。②缺血再灌注组白细胞介素1多肽活性（A值）明显高于单纯缺血组和正常对照组，差异显著[分别为（33．7&;#177;3．2），（23．8&;#177;4．5），（23．1&;#177;2．1），t=2．7988，9．9627，P〈0．01]。③缺血再灌注组细胞间黏附分子1mRNA（A值）明显高于单纯缺血组和正常对照组，差异显著[分别为0．94&;#177;0．12，0．52&;#177;0．11，0．51&;#177;0．10，t=0．3270，6．1274，P〈0．01]。④缺血再灌注4，6，12h各组细胞间黏附分子1蛋白的表达明显高于单纯缺血组和正常对照组，差异显著[分别为（316．90&;#177;26．00），（361．40&;#177;18．00），（406．00&;#177;23．00），（164．21&;#177;2．00），（180．00&;#177;32．00）μg／L，t=1．4103，9．1193，P〈0．01]。⑤缺血再灌注12h组髓过氧化物酶活性明显高于单纯缺血组和正常对照组，差异显著[分别为（15．00&;#177;2．00），（750&;#177;1．67），（6．67&;#177;1．00）nkat／g,t=3，0122,P〈0．01]。 结论：再灌注损伤后脊髓内炎症反应是导致血脊髓屏障损害的重要分子基础，在继发性脊髓损伤过程中起到重要作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注血浆细胞因子和内皮素对红景天干预的反应

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时血浆细胞因子和内皮素含量的变化，及红景天对其变化的影响。方法：实验于2005-10／12在锦州医学院药理教研室进行。取30只SD大鼠随机数字法等分为3组：①假手术组：生理盐水按2mL／d灌胃5d后手术操作同其他组，但不夹闭右侧颈总动脉。②局灶性脑缺血再灌注模型组：生理盐水按2mL／d灌胃5d后，用10g/L戊巴比妥纳（40mg／kg）麻醉大鼠，取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一小口，将预先烧成圆头的4-0单丝尼龙缝线经该切口插入颈内动脉约（18&;#177;1）mm，将大脑中动脉起始部阻塞，1h后将栓线抽出约1cm，恢复再灌注1h。③红景天组：红景天按2mL／d灌胃给药，连续5d后与局灶性脑缺血再灌注损伤组相同。③假手术组及局灶性脑缺血再灌注损伤组、红景天组再灌注1h后均立即取血，利用放射免疫技术检测大鼠血浆细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、内皮素的水平。结果：30只大鼠全部进入结果分析。①脑局灶性缺血再灌注损伤组久鼠血中细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及内皮素含量较似丁术组明显增高[（1．40&;#177;0.14），（0.68&;#177;0.10）mg／L；（142．60&;#177;12.33），（78．60&;#177;6．42）μg／L；（168.40&;#177;3.87），（114.50&;#177;2.84）μg／L，P〈0.05]。②红景天组血中细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、内皮素含量较局灶性缺血再灌注组下降[（1．02&;#177;0.20），（1．40&;#177;0.14）mg/L;（121.00&;#177;13．96），（142．60&;#177;12．33）μg／L；（155．00&;#177;5．88）．（168．40&;#177;3.87）μg／L．P〈0.05]。结论：红景天显著降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血中细胞因子及内皮素水平，红景天的保护效应部分是由于减少血浆细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和内皮素的水平。     

脑缺血再灌注损伤大鼠血清细胞因子和内皮素水平变化及小牛血去蛋白注射液的干预作用

目的：观察小牛血去蛋白注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠血清内皮素、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的影响。 方法：实验于2004-10在锦州医学院药理教研室进行。取30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和小牛血去蛋白注射液组3组，每组10只。①假手术组和模型组灌胃给予生理盐水2mL／d，小牛血去蛋白注射液组灌胃给予小牛血去蛋白注射液2mL／d，连续5d。（爹给药5d后模型组和小牛血去蛋白注射液组采用右侧颈总动脉结扎法制作不完全性脑缺血60min再灌注模型，假手术组不结扎右侧颈总动脉。③再灌注60min后取血，利用放射免疫技术检测大鼠血清细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和内皮素水平。 结果：30只大鼠全部进入结果分析。①肿瘤坏死因子α水平：小牛血去蛋白注射液组高于假手术组[（1．08&;#177;0．15），（0．84&;#177;0．08）mg／L，P〈0．05]，但显著低于模型组[（1．32&;#177;0．13）mg／L，P〈0．01]。（爹白细胞介素6水平：小牛血去蛋白注射液组高于假手术组[（117．10&;#177;14．72），（84．60&;#177;9．57）μg／L，P〈0．05]，但显著低于模型组[（140．70&;#177;16．32）μg／L，P〈0．01]。③内皮素水平：小牛血去蛋白注射液组高于假手术组[（166．30&;#177;6．36），（130．50&;#177;3．63）μg／L，P〈0．05]，但显著低于模型组[（171．00&;#177;4．74）μg／L，P〈0．01]。 结论：小牛血去蛋白注射液显著降低脑缺血再灌注大鼠血中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及内皮素水平，保护脑结构。     

高血糖状态下大鼠脑缺血再灌注后不同时限点细胞间黏附分子1及肿瘤坏死因子α表达的差异

目的：观察高血糖状态下大鼠脑缺血再灌注后炎症介导因子细胞间黏附分子1以及促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α在不同时限点的表达及其差异。方法：实验于2003-07／2004-03在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成。36只雄性SD大鼠随机分成3组：正常血糖组16只、高血糖组16只和假手术组4只，其中高血糖组和正常血糖组又分为再灌注2，4，6，24h4个亚组。建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，其中高血糖组在阻断大脑中动脉前30 min腹腔注射500g／L葡萄糖溶液（3g／kg），各组大鼠于麻醉状态下取脑组织制备冠状切片，观察脑组织细胞间黏附分子1、肿瘤坏死因子α表达采用免疫组织化学方法。结果：36只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠脑组织细胞间黏附分子1的表达：正常血糖组缺血2h再灌注2h可见细胞间黏附分子1表达[（18．13&;#177;2．16）个／视野]，再灌注24h达高峰[（59．50&;#177;2．25）个／视野]。与正常血糖组相比，高血糖组细胞问黏附分子1表达高峰提前至再灌注6h[（76．75&;#177;2．14）个／视野]。在再灌注2，4，6h高血糖组明显高于正常血糖组，再灌注24h时低于正常血糖组（P〈0．01）。②各组大鼠脑组织肿瘤坏死因子α的表达：正常血糖组和高血糖组均在缺血2h再灌注2h时可见肿瘤坏死因子α的表达[（7．81&;#177;1．60）个／视野。（11．65&;#177;1.90）个／视野，P〈0．01]，于再灌注24h达高峰[（26．25&;#177;1．81）个／视野，（35．00&;#177;228）个／视野，P〈0．01]。在同一再灌注时间点明显高于正常血糖组（P〈0．01）。结论：高血糖状态下细胞间黏附分子1及肿瘤坏死因子α均呈高表达，但细胞间黏附分子1的表达与肿瘤坏死因子α的表达具有时间上的差异。     

血清肿瘤坏死因子α及白细胞介素6水平对下肢严重创伤病情变化的预测价值

目的：分析下肢严重创伤患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平变化对病情发展的预测价值。 方法：选择2000-01／2003-12广州市第一人民医院骨科收治下肢严重创伤患者36例，按下肢创伤严重度评分为（6．24&;#177;1．45）分，下肢创伤严重度评分〈7分29例，≥7分7例。根据感染发生与否把患者分为感染组15例和非感染组21例。正常对照组20例，为同期健康体检者。在伤后6h及入院后1，3，5，7，10，14，21d分别采集静脉血标本，应用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平变化。 结果：纳入患者36例和正常对照20例，均进入结果分析。感染组和非感染组患者肿瘤坏死因子α、白细胞介素6血清浓度与正常对照组比较均显著增高；伤后早期并发感染前，感染组患者血清肿瘤坏死因子α与非感染组相比无明显差异；并发感染后，感染组患者血清白细胞介素6在伤后6h，1，3，5，7，10，14，21d，肿瘤坏死因子α在伤后3，5，7，10，14d明显升高[感染组白细胞介素6在伤后6h，1，3，5，7，10，14，21d分别为（194．93&;#177;23．55），（372．24&;#177;130．04），（520.65&;#177;136．21），（437．85&;#177;115．11）．（380．21&;#177;81．22）。（338．62&;#177;8．37），（230．41&;#177;51．39），（126．71&;#177;20．59）μg／L，非感染组白细胞介素6分别为（56．57&;#177;7．64），（227．15&;#177;7．21），（349．78&;#177;85．13），（201．85&;#177;73．60），（188．20&;#177;96．13），（132．07&;#177;7．42），（74．24&;#177;11．13），（22．12&;#177;6．21）μg／L，P〈0．05；感染组肿瘤坏死因子α在伤后3，5，7，10，14d分别为（1.58&;#177;0.11），（1．47&;#177;0．07），（1.39&;#177;0.23），（1．38&;#177;0．06），（1．15&;#177;0.22）μg／L，非感染组肿瘤坏死因子α分别为（0．93&;#177;0．07），（0.91&;#177;0．05），（0．82&;#177;0.21），（0．81&;#177;0．28），（0．76&;#177;0.13）μg／，L，P〈0．05]。 结论：动态检测下肢严重创伤患者外周血血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的水平变化可有助于病情的评估，而动态检测下肢严重创伤患者外周血白细胞介素6的水平变化更有助于预测伤后感染并发症的发生。     

缺血预处理对兔脊髓缺血损伤后的保护作用及其机制

目的：探讨缺血预处理对兔脊髓缺血损伤的保护作用及机制。方法：24只雄性新西兰大白兔随机数字表法分3组(每组8只)：即缺血组(IC组)、缺血预处理组（IPC组)及假手术组（S组)。IC组夹闭兔腹主动脉肾下段20min，制作兔脊髓缺血模型；IPC组预先使脊髓缺血6min，再灌注30mm后再次阻闭兔腹主动脉肾下段20mm；S组除不夹闭腹主动脉外，其余处理同IC组。再灌注后8，12，24和48h分别对动物神经功能评分；再灌注后48h，测定血浆血栓素B2(TXB2，TXA2的稳定代谢产物)的含量及6-酮前列素(6-keto-PGF1α，PGI2的稳定代谢产物)的含量，然后处死动物取脊髓，测定脊髓组织中TXB2及6-keto-PGF1α的含量。结果：IPC组神经功能评分各时间点均明显高于IC组。与IC组相比，IPC组血浆和脊髓中TXB2含量明显减少，分别为(108&;#177;20)mg／L，(733&;#177;64)ng／g(P&;lt;0．05，F=27．93，132.887)，而IPC组血浆和脊髓中6-keto—PGF1α含量明显增多，分别为(75&;#177;14)mg／L，(502&;#177;37)ng／g(P&;lt;0．05，F=13．185，64．141)。IPC组血浆和脊髓中TXB2／6-keto-PGF1α分别为(145&;#177;0．17)，(1．47&;#177;0.19)，明显低于IC组(P&;lt;0．05，F=20．83，29．447)。结论：缺血预处理对脊髓缺血损伤有显著的保护作用，保护机制与缺血预处理改善脊髓缺血损伤后TXA2-PGI2平衡失调有关。     

黄芩茎叶总黄酮预处理对缺血再灌注心肌超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响

目的：分析黄芩茎叶总黄酮预处理对缺血再灌注心肌过氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005—02／12在承德医学院解剖学研究室完成，选择雄性Wistar大鼠40只，按随机数字表法分为5组，即黄芩茎叶总黄酮预处理0．05，0．1，0．2g／（kg&;#183;d）组、缺血再灌注组和假手术组，每组8只。术前分别给予黄芩茎叶总黄酮预处理0.05，0.1，0．2g／（kg&;#183;d）组大鼠黄芩茎叶总黄酮0．05，0．1，0．2g／（kg&;#183;d）灌胃，连用1周；缺血再灌注组和假手术组给予等量生理盐水，至手术前24h。除假手术组外，其余大鼠均麻醉开胸暴露心脏，穿线结扎冠状动脉缺血30min，再灌注1h，制备缺血再灌注模型。假手术组只穿线不结扎。将实验过程中不符合要求的动物剔除。实验结束后，摘取大鼠心脏，测定心肌组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果：实验过程中将不符合要求的动物剔除，并予以补足，进入结果分析40只大鼠。①各组大鼠心肌组织超氧化物歧化酶活性比较：缺血再灌注组大鼠心肌组织中超氧化物歧化酶活性显著低于假手术组[（3．68&;#177;1．35，4，83&;#177;1．33）μkat／g（P〈0．01）]，黄芩茎叶总黄酮预处理0．05，0．1．0．2g／（kg&;#183;d）组均显著高于缺血再灌注组[（4．49&;#177;1．44，4．84&;#177;1．67，4．8]&;#177;1．56）μkat／g（P〈0．05&;#177;0．01）]。②各组大鼠心肌组织丙二醛含量比较：缺血再灌注组大鼠心肌组织中丙二醛含量显著高于假手术组[（6．77&;#177;4．38，3．86&;#177;1．76）nmol／g（P〈0．01）]，黄芩茎叶总黄酮预处理0.05，0．1，0．2g／（kg&;#183;d）组均显著低于缺血再灌注组[（2．73&;#177;1．99，3．81&;#177;2．10，2．82&;#177;2．29）nmol／g（P〈0.05-0．01）]。结论：黄芩茎叶总黄酮预处理能通过增强心肌抗氧化酶的活性，抵制脂质过氧化反应，减轻自由基损害，对缺血再灌注心肌产生保护作用。3种剂量的黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌均有不同程度的保护作用，其中0．1g／（kg&;#183;d）剂量组效果较好。