苦参碱和氧化苦参碱抗大肠癌药理作用研究进展

苦参碱和氧化苦参碱能防治氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠诱发小鼠原发性结直肠癌和CT26细胞或SW480-EGFP细胞移植瘤在大鼠或小鼠体内生长。体外实验发现苦参碱和氧化苦参碱能浓度相关地抑制大肠癌SW480细胞、SW480-EGFP细胞、SW480/M5细胞、SW620细胞、SW1116细胞、LoVo细胞、HT-29细胞、Colon26细胞、HCT116细胞、HCT-8细胞、HCL细胞和LS174t细胞增殖,并诱导凋亡。苦参碱能增强奥沙利铂抗SW480细胞、SW620细胞和SW1116细胞的作用。氧化苦参碱能增强5-氟尿嘧啶抗LoVo细胞的作用。     

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:探讨PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌SW480细胞促凋亡作用的机制。方法:复苏培养PI3Kp85α干扰组SW480细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480)和SW480对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,采用Western blot方法比较两组细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim表达的差异。结果:Western blot结果显示SW480干扰组细胞PI3Kp85α蛋白抑制率为84%,5-FU刺激48h后,PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480细胞组凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim的表达较SW480对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU可通过增加促凋亡蛋白的表达促进大肠癌SW480细胞凋亡,为进一步阐明大肠癌细胞恶性增值的分子机制打下基础。     

槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与Bcl-2、C-myc表达的影响

目的:研究槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、癌基因C-myc表达的影响。方法:5、10、20、40、80、160μmol/L槲皮素处理SW480细胞后,采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;实时荧光定量反相聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测Bcl-2、C-myc mRNA和蛋白表达水平。结果:槲皮素对SW480细胞有明显抑制作用,能够诱导SW480细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关;40μmol/L槲皮素可明显抑制Bcl-2、C-myc mRNA的表达;处理48、72 h时40μmol/L槲皮素明显抑制Bcl-2、C-myc蛋白的表达(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制SW480细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性,槲皮素可能通过下调Bcl-2、C-myc的表达水平而发挥抗结直肠癌作用。     

MCL-1 siRNA通过线粒体凋亡途径部分逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性

目的 探讨顺铂耐药结肠癌细胞的MCL-1表达水平与顺铂耐药性的关系。方法 用MTT法检测顺铂耐药结肠癌细胞系SW480(SW480-R)对顺铂的敏感性。通过检测siRNA下调SW480-R 细胞MCL-1的表达作用观察其对细胞耐药性的影响。Western blot试验检测SW480-R 细胞Bcl-2家族蛋白及线粒体来源促凋亡因子的表达水平。Annexin V/PI染色检测SW480-R 细胞的凋亡。结果 SW480-R细胞相比于常规SW480细胞对顺铂的敏感性显著下降,western blot结果表明SW480-R细胞的MCL-1水平显著上调而其他Bcl-2蛋白家族成员(Bcl-2,Bcl-xl,BIM,BAK,BAX)表达水平变化不明显。体外转染MCL-1 siRNA能逆转SW480-R细胞的耐药性,提高顺铂对SW480-R的杀伤活性。在SW480-R细胞中,MCL-1 siRNA能促进线粒体来源的促凋亡因子(细胞色素C、凋亡诱导因子、Smac/DIABLO)在顺铂治疗下从线粒体中释放到细胞质中,进而诱导耐药肿瘤细胞发生凋亡。结论 MCL-1的高表达可能是结肠癌细胞产生顺铂耐药性的重要机制,MCL-1基因沉默能通过线粒体凋亡途径逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性。     

miR-346靶向调控SFRP4介导5-FU诱导的结肠癌细胞毒性

目的观察miR-346及SFRP4对5-FU诱导的结肠癌细胞毒性的影响,为结肠癌化疗增效提供新的靶基因。方法构建pcDNA3.1-SFRP4上调SFRP4表达,以pcDNA3.1-SFRP4、NC、Con-miR、miR-346、miR-346+Vector、miR-346+SFRP4等转染SW480和HT-29细胞,Western blot法观察miR-346上调或下调后对SFRP4蛋白水平的影响,MTT观察不同转染条件下5-FU细胞存活率变化,流式细胞术观察细胞凋亡变化。结果 SFRP4可增加5-FU诱导的SW480、HT-29细胞毒性及细胞凋亡,miR-346能够降低5-FU诱导的SW480、HT-29细胞毒性及细胞凋亡。miR-346对SFRP4表达具有负向调控作用。结论 miR-346通过负向调控SFRP4表达降低5-FU诱导的结肠癌细胞毒性。     

水通道蛋白-8对结肠癌细胞凋亡及凋亡抑制蛋白的影响

目的：通过表达水通道蛋白-8（AQP-8）真核表达载体,观察水通道蛋白AQP-8对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白（ IAPs）表达的影响。方法取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验。构建AQP-8真核表达载体并转染HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Real Time-PCR和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞凋亡抑制蛋白（ IAPs）家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NIAP、Survivin和Livin表达水平。结果 Western blot结果显示,GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8基因表达显著上调（ P ＜0{．05）。 MTT分析结果显示,转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率显著增加（ P ＜0．05）;流式细胞分析发现,转染了GFP-AQP-8的HT-29细胞凋亡率显著增加（ P ＜0．05）。Real Time-PCR和Western blot结果显示,与转染GFP-N1的阴性对照组相比较,转染了GFP-AQP-8的HT-29细胞c-IAP1、c-IAP1、XIAP、Livin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平下降（ P ＜0．05）,NIAP表达变化不明显（ P ＜0．05）。结论过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长,并能通过下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP、Livin和Survivin表达诱导HT-29细胞凋亡。     

丹皮酚对大肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用及其机制的探讨

目的采用定量和定性相结合的方法观察丹皮酚对HT-29细胞的增殖抑制作用并对其可能的作用机制进行探讨。方法用MTT法和流式细胞仪定量测定丹皮酚对HT-29细胞的抑制率及细胞凋亡率,选用TUNEL法及细胞免疫组化从形态学方面探寻丹皮酚对HT-29细胞作用的可能机制。结果丹皮酚在0.024~1.504 mol.L-1剂量下对体外培养的大肠癌HT-29细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的浓度效应关系;在此浓度(0.024~1.504 mol.L-1),分别作用24,48,72和96 h,抑制率随之增加,呈明显的时间效应关系;经1.504 mol.L-1的丹皮酚处理的HT-29细胞,细胞凋亡率明显增加与阴性对照有明显差异;流式细胞仪检测在G1期前出现sub-G1峰,S期细胞增多,G1、G2期细胞减少,随着丹皮酚浓度的增加,HT-29细胞的凋亡率逐渐增加,每个实验组的凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05);丹皮酚作用HT-29细胞可使Fas/FasL表达增加。结论丹皮酚可能通过上调大肠癌HT-29细胞Fas/FasL蛋白的表达而诱导细胞凋亡是其抑制大肠癌细胞增殖的机制之一。     

塞来昔布对结肠癌HT-29细胞生长及骨桥蛋白表达的影响

目的 观察塞来昔布对结肠癌HT-29细胞的生长、凋亡和骨桥蛋白(OPN)表达的影响.方法 体外培养结肠癌HT-29细胞分为对照组和不同浓度塞来昔布干预组.MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞的凋亡,RT-PCR和免疫组化分析细胞中的OPN mRNA与OPN蛋白表达变化.结果 塞来昔布对HT-29细胞增殖有明显的时间与浓度依赖性抑制作用(P＜0.01).塞来昔布能诱导HT-29细胞凋亡,塞来昔布15、30和50μmol/L的细胞凋亡率分别为28.2％、32.8％和33.1％,均明显高于对照组的26.0％ (P＜0.05).药物干预组OPN mRNA及OPN蛋白表达明显低于对照组(P＜0.01).结论 塞来昔布可能通过抑制OPN表达而抑制结肠癌HT-29细胞的增殖,诱导其凋亡.     

靶向P75NTR的siRNA技术诱导U251胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:利用靶向P75神经营养因子受体(P75NTR)基因的小干扰(siRNA)技术诱导胶质瘤凋亡.方法:利用脂质体介导P75NTR-siRNA质粒转染U251胶质瘤细胞系,RT-PCR方法检测P75NTR的mRNA表达以确定基因沉默效果,绘制细胞生长曲线,原位细胞凋亡实验检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测稳定转染后第3天时P75NTR、促凋亡基因Caspase-3和凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达.结果:转染P75NTR siRNA质粒后U251细胞P75NTR的mRNA表达水平显著下降,细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量增加.与对照组和空载组比较,P75NTR与Bcl-2在RNAi组蛋白表达水平显著降低,Caspase-3则明显升高.结论:靶向P75NTR的siRNA技术可通过调控凋亡相关基因表达机制诱导胶质瘤细胞凋亡.     

红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究

目的 红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究。方法 体外培养人结肠癌 LoVo 细胞,在不同浓度(0.5、1.0、1.5 g·L-1)的红花多糖处理后,分别在干预24、48、72 h后采用 MTT 比色法测定红花多糖对LoVo细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI 双标法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平及检测Caspase-3活性,Western-blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况;应用Transwell细胞侵袭试验检测红花多糖对结肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响。结果 MTT 检测显示红花多糖能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞的生长、増殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜显示红花多糖能使结肠癌LoVo 细胞出现典型凋亡特征;流式细胞仪分析结果提示红花多糖具有调节人结肠癌LoVo细胞周期的功能。RT-PCR实验和Western-blot实验结果显示随着红花多糖浓度增加可促进LoVo细胞中Bax、Caspase-3 mRNA表达,并抑制 Bcl-2 mRNA表达。Transwell侵袭实验示随着红花多糖浓度增加,LoVo 细胞侵袭能力降低。结论 红花多糖能显著促进人结肠癌 LoVo 细胞凋亡,可使结肠癌LoVo 细胞增殖受到抑制,侵袭能力减弱,调节细胞周期,红花多糖的抗肿瘤的生物学效应可能与Bax、Bcl-2、Caspase-3 的信号通路有关。     

树突状细胞对肿瘤细胞株的直接杀伤活性

目的 对比分析干扰素－γ（Interferon-γ,IFN-γ)或脂多糖（lipoplysaccharide,LPS)刺激后的树突状细胞（dendritic cell,DC)对肿瘤细胞杀伤活性的差异。方法 分离健康供者外周血单核细胞，用粒单细胞集落刺激因子和白介素－4诱导为DC。于培养液中加入LPS或IFN－γ培养12h，作为LPS激活的DC（LPS－DC）及IFN－γ激活的DC（IFN－DC）。用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的改变，以明确LPS或IFN－γ对DC的不同刺激作用；同时，以恶性血液病细胞株HL－60 Jurkat及Daudi为靶细胞，用不同效靶比与DC共同培养18h，采用^51Cr释放试验检测LPS－DC及IFN－DC抗肿瘤活性的差异。结果 ①LPS及IFN－γ可不同程度的上调DC表面CD86、CD80、CD83及CD1a的表达，以LPS刺激组明显。②IFN－γ和LPS可分别增强DC对HL60及Daudi的杀伤活性，在效靶比为20：1及10：1时杀伤率与未加刺激因子对照组（medium-DC)相比差异有显著意义（P＜0．05）。相反，IFN－γ－DC对Daudi、LPS－DC对HL－60无明显杀伤活性，但两者对Jurkat均具杀伤作用。结论 LPS及IFN－γ激活的DC对肿瘤细胞的杀伤活性具有相对肿瘤特异性。     

Expression of NDRG2 in clear cell renal cell carcinoma

Clear cell renal cell carcinoma (CCRCC) is the most common pathological type of renal cell carcinoma and the main cause of renal carcinoma mortality. NDRG2, a new member of the N-Myc downstream-regulated gene (NDRG) family, is a focus for study at present. Up to now, its expression and function in carcinoma remain unclear. The aim of this study was to investigate its expression in CCRCC tissues and several renal carcinoma cell lines. The expression of NDRG2 was evaluated in renal cell carcinoma cell lines, tumor and adjacent non-tumor tissues from same clear cell renal cell carcinoma patients, by using immunohistochemistry, immunofluorescence, RT-PCR and Western blot. By immunohistochemistry and immunofluorescence we found that NDRG2 was predominantly located in the cytoplasm and membrane of renal carcinoma cancer cells, and the positive rate of NDRG2 in renal carcinoma specimens was 30.3% (40/132), which is significantly lower than 91.67% (121/132) in normal renal tissues (p<0.01). The average staining score in normal renal tissues was significantly higher than renal carcinoma (6.12+/-1.84 versus 2.65+/-1.23, p<0.01). Moreover, NDRG2 mRNA and protein were down-regulated in 6 fresh CCRCC tissues compared with their adjacent noncancerous tissues and normal tissues. Its expression was also lower in the human CCRCC-derived cell lines A-498 and 786-O than in the human proximal tubular cell lines HK-2 and HKC. These results indicated that NDRG2 might play an important role in the carcinogenesis and development of CCRCC and may function as a tumor suppressor in CCRCC.     

Chemical control of cell differentiation of human myeloleukemia K562 cell line

Human myeloid leukemia K562 cells can be induced to differentiate to mature cells bidirectionary, i.e., hemin induces erythroid differentiation, while 12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA) induces differentiation to monocytes. The differentiation-inducing activity of various hemin-related compounds suggested certain structural requirements for the activity: 1) the iron moiety of hemin is not essential, and 2) the propionic acid side chains of hemin play an important role in the differentiation and induction. In addition, we have examined the influence of some bioresponse-modifying factors on hemin/protoporphyrin IX-induced differentiation of K562 cell line. Retinoids and tubulin-disruptors, themselves did not induce differentiation, enhanced hemin/protoporphyrin IX-induced differentiation of K562 cells. We also examined the possible involvement of peripheral-type benzodiazepine receptor (PBR) in hemin/protoporphyrin IX-induced differentiation on K562 cell lines. The PBR specific ligands modified hemin-induced differentiation. These results suggest a requirement for retinoids (or retinoids-like cofactors) for hemin/protoporphyrin IX-induced differentiation of K562 cells and the involvement of PBR in erythroid differentiation of K562 cell line. Further we showed that TPA suppresses hemin-induced erythroid differentiation of K562 cells, while retinoids augment it. TPA is a potent inducer of heme oxygenase (HO), which catabolizes heme to biliverdin. An HO inhibitor, tin protoporphyrin (SnPP), suppresses TPA-induced K562 cell differentiation to monocytes. It was also found that cotreatment of K562 cells with SnPP and TPA induces erythroid differentiation of K562 cells, though SnPP alone or TPA alone does not induce erythroid differentiation, suggesting a role of HO in the directional switch of differentiation.     

茶多酚对人鼻咽癌细胞株CNE_2细胞DNA损伤和细胞周期的影响

目的　观察茶多酚（ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ, ＴＰ） 对人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 的损伤作用和细胞周期的影响。方法　用琼脂糖凝胶电泳方法测定ＴＰ对细胞ＤＮＡ的断裂作用;用流式细胞术（ＦＣＭ） 观察ＴＰ对ＣＮＥ２ 细胞周期的变化及其诱导凋亡。结果　ＴＰ可引起ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 断裂、其断裂程度随剂量的增加和作用时间的延长而增强。ＴＰ不同浓度和不同作用时间可干扰ＣＮＥ２ 细胞在周期中的进程,使Ｇ１ 期细胞明显增多,Ｓ期细胞减少,细胞分裂增殖指数（ＰＩ）亦随之降低。同时,ＴＰ可诱导ＣＮＥ２ 细胞凋亡,其凋亡率随ＴＰ浓度的增加和作用时间的延长在逐渐增加。结论　ＴＰ１９９８ １２ ０４ 收稿,１９９９ ０７ ３１ 修回＊ 国家自然科学基金资助课题,Ｎｏ ３９３７０８００作者简介：谢冰芬,女,副研究员,硕士生导师,研究方向为肿瘤药理可引起人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞的ＤＮＡ 断裂,使细胞停滞于Ｇ１ 期,阻止Ｇ１ 期细胞进入Ｓ期;同时亦可诱导细胞凋亡,这些结果可能为ＴＰ的抗瘤作用提供理论依据     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究低浓度乙醇对肝癌细胞的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝比色法观察乙醇对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪法观察乙醇对肝癌细胞内活性氧的影响；采用琼脂凝胶电泳法观察DNA片断化条带。结果低浓度乙醇可明显抑制细胞增殖；乙醇作用于细胞后2h内引起活性氧产生，24h后细胞出现典型的凋亡表现。结论乙醇能够通过诱导细胞内活性氧的产生引起细胞凋亡，呈明显的剂量依赖性。     

Circuits of the cell

Networks of gene regulation control many aspects of cellular biology, ranging from development and differentiation to the cell cycle and apoptosis. However, the precise control of genetic regulation is poorly understood for whole cells and large systems. Technical achievements in the genome-wide measurement of DNA, mRNA and proteins - and their assorted interactions - have enabled systematic approaches to regulation in molecular biology, which promise to shed new light on the complex architecture of gene regulatory networks. Detailed knowledge of such systems is crucial for our understanding of molecular phenotypes; similarly, our ability to treat and cure many diseases will depend on our understanding of molecular disease at its regulatory and mechanistic roots.