特异性阻断Shh信号通路对胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的:研究Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法:用四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胃癌细胞系SGC-7901增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)。结果:Cyclopamine对SGC-7901细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性;Cyclopamine作用后使胃癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加。结论:Shh信号分子对胃癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡。     

(±)2-(7,8,3,′4,′5′-五甲氧基)黄烷通过诱导周期阻滞和细胞凋亡抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖

目的研究(±)2-(7,8,3′,4′,5′-五甲氧基)黄烷(PMF)体外对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度PMF体外对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测PMF对细胞周期分布的影响;Western blot法检测PMF对凋亡相关蛋白PARP、caspase-3表达的影响。结果不同浓度的PMF作用72 h可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖;PMF作用12 h可使SGC-7901细胞周期阻滞于G2/M期;PMF作用24 h细胞周期检测可见亚二倍体峰(SubG1),并可诱导细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase-3的活化。结论PMF体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞和细胞凋亡有关。     

姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2mRNA和COX-2蛋白表达的影响

目的：探讨姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及对环氧酶-2（C0X-2）基因及蛋白表达的影响。方法：应用MTT法考察浓度姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;应用RT-PCR、Western-blotting法检测COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果：5～80μg.mL-1姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。姜黄素对COX-2mRNA和COX-2蛋白的表达有不同程度的抑制作用,随着剂量的增加,抑制作用增强,较高浓度（20～80μg.mL-1）的姜黄素对COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达有显著抑制作用（P〈0.01）。结论：姜黄素可能通过抑制COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达抑制胃腺癌细胞SGC-7901的增殖,可能成为一种胃癌预防剂。     

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的 探讨曲古菌素A(TSA)体外抑制人胃癌SOC-7901细胞凋亡及其死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达的影响.方法 体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA(37.5、150、600ng/ml)处理后.用Annexin V/PI检测细胞凋亡率.RT-PCR、Western blot分别检测DAPK1 mRNA和蛋白表达水平.结果 AnnexinV/PI检测发现,不同浓度TSA可显著诱导SOC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05);TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平很低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈溶度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因的低乙酰化状态逆转有关.     

中药抑制血管平滑肌细胞增殖的新途径-mTOR

血管平滑肌细胞异常增殖是动脉粥样硬化等多种疾病的病理基础。哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）可被PKB磷酸化后激活．作用于下游信号分子，具有调控细胞的存活、增殖和凋亡等重要功能。雷帕霉素能特异性地与mTOR结合，抑制下游底物活化．阻止下游底物的活化．阻止细胞周期进程。某些中药的有效成分可作用于PI3K—mTOR通路，抑制血管平滑肌细胞增殖。     

胃泌素对胃癌细胞增殖和COX-2表达的影响

目的 探讨胃泌素和胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对胃癌细胞株SGC-7901增殖和环氧化酶2(COX-2)表达的调控作用.方法 SGC-7901细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中常规培养24 h后,换无血清培养基继续培养24 h,加入胃泌素(终浓度为0.1、1、10、100 nmol/L)或胃泌素(100 nmol/L)加丙谷胺(终浓度为1、10、100、1000 μmol/L),分别培养24、48和72 h;MTT比色分析细胞增殖,Western blot检测COX-2蛋白表达.结果 胃泌素呈时间和剂量依赖性地促进SGC-7901细胞增殖,而丙谷胺抑制了胃泌素诱导的细胞增殖.胃泌素增加COX-2在SGC-7901细胞的表达,丙谷胺有效抑制胃泌素诱导的COX-2表达.结论 胃泌素通过胃泌素受体诱导COX-2表达促进胃癌细胞增殖.     

希佩尔-林道综合征相关肾细胞癌的通路及其靶向药物的研究进展

希佩尔–林道(VHL)综合征以VHL基因突变为疾病的基础起源.VHL突变可以使同一患者一生中诱发多种不同部位的良恶性肿瘤.肾细胞癌是VHL患者重要的临床类型,也是患者死亡的重要原因.包括血管内皮生长因子(VEGF)通路、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路、缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)通路、促红细胞生成素(EPO)通路...     

硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系

目的硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系。方法 Brdu ELISA法测细胞增殖活性;Boyden小室培养测细胞的迁移率;Western blot测细胞uPA、NF-κB的蛋白水平;细胞免疫化学测NF-κB细胞表达及细胞定位。结果 (1)与对照组(无血清培养基组)相比,10%FCS组细胞增殖活性与迁移率明显增高(P<0.05);与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及迁移,硼替佐米浓度为(4μg.L-1),人胃癌SGC-7901细胞增殖活性与迁移率均明显降低(P<0.05);与PDTC组(10μmol.L-1)相比,两者无明显差别;(2)与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB蛋白表达,硼替佐米浓度为(4μg.L-1)时uPA、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05);与NF-κB特异性抑制剂PDTC组相比,两组uPA、NF-κB表达均无明显差别;硼替佐米浓度为(4μg.L-1)能明显降低NF-κB核蛋白含量,与PDTC组相比,两者无显著差异(P>0.05);(4)细胞免疫化学结果示:硼替佐米(4μg.L-1)抑制10%FCS诱导人胃癌SGC-7901细胞NF-κB核移位。结论①硼替佐米抑制血清诱导胃癌SGC-7901细胞增殖迁移及uPA、NF-κB蛋白表达,②硼替佐米降低胃癌SGC-7901细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB活性,降低UPA水平有关。     

缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合酶在胃癌细胞SGC-7901中的表达研究

目的缺氧是实质性肿瘤(包括胃癌)微环境的基本特征之一。缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是广泛存在于多种细胞的转录因子,对低氧时肿瘤细胞相关基因的表达发挥着重要调控作用。本课题将研究缺氧对胃癌细胞SGC-7901表达HIF-1α及iNOS的影响。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,分为常氧对照组和缺氧(1%O2)1、6、12、24h时点,采用逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学分别检测各时点的HIF-1α,iNOSmRNA及蛋白质的表达水平。结果 (1)半定量RT-PCR结果提示:与对照组比较,各缺氧时点HIF-1αmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。iNOSmRNA在常氧对照组有少量表达,缺氧1h表达量与其差异不显著(P>0.05),而缺氧6、12、24h表达量显著高于常氧对照组(P<0.05)。(2)免疫细胞化学结果:HIF-1α蛋白在常氧对照组中未见表达,而iNOS蛋白有少量表达;二者随缺氧时间增加而表达增加。结论 (1)缺氧(1%O2)对胃癌细胞SGC-7901表达HIF-1α的调控在蛋白质水平,而不在mRNA水平。(2)胃癌细胞SGC-7901缺氧时HIF-1α表达增加并上调其下游基因iNOS的mRNA及蛋白质的表达。     

雷帕霉素抑制mTOR活性诱导细胞的生长和下调EBV+人鼻咽癌细胞HIF-1α介导的VEGF表达

目的 观察雷帕霉素(Rap)体外对人鼻咽癌HNE-1EBV+和CNE-1EEBV-细胞乏氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及生长抑制作用.方法 采用MTT法检测Rap作用72 h IC50;用RT-PCR和ELISA分别测定Rap作用24 h后,细胞HIF-1α mRNA和培养上清液中VEGF的表达水平.结果 Rap呈剂量依赖性地抑制HNE-1EBV+和CNE-1EBV-细胞的生长,IC50分别为43.9、41.7 μmol·L-1;Rap使HNE-1EBV+细胞HIF-1α mRNA和VEGF表达水平分别下调了24％、55％,但对CNE-1EBV-细胞无明显影响.结论 Rap对两株鼻咽癌细胞具有相当的生长抑制作用,可显著下调HNE-1EBV+细胞HIF-1α介导的VEGF表达,提示Rap对于改善EBV+鼻咽癌的治疗预后具有潜在的作用.     

平胃汤诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨不同浓度复方平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及可能的机制。方法以细胞超微结构和细胞凋亡情况评价不同浓度(120、240或480 mg/ml)平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞的影响。结果 1与空白组比较,平胃汤组细胞超微结构变化显著(细胞内线粒体数目增加且体积增大、细胞膜较完整),细胞增殖抑制率和凋亡率明显增高,且具有一定的时间及剂量依赖性(P<0.05);2与空白组比较,平胃汤组Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论平胃汤能促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与Bax表达增高以及Bcl-2表达降低有关。     

p12-LOX抑制剂对人胃癌SGC-7901细胞的作用

目的 观察血小板型12-脂氧合酶(p12-LOX)在人胃癌SGC-7901细胞(中分化胃腺癌细胞)中的表达及黄芩素(baicalein,Bai)对其生长的作用.方法 用四氮唑蓝(MTT)染色法及流式细胞仪(FCM)检测Bai对SGC-7901细胞增殖及周期的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测SGC-7901细胞中p12-LOX mRNA的表达及Bai对血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达的影响.结果 Bai能抑制SGC -7901细胞的增殖,并呈一定的时间、浓度依赖性.FCM结果表明,随着Bai浓度的增高,G0/G1期细胞比例从(62.27±3.20)%降低到(29.36±1.37)%,而S期细胞比例从(23.18±1.39)%升高到(68.21±1.64)% .SGC-7901细胞中存在p12-LOX mRNA表达;Bai降低VEGF mRNA的表达,且呈一定的浓度依赖性.结论 Bai可抑制SGC-7901细胞增殖,影响细胞周期的分布.     

白藜芦醇对CXCL12 诱导的胃癌细胞增殖的影响

目的　探讨白藜芦醇对趋化因子CXCL12 诱导的人胃癌SGC-901 细胞增殖及其CXCR4、CXCR7和VEGF mRNA 表达的影响。 方法　用CXCL12 刺激人胃癌SGC-7901 细胞后,采用MTT 法检测细胞增殖率;应用RT-PCR 法检测细胞内CXCR4、CXCR7 和VEGF mRNA 的表达水平。同时观察白藜芦醇对CXCL12所诱导的人胃癌SGC-7901 细胞增值率,CXCR4、CXCR7 和VEGF mRNA 表达水平的影响。结果　不同浓度的CXCL12 均可以显著促进人胃癌SGC-7901 细胞体外增殖（P<0.001）。CXCL12 可显著上调SGC-7901 细胞 CXCR4、CXCR7 和VEGF 的mRNA 表达,而白藜芦醇显著抑制CXCL12 所诱导的胃癌细胞体外增殖和CXCR4、CXCR7、VEGF mRNA 的表达。结论　白藜芦醇抑制CXCL12 诱导的胃癌细胞增殖,其机制可能与下调CXCR4 和CXCR7 水平,从而抑制VEGF 分泌有关。     

CCL21对胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化的影响史冠男1,袁媛2,彭琼1,戴 夫1

目的 探讨趋化因子CCL21能否参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化。方法 取不同浓度的CCL21(0、50、100、150ng/ml)作用胃癌SGC-7901细胞,划痕试验检测细胞侵袭能力。镜下观察细胞形态的变化。Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9的蛋白表达。结果 150ng/ml CCL21作用胃癌SGC-7901细胞后,较其它浓度侵袭能力最强,同时使胃癌SGC-7901细胞形态发生变化,细胞逐渐变为长梭状,部分可见伪足生成。E-cadherin蛋白表达下降(p<0.05),N-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白表达升高(p<0.05)。结论 趋化因子CCL21可能参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化,进而促进该肿瘤细胞的侵袭转移。     

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。     

熊果酸和环氧化酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖的影响

目的 探讨熊果酸和美洛昔康对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的调控作用.方法 SGC-7901细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,常规培养24 h后加熊果酸或美洛昔康,约物终浓度均为10、20、40、80μmol/L,分别培养12、24和48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析细胞增殖,Western blot检测环氧化酶-2(COX-2)表达.结果 熊果酸和美洛昔康两者均剂量和时间依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,熊果酸的抑制作用小于美洛昔康(P＜0.05).熊果酸和美洛昔康剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞COX-2表达,熊果酸抑制COX-2表达的作用小于美洛昔康(P＜0.05).结论 熊果酸和美洛昔康均抑制胃癌细胞增殖;其机制可能与COX-2表达下调有关.     

维生素K2与苯那普利诱导胃癌细胞凋亡及抑制血管生成的体外实验研究

目的:通过体外细胞培养观察维生素K2联合苯那普利对人胃癌SGC-7901细胞的影响,以探讨两者对胃癌细胞的影响及有无协同作用。方法:通过人胃癌SGC-7901细胞培养,将处于对数生长期的SGC-7901细胞分成5组:药物组(维生素K2组、苯那普利组、联合组)、阴性对照组和空白对照组,阴性对照组不加药,空白对照组不加细胞。加入不同终浓度的药物(维生素K2:5、10、20、40、80μmol/L)或(苯那普利:0.625、1.25、2.5、5、10μg/mL)或(维生素K2+苯那普利)。分别培养24、48和72 h。利用MTT实验检测细胞生长抑制率,流式细胞仪Annexin V/PI双染法及梯状DNA电泳检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果:药物组能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,且具有明显的剂量-效应关系,在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡及抑制VEGF表达方面,联合组较单独药物组作用更强。结论:维生素K2与苯那普利联合有协同作用,能通过诱导细胞凋亡、抑制VEGF的表达抑制胃癌细胞增殖。     

虎杖苷通过蛋白激酶 B信号通路影响胃癌细胞增殖凋亡

目的 研究虎杖苷对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响和机制.方法 虎杖苷处理胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测增殖,平板克隆实验检测克隆形成能力,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期分布,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、Bcl-2相关X(Bax)、剪切型胱天蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达.用蛋白激酶B(Akt)信号激活剂和虎杖苷联合处理胃癌细胞SGC-7901,检测细胞增殖、克隆、周期、凋亡变化.结果 虎杖苷处理以后的胃癌细胞SGC-7901增殖能力下降[(0.58±0.06)比(0.20±0.01)],细胞克隆形成数目减少[(118.54±10.65)个比(69.52±7.91)个],细胞凋亡增多[(2.97±0.32)％比(17.45±1.69)％],细胞G0/G1比例升高[(50.47±3.25)％比(67.13±3.84)％],cyclin D1、CDK4蛋白表达减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平升高,p-Akt蛋白水平降低[(0.51±0.05)比(0.24±0.03)].Akt信号激活剂处理可以逆转虎杖苷对胃癌细胞SGC-7901增殖、克隆抑制和周期阻滞、凋亡促进作用.结论 虎杖苷通过抑制Akt信号通路阻碍胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂dar-bufelone对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。方法MTT法测定darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR法分析SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2 mRNA的表达;免疫细胞化学法检测胃癌SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2蛋白质的表达。结果dar-bufelone以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞增殖;1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone作用72 h后,细胞凋亡率分别为(30.3±2.1)%、(23.0±2.0)%和(15.0±1.5)%,均高于对照组(0.6±0.1)%(P<0.01);1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,5-LOX和COX-2 mRNA及其蛋白质表达均减少(P<0.05)。结论环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂darbufelone对人胃癌SGC-7901细胞株有抑制增殖、诱导凋亡的作用。