低氧诱导肾细胞癌786-O细胞HIF-1α的表达变化及意义

目的探讨缺氧条件下肾透明细胞癌786-O细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化及意义。方法786-O细胞在缺氧条件下培养不同时间（0、8、16、24h）后,RT-PCR法检测HIF-1α mRNA的转录情况;Western blot法检测HIF-1α蛋白表达变化。结果常氧状态下HIF-1α mRNA和蛋白均有一定表达。缺氧处理一定时间（8、16、24h）后786-O细胞HIF-1α mRNA表达没有明显改变（P〉0．05）,而HIF-1α蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）。结论缺氧条件下786-O细胞HIF-1α表达变化主要在翻译水平而非转录水平。在蛋白水平对HIF-1α表达进行调控可作为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

低氧诱导体外培养绒毛组织sFlT-1表达的实验研究

 目的 探讨低氧对体外培养的绒毛组织可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlT-1)表达的影响.方法 孕早期的绒毛组织体外分两组培养:常氧照组和缺氧组.应用RT-PCR方法检测sFlT-1基因mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中sFlT-1蛋白水平.结果 与常氧组相比,缺氧组绒毛组织的sFlT-1基因mRNA表达水平增加,sFlT-1蛋白水平也增加.结论 缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织sFlT-1基因表达,产生sFlT-1增加.缺氧可能是子痫前期胎盘组织sFlT-1高表达的原因.     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α蛋白和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响.方法:选用健康雄性SD大鼠72只,随机分为9组.采用递增负荷跑台训练及低氧、超低氧两种不同程度的递增低氧刺激,在运动中和运动后给予低氧处理.应用免疫组织化学、原位杂交、计算机显微图像分析等方法,检测HIF-1α、VEGF mRNA在骨骼肌组织中的定位及含量.采用相关分析方法,分析低氧训练骨骼肌HIF-1α蛋白表达对骨骼肌VEGF转录的促进作用.结果与结论:低氧和运动训练可增加骨骼肌组织HIF-1α蛋白和VEGF mRNA含量,低氧训练骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的增加对VEGF基因转录具有促进作用.     

缺氧诱导因子-1α对肺动脉平滑肌细胞端粒酶反转录酶的转录调节作用

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中端粒酶反转录酶(TERT)表达的调控作用.方法 培养大鼠PASMC,采用RT-PCR分别检测HIF-1α激动剂(CoCl2、DFX)、HIF-1α抑制剂(FAS)、代谢抑制剂(CBZ-LLL)、反义寡核苷酸等作用后及缺氧条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达,Western blotting检测HIF-1α蛋白的表达.结果 缺氧4h条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达量(分别为0.59±0.07、0.60±0.06)明显高于对照组(分别为0.11±0.02、0.10±0.01,P＜0.05).与对照组相比,加入DFX后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.52±0.06、0.45±0.04)明显升高(P＜0.05);加入CoCl2后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.99±0.08、0.72±0.07)也明显升高(P＜0.05).加入FAS后,HIF-1α、TERT的mRNA表达量(分别为0.09±0.01、0.13±0.01)较缺氧组(分别为0.65±0.06、0.52±0.04)明显降低(P＜0.05).加入CBZ-LLL后,HIF-1α mRNA表达量(0.09±0.01)与对照组(0.06±0.01)比较无明显差异(P＞0.05),但TERT mRNA表达量(0.82±0.07)较对照组(0.08±0.01)明显升高(P＜0.05).加入CoCl2和CBZ-LLL后,HIF-1α蛋白表达量(分别为12.0±1.1、9.0±0.8)较对照组(1.0±0.1)明显升高(P＜0.05).缺氧条件下,加入反义寡核苷酸后TERT mRNA表达量(0.20±0.01)较缺氧组(0.75±0.06)明显降低(P＜0.05),但加入错配寡核苷酸的TERT mRNA表达量(0.70±0.06)与缺氧组相比无明显差异(P＞0.05);常氧条件下,同时加入反义寡核苷酸、CoCl2后PASMC的TERT mRNA表达量(0.45±0.04)较CoCl2组(0.95±0.08)明显降低(P＜0.05).结论 HIF-1α对缺氧状态下大鼠PASMC中TERT的表达具有调控作用.     

缺氧诱导因子1α在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心房纤维化中的表达及其可能机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,随机均分为空白对照组、ISO组、ISO+西罗莫司(Rapa)干预组(Rapa组).于实验15d时处死大鼠取心肌组织,放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,HE和Masson染色法观察纤维化程度即胶原容积分数(CVF),免疫组织化学法、Western blotting检测HIF-1α、转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在大鼠心房纤维化组织中的表达,并分析HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量与心房纤维化指标CVF的相关性,以及HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量之间的相关性.结果 ISO组、Rapa组AngⅡ含量较空白对照组明显升高(P＜0.01).空白对照组CVF为15.482％±0.837％,无心房纤维化,而Rapa组、ISO组CVF分别为16.730％±1.052％、86.704％±1.928％,Rapa组较ISO组的心房纤维化程度明显减弱(P＜0.01).免疫组化及Western blotting检测显示,与空白对照组相比,ISO组HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均明显增加(P＜0.01),与ISO组比较,Rapa组中HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量明显降低(P＜0.01). HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均与心房纤维化程度(以CVF为评价指标)呈正相关(r=0.987,r=0.988,r=0.917,P＜0.01); HIF-1α与TGF-β1、MMP-9蛋白表达量呈正相关(r=0.976,r=0.901,P＜0.01),MMP-9与TGF-β1蛋白表达量亦呈正相关(r=0.912,P＜0.01).结论 在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化过程中,AngⅡ、HIF-1α、TGF-β1、MMP-9发挥着重要作用.     

Wnt阻滞剂Dickkopf-1对肾小管上皮细胞转分化的抑制作用

目的 研究Wnt阻滞剂Dickkopf-1 (Dkk-1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),收集后分3组:对照组细胞以含10％胎牛血清的培养基常规培养,TGF-β1组在常规培养基中加入TGF-β1(终浓度20ng/ml),TGF-β1+Dkk-1组同时加入TGF-β1(终浓度20ng/ml)和Dkk-1(终浓度100ng/ml).培养48h后在倒置相差显微镜下进行形态观察,分别采用RT-PCR和Western blotting检测Wnt4、β-catenin、E-cadherin、α-SMA mRNA及蛋白表达情况,细胞免疫荧光染色观察E-cadherin和α-SMA的表达.结果与对照组比较,TGF-β1组和TGF-β1+Dkk-1组Wnt4 mRNA和蛋白表达水平均显著增高(P＜0.05),后两组间差异无统计学意义(P＞0.05).β-catenin mRNA表达在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).β-catenin蛋白在对照组呈低表达,TGF-β1组表达明显上调,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达下调(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).E-cadherin mRNA和蛋白在对照组呈高表达,TGF-β1组表达明显降低,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达显著增高(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).α -SMA mRNA和蛋白表达在对照组和TGF-β1+Dkk-1组的表达均较TGF-β1组明显降低(P＜0.05).细胞免疫荧光染色显示E-cadherin和α-SMA表达与RT-PCR和Western blotting检测结果一致.结论Wnt阻滞剂DickkopGl能抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

低氧训练对AMPKα2三种基因状态鼠骨骼肌HIF-1α mRNA表达的影响

目的:探讨低氧耐力训练对AMPKα2基因敲除(KO)、高表达转基因(OE)及野生型(WT)小鼠骨骼肌HIF-1α mRNA表达的影响。方法:WT、KO及OE鼠各30只,分别随机分为常氧对照组、低氧暴露组和低氧训练组。常氧对照组在常氧状态下饲养14天;低氧暴露组在低氧环境(模拟海拔4000米高度,氧浓度约12.3%)下饲养14天;低氧训练组在与低氧暴露组相同的低氧环境下饲养并连续14天进行跑台训练(12 m/min,1 h/day)。14天后断食12 h取材,测定小鼠骨骼肌AMPKα2蛋白和HIF-1α mRNA表达。结果:(1)OE和WT鼠低氧暴露组、低氧训练组骨骼肌AMPKα2蛋白表达与常氧对照组相比均无显著性差异,KO鼠骨骼肌无AMPKα2蛋白表达。(2)OE鼠、KO鼠和WT鼠低氧训练组骨骼肌HIF-1α mRNA表达量与低氧暴露组相比显著增加。(3)低氧训练下,OE鼠骨骼肌HIF-1α mRNA表达量与WT鼠相比有显著性差异。结论:低氧训练中AMPKα2对骨骼肌HIF-1α mRNA表达起重要作用,但并非HIF-1α表达的必要条件。     

常压模拟高住低练对大鼠心肌低氧诱导因子1α基因表达的影响

目的:探讨常压下不同低氧(14.5%、12.6%氧含量)模拟高住低练对低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达的影响,为运动与低氧适应提供理论依据.方法:采用RT-PCR技术检测大鼠心肌HIF-1α mRNA水平.结果:与低住安静组和低住低练组比较,模拟海拔3000m急性模拟高住低练组和模拟高住低练组HIF-1α mRNA表达均显著上调;模拟海拔4000m急性模拟高住低练组HIF-1α mRNA表达显著上调,模拟高住低练组则无显著性差异,而显著性低于急性模拟运动组.提示不同海拔低氧刺激与运动对HIF-1α mRNA表达的影响不同,3000m海拔比4000m更为适宜.     

尾悬吊模拟失重大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α表达变化

目的 研究模拟失重环境下大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化.方法 取性成熟期健康雌性Wistar大鼠60只作为研究对象,体重200±20g,随机分为10组(n=6),按模拟失重时相分为悬吊0.25、0.5、1、2、3、5、7、14、21d组和0d组(对照组).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠卵巢组织中HIF-1 α的表达分别应用免疫组织化学和RT-PCR方法进行检测.结果 各实验组及对照组大鼠卵巢卵泡卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞中均可见HIF-1α阳性染色细胞.对照组大鼠卵巢HIF-1 α染色阳性颗粒主要位于细胞质中,悬吊0.25d和0.5d组大鼠卵巢卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞的HIF-1α颗粒由细胞质向细胞核转移;尾悬吊1d组HIF-1 α表达情况与对照组接近,HIF-1α核染色消失.尾悬吊0.25d、0.5d大鼠卵巢HIF-1α mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05),持续尾悬吊1d以后各组卵巢HIF-1α的蛋白和mRNA水平逐渐恢复至对照组水平.结论 尾悬吊模拟失重使大鼠卵巢组织中HIF-1α蛋白及mRNA表达发生明显变化,早期同步过表达,提示卵巢HIF-1α表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.     

肝细胞生长因子对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法将体外培养的HKC分为正常组、TGF-β1组、HGF组、TGF-β1 HGF组、延迟加入HGF组。应用间接免疫荧光技术观察HKC中α-SMA蛋白、E-cadherin的表达。用RT-PCR技术检测细胞中α-SMA mRNA的表达。结果免疫荧光技术显示,TGF-β1能诱导HKC表达α-SMA蛋白,减少E-cadhefin表达;同时加入HGF能减少α-SMA蛋白表达,而延迟加入HGF能使部分转分化的HKC细胞恢复E-cadherin的表达。RT-PCR结果显示,正常组无α-SMA mRNA表达,TGF-β1可诱导HKC表达α-SMA mRNA;同时加入HGF后α-SMA mRNA基本无表达,而延迟加入HGF后α-SMA mRNA表达明显下降。结论TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞转分化,而HGF能抑制TGF-β1诱导的转分化,延迟加入HGF能使部分发生转分化的肾小管细胞恢复上皮表型。     

HIF-1α对人脑胶质瘤SHG44细胞恶性度的影响及其机制

 目的 探究过表达低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α)对人脑胶质瘤SHG44细胞恶性度的影响及其可能机制。方法 体外培养SHG44细胞,转染过表达HIF-1α入SHG44细胞,评估HIF-1α转染效率;对比分析HIF-1α过表达对SHG44细胞的增殖、干性、迁移和侵袭的影响;ELISA法检测肿瘤相关炎性反应因子(TNF-α,IL-10,IL-17和IL-1β),Western blot检测SHG44细胞焦亡相关蛋白[炎性小体3(inflammasome3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、GSDMD、GSDME和转化生长因子-β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)]的表达,明确HIF-1α对焦亡的关系。结果 HIF-1α过表达后SHG44细胞明显肿胀增多,细胞的增殖、干性、迁移和侵袭能力较对照组明显增强,与对照组相比肿瘤炎性因子(TNFα,IL-10和IL-1β)表达水平均明显升高,而肿瘤炎性反应抑制因子IL-17表达水平明显下降;HIF-1α过表达后焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDME和TGF-β₁)表达明显上调(P<0.05)。结论 HIF-1α过表达可能通过促进焦亡提高SHG44细胞的增殖、干性、迁移和侵袭能力。     

电离辐射诱导HIF-1α-Survivin通路在人淋巴瘤细胞中的活化

目的 研究电离辐射对人非霍奇金淋巴瘤细胞中HIF-1α-Survivin通路活化状态的影响,探讨恶性淋巴瘤放射抗性的机制.方法 采用Western blot方法检测辐射后3种淋巴瘤细胞中HIF-1α和Survivin蛋白的表达水平,观察应用HIF-1α抑制剂Echinomycin及转染反义HIF-1a siRNA对Survivin蛋白及mRNA表达的影响.结果 在人非霍奇金淋巴瘤细胞中存在HIF-1α和Survivin蛋白的表达,X射线照射后10～20 h出现HIF～1α蛋白表达增加,照射后24 h Survivin蛋白表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(t =7.53 ～31.31,P＜0.01).与单纯照射组比较,采用HIF-1α抑制剂预处理肿瘤细胞后,Survivin蛋白表达下降,且具有药物浓度依赖性(t=7.21 ～32.81,P＜0.01).而转染反义HIF-1α siRNA后,照射未诱导产生survivin mRNA和蛋白表达增加.结论 电离辐射能够活化人非霍奇金淋巴瘤细胞中的HIF-1α-Survivin通路,可能与肿瘤的放射抗性有关.     

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子-1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterysmoothmusclecells,PASMCs）内低氧诱导因子-1αhypoxiainduciblefactor一1alpha,HIF-1α和活性氧（Feacriveoxygenspecies,ROS）的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒（yifeihuoxuegranule,YFHXG）含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧＋YFHXG组（16．5、3．3、0．66g／kg）。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧＋YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。     

缺氧对PC12细胞中活性氧含量和缺氧诱导因子 血管内皮生长因子表达的影响

目的研究缺氧对PC12细胞中ROS含量和HIF-1α、VEGF表达的影响,初步探讨缺氧损伤的分子机制。方法使用三气培养箱建立PC12细胞缺氧损伤模型;观察缺氧环境下细胞形态的改变;MTT法检测细胞存活率;DCHF-A染色检测ROS的含量;RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达;Western Blot检测HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果与正常组相比较,缺氧24 h后ROS明显升高;HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达较正常组明显升高。结论缺氧24 h后可以导致PC12细胞中ROS含量、HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达升高。     

针刺干预对脑缺血大鼠脑组织低氧诱导因子-1α蛋白和mRNA表达的影响

 目的 观察针刺干预对脑缺血大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响,探讨针刺对缺血性脑血管疾病的防治机制。方法 建立局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组(各8只大鼠),应用蛋白印迹及实时荧光定量检测针刺对局灶性脑缺血大鼠脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达的变化。结果 正常组和假手术组大鼠比较HIF-1α蛋白及mRNA表达无明显变化,模型组大鼠HIF-1α蛋白及mRNA表达上调,差异无统计学意义;针刺组大鼠HIF-1α蛋白及mRNA表达高于模型组(0.567±0.058 vs 0.315±0.118; 1.593±0.102 vs 1.193±0.259),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 脑缺血后大鼠脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达增强,针刺可以上调其表达从而发挥脑保护作用。     

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子 1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth musclecells,PASMCs)内低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒(yifeihuoxue granule,YFHXG)含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧+YFHXG组(16.5、3.3、0.66 g/kg)。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧+YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。     

阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及HIF-1 a、TGF-β1表达的影响

目的 探讨阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 将32只雄性Sprauge-Dawley大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、阿奇霉素哮喘组(C组)、地塞米松哮喘组(D组),每组8只,采用卵清蛋白和氢氧化铝混合液腹腔致敏大鼠,2mg·ml-1卵清蛋白滴鼻激发大鼠,各组于末次激发后24小时内麻醉,留取右肺组织行苏木素-伊红染色观察大鼠肺组织病理变化;医学图像分析系统测量气道重塑参数;免疫组织化学检测肺组织HIF-1 a及TGF-β1的表达情况,ELISA检测血清HIF-1a及TGF-β1的表达.结果 与A组相比,B组可见黏膜上皮局部脱落,黏液栓形成,气道壁及肺组织内可见大量炎性细胞浸润,C、D组上述改变明显减轻;B组支气管壁厚度、平滑肌厚度较A组升高(P<0.05),C、D组支气管壁厚度低于B组(P<0.05);C、D组肺组织及血清HIF-1a的表达较A组升高(P<0.05),TGF-β1的表达较B组降低(P<0.05).结论 HIF-1a及TGF-β1可能参与了哮喘气道重塑,阿奇霉素不能有效抑制HIF-1 a的表达来改善哮喘大鼠气道重塑,但它可能通过抑制TGF-β1的表达来改善哮喘大鼠气道重塑.     

PI3-K的激活在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞间质转分化过程中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P1I3-K）的激活在转化生长因子岛（TGF-β1）体外诱导人肾小管上皮细胞（HKCs）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法将HKCs细胞株分为正常对照组（C）、不同浓度TGF-β1组、TGF-β1＋P13-K抑制剂Wortmannin组。选取不同时相,采用免疫印迹法（Western blot）测定总Akt（t-Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏素（E-cadherin）蛋白水平的表达变化;Akt磷酸化水平用磷酸化Akt与总Akt水平的比值表示。结果 正常体外培养的HKCs经10ng/ml TGF-β1刺激1h后p-Akt水平显著升高;mSMA蛋白表达水平在10ng／ml TGF-β1诱导48h后表达显著升高,而E-cadherin蛋白表达水平在TGF-β1诱导48h后表达显著下降。同时加用Wortmannin 10nmol／L组,p-Akt、α-SMA表达明显抑制,E-cadherin表达显著升高。结论PI3-K在TGF-β1诱导的EMT过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的EMT过程,特异性阻断PI3-K的激活可有效抑制TGF-β1介导的HK氏的EMT过程。     

转化生长因子β1对人肾小管上皮细胞表达桩蛋白的影响

目的探讨重组人类转化生长因子β1（rhTGF-β1）对人近端肾小管上皮细胞（HKC）桩蛋白（Pax）表达时相的影响。方法将体外培养的HKC随机分为4组。对照组（C组）：无血清培养基（FSM）培养;rhTGF-β1培养组（T1、T2、T3组）：分别用含10ng／ml TGF-β1的FSM培养,取不同时相点（T1组24h,T2组48h,T3组72h）终止培养。MTT法检测rhTGF-β1诱导HKC增殖的时效关系,RT-PCR检测HKC的Pax mRNA表达,免疫组化和Western blot检测Pax蛋白的表达。结果C组可检测到PaxmRNA和蛋白表达;Pax mRNA和蛋白表达T组明显高于C组,且T2、T3组明显高于T1组（P〈0．01）。结论TGF-β1诱导HKC合成Pax具有时间依赖性。