HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中盐酸维拉帕米的血药浓度及其药动学研究

目的 建立HPLC-MS/MS法以测定大鼠血浆中盐酸维拉帕米的血药浓度,并考察其药动学特征。方法 采用ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,3.5 μm）,流动相为A相0.1%甲酸水,B相乙腈,梯度洗脱;体积流量为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为5 μL。离子源为电喷雾离子源（ESI）,以多反应离子监测（MRM）进行正离子检测。盐酸维拉帕米监测离子对为m/z 455.3→m/z 165.0,内标地西泮监测离子对为m/z 285.0→m/z 154.1。6只SD大鼠在ig盐酸维拉帕米33.33 mg/kg后,对其进行药动学的研究。结果 盐酸维拉帕米在5~2 000 ng/mL显示线性关系良好;日内日间精密度（RSD）为1.3%~2.0%,准确度（RE）范围为0.1%~18.0%;提取回收率是90.87%~92.42%,基质效应为82.82%~101.99%。盐酸维拉帕米在大鼠体内主要药动学参数C_max、t_max、t_1/2、Ke、AUC_（0-tn）和AUC_（0-∞）分别为（922.1±300.4）ng/mL、（0.54±0.25）h、（6.46±3.18）h、（0.13±0.05）1/h、（7 634.1±4 436.6）h· ng/mL和（10 548.1±8 024.8）h· ng/mL。结论 该方法灵敏度高、专属性强,适用于测定大鼠血浆中盐酸维拉帕米的血药浓度及其药动学研究。     

HPLC-MS/MS测定新生儿血浆中氟氯西林的浓度及其与氨溴索相互作用的研究

目的 建立一种高效、简便的HPLC-MS/MS方法检测新生儿血浆中氟氯西林的浓度，研究新生儿体内氨溴索与氟氯西林是否存在相互作用。方法 生物样本采用API4000 HPLC-MS/MS进行分析，色谱柱为Ultimate XB-C₁₈(2.1 mm×100 mm，5 μm)，流动相A相为水-0.1%甲酸，B相为乙腈-0.1%甲酸。氟氯西林和内标利福平定量分析离子对分别为m/z 452.6→284.2和m/z 821.4→397.3。结果 在该分析方法下氟氯西林的线性范围为0.20~80 ng·mL^-1，定量下限为0.20 ng·mL^-1；氟氯西林的日内精密度和日间精密度均<8.23%；提取回收率为85.3%~89.2%，基质效应为89.3%~92.3%；新生儿血浆样品在室温条件下放置12 h，处理后室温条件下放置4 h，反复冻融3次及-20 ℃冷冻30 d的稳定性均良好。临床样本检测结果表明氨溴索合用可以显著提高氟氯西林血药浓度。结论 本研究所建立的HPLC-MS/MS分析方法准确度高，灵敏度好，可用于新生儿血浆中氟氯西林浓度的测定。临床研究结果表明氨溴索能显著提升氟氯西林的血药浓度，两者存在药物相互作用。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中普萘洛尔的含量及其药动学研究

目的 建立大鼠血浆中普萘洛尔的高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）定量分析方法,考察大鼠口服给药后,普萘洛尔在其体内的药动学特征。方法 血浆样品用甲醇沉淀蛋白法处理后,以盐酸美西律为内标,采用LC-MS/MS分析方法,测定大鼠血浆中普萘洛尔的浓度。色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C₁₈柱（2.1 mm×100 mm,3.5 μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈（70：30）等度洗脱;采用ESI离子源,正离子模式,多反应离子监测（MRM）m/z 260.2→116.2（普萘洛尔）和m/z 180.2→58.2（内标盐酸美西律）。结果 普萘洛尔在5~1 000 ng·mL^-1内线性关系良好;日内、日间精密度RSD为0.36%~6.39%,准确度为96.19%~113.38%;提取回收率为86.82%~96.12%;基质效应为100.1%~103.1%。结论 本方法经方法学验证,可用于大鼠血浆中普萘洛尔的测定及其药动学研究。     

UPLC-MS/MS测定大鼠血浆多柔比星浓度方法的建立及毒代动力学应用

目的 建立一种简便、快速、灵敏的测定大鼠多柔比星血药浓度的超高效液相-质谱联用（UPLC-MS/MS）法,并将其应用于注射用盐酸多柔比星大鼠体内毒代动力学实验。方法 采用ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为0.1%甲酸（含2 mmol/L甲酸铵）水溶液-乙腈,梯度洗脱。体积流量为0.4 mL/min,进样量为10 μL。采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）方式扫描,以正离子方式进行检测,蛋白沉淀法提取样品。用于定量分析的离子对分别为多柔比星m/z 544.43→m/z 397.08,内标地西泮m/z 285.02→154.40。SD大鼠30只,按体质量随机分为3组,分别单次iv 52.2、61.4、72.3 mg/m²盐酸多柔比星后测定血药浓度,并用DAS 3.1.4软件计算毒代参数。结果 血浆中内源性物质不干扰待测物和内标的测定,多柔比星在0.5～100 ng/mL范围内线性关系良好,定量下限为0.5 ng/mL。多柔比星在0.5、1、20、80 ng/mL 4个浓度的批内批间精密度RSD值为3.21%～12.79%。多柔比星在1、80 ng/mL的提取回收率和基质效应分别为102.00%～103.75%和79.27%～89.34%。SD大鼠分别单次iv给予注射用盐酸多柔比星52.2、61.4、72.3 mg/m²后,多柔比星在大鼠体内的AUC_0-t分别为（2 318.78±282.65）、（3 203.11±829.41）和（3 326.96±546.04） ng·h/mL,C_0.083h分别为（1 720.50±851.19）、（3 363.00±1 458.84）和（2 156.50±919.90）ng/mL。结论 建立的UPLC-MS/MS分析方法灵敏度高、样品处理方法简单、样品分析时间短,可以应用于大鼠多柔比星毒代动力学试验中。     

LC-MS/MS法分析人血浆中利培酮浓度及健康人体的药动学研究

目的 建立一种简便、灵敏的液相串联质谱（LC-MS/MS）法测定人血浆中利培酮的浓度,并应用于健康人体的药动学研究。方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,使用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈ （50 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱分离,以60%乙腈-40%甲醇、0.1%甲酸-5%乙腈-10 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相,梯度洗脱;在电喷雾离子化源（ESI）正离子检测条件下,采用多反应离子监测模式（MRM）对利培酮及内标利培酮-d4进行定量分析,检测离子对分别为m/z 411.3→191.2、m/z 415.3→195.2;进行专属性、系统适用性、准确度、精密度、基质效应、提取回收率、稳定性等方法学验证;8名健康成年受试者（无脱落）空腹单次口服利培酮片1 mg后,分别于给药前0 h和给药后10、20、30、45 min,1.00、1.25、1.50、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、8.00、12.00、16.00、24.00、36.00、48.00 h采集血样至含有肝素钠的抗凝管中,分离血浆样品,进行LC-MS/MS分析。结果 建立的LC-MS/MS法专属性良好,系统适用性良好,内标与待测物之间不存在交叉影响,人血浆中利培酮的线性范围为0.1～20.0 ng/mL,定量下限（LLOQ）为0.1 ng/mL,利培酮在空腹血浆、餐后血浆及溶血血浆中经内标归一化的基质效应分别为0.991～1.00、1.00～1.01和0.994～0.999,利培酮在人血浆中的平均提取回收率为96.8%～99.7%,准确度、精密度以及稳定性等均符合有关要求。健康受试者单次口服利培酮片1 mg后,主要药动学参数t_max、C_max、AUC_0~t、t_1/2分别为（0.969±0.248）h、（7.83±2.24）ng/mL、（25.5±12.0）h·ng/mL、（3.31±1.74）h。结论 建立的LC-MS/MS法前处理简便快速,灵敏度高,满足生物分析的法规要求,可应用于利培酮在健康人体中的药动学研究。     

UPLC-MS/MS法测定比格犬血浆中五味子醇甲的血药浓度

目的 建立UPLC-MS/MS测定比格犬血浆中的五味子醇甲血药浓度分析方法。方法 采用ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为0.1%乙酸水-甲醇梯度洗脱,体积流量为0.4 mL/min。柱温40℃,进样量5 μL。采用电喷雾（ESI）正离子模式进行多反应（MRM）监测,五味子醇甲和利伐沙班（内标）的定量离子对分别为m/z 433.20→384.30、437.19→145.13。结果 五味子醇甲在0.2～100 ng/mL线性关系良好（r=0.999 6）,最低定量限为0.2 ng/mL,批内、批间精密度分别为2.04%～7.62%、3.72%～8.29%;基质效应及提取回收率分别为95.7%～103%、81.2%～106%;稳定性结果均符合生物样品检测指导原则。结论 建立的UPLC-MS/MS方法快速、简单、灵敏度高,能满足五味子醇甲血药浓度测定及其药动学研究。     

UPLC-MS/MS法测定人血浆中丙硫氧嘧啶的含量

目的 建立UPLC-MS/MS法测定人血浆中丙硫氧嘧啶的含量,为临床治疗药物监测（TDM）和生物等效性试验（BE）提供方法学基础。方法 采用Agilent SB-C₁₈柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（80∶20,V/V）,等度洗脱。质谱采用AJS-ESI源,多反应监测（MRM）正离子模式,检测离子对为：丙硫氧嘧啶m/z 171.1→112.1、内标（丙硫氧嘧啶-D5）m/z 176.1→117.0。结果 血浆中丙硫氧嘧啶在10~5 000 ng/ml范围内线性关系良好,r=0.999 3;批内和批间的精密度和准确度良好（RSD<10%,RE<±10%）;不同浓度的基质效应均<110%,变异系数<5%;不同浓度的平均回收率为101.60%~113.56%,符合方法学要求。结论 该方法快速简便、灵敏准确,适用于血浆中丙硫氧嘧啶的含量测定。     

溴吡斯的明血药浓度的HPLC-MS/MS测定及其在人体的药动学研究

目的 建立HPLC-MS/MS测定人血浆中溴吡斯的明的药物浓度,并研究溴吡斯的明片在健康人体内的药动学。方法 采用HPLC-MS/MS检测法,用乙腈沉淀蛋白法处理血浆样本。采用Shimadzu Shim-Pack VP-ODS色谱柱(150 mm×2.0 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(含5 mmol·L^-1醋酸铵和0.1%甲酸),梯度洗脱;流速：0.2 mL·min^-1;采用三重四级杆质谱仪,电喷雾离子源,正离子模式,选择性离子检测,溴吡斯的明和内标新斯的明的检测离子分别为m/z 181.1→72.2,m/z 223.1→208.1。20名健康受试者口服溴吡斯的明片60 mg后,在不同时间点采集血浆样品,采用建立的HPLC-MS/MS条件测定溴吡斯的明血药浓度,计算药动学参数。结果 溴吡斯的明血药浓度在0.5~100 ng·min^-1内样品峰面积比与浓度线性关系良好(r=0.996 9),绝对回收率,日内、日间精密度,冷冻、冻融、室温稳定性均符合生物样品分析要求。20名健康受试者口服溴吡斯的明片60 mg 后的主要药动学参数如下：C_max为(43.26±10.33)ng·mL^-1;T_max为(1.77±0.48)h;t_1/2为(5.11±0.96)h;AUC_0-t为(204.8±64.93)ng·h·mL^-1;AUC_0-∞为(212.42±68.31)ng·h·mL^-1。结论 该方法简单、准确、灵敏,适用于溴吡斯的明血药浓度测定和药动学研究。     

UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4的含量及药动学研究

目的 建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4,并对柴胡皂苷B2、B4静脉给药后的药动学进行研究。方法 以柴胡皂苷F为内标,采用UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）柱,柱温为40℃。流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,洗脱时间为4 min,使用氮气作为去溶剂化气体（800 L·h^-1）和锥形气体（50 L·h^-1）。MRM模式对柴胡皂苷B2 m/z 825.4→617.5、柴胡皂苷B4 m/z 957.6→649.6和柴胡皂苷F（内标）m/z 973.7→119.0进行定量分析。大鼠血浆用乙腈沉淀法去除蛋白。结果 在5~5 000 ng·mL^-1内,大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4线性良好（r>0.995）,定量下限为5 ng·mL^-1。柴胡皂苷B2日内精密度RSD<12%,日间精密度RSD<15%。柴胡皂苷B4日内精密度RSD<14%,日间精密度RSD<15%。柴胡皂苷B2、B4的准确度范围为89.3%~110.2%。结论 该分析方法灵敏、快速、选择性良好,并成功应用于柴胡皂苷B2、B4静脉给药后的大鼠药动学研究。     

HPLC-MS/MS测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷的含量

目的 采用HPLC-MS/MS测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷含量。方法 以马钱苷为内标,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈(4.6 mm×100 mm,2.7 μm),以乙腈(A相)-0.1%甲酸水溶液(B相)为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^–1,柱温为30 ℃。选用电喷雾离子源,在正离子模式下进行检测,定量分析选用多反应监测模式。龙脑苷、龙脑次苷和内标的离子对分别为m/z 449.5→137.1,317.1→137.1,391.2→179.1。结果 龙脑苷和龙脑次苷检测质量浓度的线性范围分别为0.20~10.32 μg·mL^–1(r=0.995 3,n=5),0.02~1.51 μg·mL^–1(r=0.998 0,n=6),定量限分别为8.1,3.5 ng·mL^–1。日内、日间精密度,重复性试验结果良好(RSD<10%),龙脑苷和龙脑次苷24 h内稳定(RSD<10%),平均回收率(n=3)分别为99.9%(RSD=1.93%)和99.6%(RSD=3.09%)。结论 该方法准确、简便、重复性好,可用于测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷的含量。