β-榄香烯对人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤放疗增敏作用的研究★

目的 建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型，用增敏剂量的β-榄香烯联合放疗对移植瘤进行干预，探讨放疗增敏机制是否与抑制葡萄糖转运蛋白1（GLUT-1）表达有关。方法 采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型，将肿瘤体积达到75 mm³左右的20只裸鼠随机分为空白对照组（NS组）、β-榄香烯单药组（ELE组）、β-榄香烯联合放疗组（ELE+RAD组）和单纯放疗组（RAD组）。监测干预后各组裸鼠肿瘤体积的变化，获得各组裸鼠的肿瘤生长曲线。通过计算增敏系数，检测45 mg·kg^-1 β-榄香烯是否发挥增敏作用，采用Real-Time PCR、Western blotting及免疫组化染色检测各组移植瘤中GLUT-1的表达水平。结果 成功建立A549细胞株裸鼠移植瘤模型，依据各组移植瘤体积变化绘制生长曲线。测得增敏系数（EF）为2.44，提示β-榄香烯的剂量已达到增敏效果。与NS组相比，实验组移植瘤GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）；ELE组与RAD组GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）；与ELE组、RAD组相比，ELE+RAD组GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。免疫组化结果显示，与NS组比较，实验组GLUT-1的表达均被显著抑制（P<0.05）；其中ELE组和RAD组GLUT-1的表达抑制作用相对较弱，RAD组的抑制作用略强于ELE组，但两组差异无统计学意义（P>0.05）；而ELE+RAD组GLUT-1的表达抑制作用较强（P<0.05）。结论 增敏剂量的β-榄香烯与放疗联合应用可显著抑制裸鼠移植瘤中GLUT-1 mRNA及蛋白表达，明显增强放疗对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制效果，提示β-榄香烯可能通过抑制GLUT-1表达发挥放疗增敏作用。     

鼻咽清颗粒抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖及对放疗敏感性的影响

摘 要 目的：体外考察鼻咽清颗粒对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制和放射增敏作用。方法: 以体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞为研究对象,MTT法考察鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的增殖抑制作用,克隆形成实验检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的放射增敏效应,流式细胞仪检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果: 鼻咽淸颗粒浓缩液能抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈时间 剂量依赖性;24,48和72 h的IC₅₀分别70.79,60.13,51.63 mg·mL^-1（按主药材质量计）;集落形成实验表明鼻咽清颗粒的浓缩液联合放射能明显降低CNE-2细胞集落形成,随着主药浓度的增加,CNE-2细胞集落形成减少,阴性对照组、单纯放射组、10 mg·mL^-1和20 mg·mL^-1 （按主药材的重量计）鼻咽清浓缩液的集落形成数差异具有统计学意义（P<0.05）;随着培养基中鼻咽清主药含量的增加,G2/M期所占的百分比提高,凋亡细胞所占的比例也相应增加,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:鼻咽清颗粒可抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖,将CNE-2细胞阻滞于G2/M期,诱导鼻咽癌细胞凋亡,具有放疗增敏作用。     

臭牡丹提取物对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及对相关蛋白表达的影响

目的 研究臭牡丹提取物对H22实体移植瘤的抑制作用及与B淋巴细胞瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的相关性。方法 皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型。60只荷瘤鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组和臭牡丹高、中、低剂量（2.18、1.09、0.55 g/kg）组,每组12只,各组分别给予生理盐水、5-Fu（25 mg/kg,1次/d）及不同浓度的臭牡丹提取物干预。连续给药14 d后处死,检测小鼠体质量变化、抑瘤率及脾脏和胸腺指数;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,臭牡丹高、中剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低（P<0.01）,胸腺和脾脏指数显著增加（P<0.05）;同时Bax蛋白的表达水平显著上调,Bcl-2蛋白的表达显著降低（P<0.01）。结论 臭牡丹提取物能够抑制H22实体移植瘤生长,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比值和免疫调节有关。     

原儿茶醛对环磷酰胺诱导急性肾损伤的保护作用及机制研究

目的 研究原儿茶醛对环磷酰胺（CTX）所致急性肾损伤的预防作用及其机制。方法 将 24 只 SPF 级雄性昆明种小鼠随机分为对照组、模型组及原儿茶醛低、高剂量（15、30 mg·kg^-1）组,每组各 6 只。对照组和模型组 ig 给予 0.9% 氯化钠溶液,原儿茶醛低、高剂量组每日 1 次 ig 对应药物。连续给药 14 d,末次给药 1 h 后,除对照组外,其余各组单次 ip 给药CTX （200 mg·kg^-1）。次日,在称体质量麻醉后取血和肾脏,分离血清,检测小鼠血清肌酐 （CRE）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）等生化指标;采用苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏病理损伤情况;采用荧光染色检测小鼠肾脏 TUNEL 的表达情况;采用 Western blotting 检测 B 淋巴细胞瘤 2（Bcl-2）和 Bcl-2 相关 X 蛋白（BAX）等凋亡相关蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,模型组小鼠的肾脏指数显著降低（P＜0.01）;血清 CRE 水平显著升高（P＜0.001）;血清 SOD、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,丙二醛（MDA）水平显著升高（P＜0.01）;模型组小鼠肾脏细胞排列错乱、可见明显的炎症细胞浸润,伴随肾小管空泡变性和肾小管扩张;模型组小鼠肾脏 TUNEL 阳性表达显著增多（P＜0.001）;且肾脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）和 Bcl-2 的表达显著下降（P＜0.01、0.001）,而 cleaved-Caspase3、BAX 蛋白的表达显著上升（P＜0.01、0.001）。与模型组比较,原儿茶醛低、高剂量组小鼠肾脏指数均显著增加（P＜0.05）;原儿茶醛高剂量组小鼠血清中的 CRE 水平明显降低（P＜0.001）;原儿茶醛低、高剂量组小鼠血清中 SOD、CAT、GSH-Px 水平显著上升（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA 水平显著下降（P＜0.05）;原儿茶醛低、高剂量组肾脏组织细胞排列比较规整,炎症细胞浸润及肾小管空泡变性和肾小管扩张等病理改变少见;原儿茶醛低、高剂量组肾脏 TUNEL 阳性表达有所下降 （P＜0.01、0.001）,Caspase-3 和 Bcl-2 蛋白表达显著上升 （P＜0.05、0.01、0.001）,cleaved-Caspase-3 和 BAX 蛋白表达显著下降（P＜0.01、0.001）,呈剂量相关性。结论 原儿茶醛可预防 CTX所致急性肾损伤,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

三子颗粒下调miR-205-5p抑制小鼠脾虚型肠道腺瘤生长研究

目的 探讨三子颗粒通过降低微小核糖核酸-205-5p（miR-205-5p）水平抑制小鼠脾虚型肠道腺瘤生长的作用。方法 取70只4周龄的雄性C57BL/6J小鼠,采用对氧化偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结直肠腺瘤模型,将建模小鼠随机分为模型组、阿司匹林（200 mg·kg^-1）组、miR inhibitor-NC （2 mg·kg^-1）组、miR-205-5p inhibitor （2 mg·kg^-1）组和三子颗粒低、中、高剂量（1.7、3.4、6.8 g·kg^-1）组,造模期间ig给药,每天1次。比较各组小鼠肠道腺瘤的数量并测量腺瘤体积;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肠道腺瘤的病理情况;CCK-8法检测各组小鼠肠道腺瘤细胞增殖活力;原位末端标记（TUNEL）法检测小鼠肠道腺瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测肠道腺瘤miR-205-5p表达量及磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Ki67 mRNA表达量;Western blotting法检测PTEN、Bcl-2、Bax、Ki67蛋白表达水平;荧光素酶活性实验验证miR-205-5p和PTEN的靶向关系。结果 与模型组比较,阿司匹林组和三子颗粒低、中、高剂量组小鼠肠道腺瘤数量、体积及细胞增殖活性均显著降低,凋亡率显著升高（P＜0.05）,miR-205-5p表达量、Bcl-2、Ki67 mRNA及蛋白表达量显著降低,PTEN、Bax mRNA及蛋白表达量显著升高（P＜0.05）,其中三子颗粒作用呈剂量相关性;与miR inhibitor-NC组比较,miR-205-5p inhibitor组小鼠肠道腺瘤数量、体积及细胞增殖活性均显著降低,凋亡率显著升高（P＜0.05）,miR-205-5p表达量、Bcl-2、Ki67 mRNA及蛋白表达量显著降低,PTEN、Bax mRNA及蛋白表达量显著升高（P＜0.05）;荧光素酶活性实验证实miR-205-5p可靶向调控PTEN。结论 三子颗粒可抑制小鼠脾虚型肠道腺瘤生长,可能是通过下调miR-205-5p,上调PTEN、Bax表达,下调Bcl-2、Ki67表达发挥作用的。     

吉马酮通过HBXIP/p53信号通路诱导A549、CNE-1、HepG2细胞凋亡

目的 研究吉马酮诱导肺癌 A549、 鼻咽癌 CNE-1、 肝癌 HepG2 细胞凋亡的机制 。 方法 50、 150、 200、250、300 μmol·L^-1的吉马酮处理肝癌 HepG2、肺癌 A549、鼻咽癌 CNE-1、结肠癌 Caco-2 细胞 24、48、72 h 后,MTT 实验检测细胞的存活率的变化。100、150、200 μmol·L^-1的吉马酮分别处理 A549、HepG2、CNE-1细胞 48 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Western blotting 实验检测细胞凋亡标志蛋白 cleaved-Caspase-3、Caspase-3 的变化,检测乙型肝炎 X相互作用蛋白（HBXIP）、p53蛋白的表达量变化。分别在 A549、HepG2、CNE-1细胞中应用 siRNA 敲低 HBXIP,Westernblotting实验检测 HBXIP的敲低效果及 p53蛋白表达变化;MTT实验检测敲低 HBXIP对吉马酮诱导的细胞增殖抑制作用的影响。结果 吉马酮对鼻咽癌CNE-1、肝癌HepG2细胞增殖抑制作用较强,与溶剂对照组比较,200、250、300 μmol·L^-1组细胞存活率显著下降（P＜0.05）;在高浓度时对肺癌A549细胞增殖抑制效果较强,与溶剂对照组比较,250、300 μmol·L^-1组细胞存活率显著下降（P＜0.05）;对结肠癌Caco-2细胞作用相对较弱。与对照组比较,100、150、200 μmol·L^-1吉马酮处理A549、HepG2、CNE-1细胞 48 h后,凋亡率显著升高（P＜0.05）,cleaved-Caspase-3、p53蛋白表达显著上升（P＜0.05）;以 150、200 μmol·L^-1吉马酮处理A549、HepG2、CNE-1细胞48 h后,HBXIP的蛋白表达显著降低（P＜0.05）。siRNA-HBXIP处理48 h后,与对照组比较,HBXIP的蛋白表达量显著下降（P＜0.05）,p53蛋白表达量显著上升（P＜0.05）。与单独使用的相同浓度的吉马酮相比,沉默HBXIP后A549、HepG2、CNE-1细胞对吉马酮的敏感度明显提高,150、200、250 μmol·L^-1组均差异显著（P＜0.05）。结论 吉马酮可以抑制A549、HepG2、CNE-1细胞增殖、诱导细胞凋亡,作用机制可能与调控HBXIP/p53信号通路相关。     

蓝萼乙素通过Akt/BAD通路对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究蓝萼乙素通过蛋白激酶B（Akt）/B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关死亡启动因子（BAD）通路对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响和机制。方法 将48只SPF级雌性Balb/c-nu裸鼠随机分为模型、蓝萼乙素（56、112 mg/kg）和蓝萼乙素＋SC79（112 mg/kg＋10 mg/kg）组,每组12只。将HeLa细胞种植在裸鼠右大腿根部背侧皮下,建立皮下移植瘤模型,观察肿瘤体积、质量和一般情况的变化。苏木精–伊红（HE）染色观察肿瘤组织的组织学变化。TUNEL实验检测肿瘤组织细胞凋亡情况。Western blotting法检测移植瘤组织中p-Akt、Akt、p-BAD、BAD、磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）蛋白表达水平。结果 与模型组相比,蓝萼乙素组第22、25、28天裸鼠肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤组织Akt、BAD磷酸化水平显著降低（P＜0.05）,肿瘤细胞凋亡率、肿瘤组织PTEN蛋白水平显著升高（P＜0.05）;SC79可减弱蓝萼乙素对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结论 蓝萼乙素对宫颈癌裸鼠移植瘤生长起到抑制作用,其作用机制与抑制Akt/BAD信号通路有关。     

右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探究右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法 将Ishikawa、RL95-2细胞分为对照组,右美托咪定1、10、100 nmol/L组,右美托咪定（100 nmol/L）＋LiCl组。CCK-8法和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平。构建子宫内膜癌裸鼠模型,分为对照组、右美托咪定组、右美托咪定＋LiCl组,测量肿瘤质量与体积,苏木精–伊红（HE）染色观察移植瘤组织形态,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组相比,不同浓度右美托咪定处理后Ishikawa、RL95-2细胞吸光度（A）值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达上升（P＜0.05）;与右美托咪定100 nmol/L组相比,右美托咪定＋LiCl组A值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax表达下降（P＜0.05）。右美托咪定能抑制移植瘤质量和体积,促进肿瘤凋亡,降低β-catenin、Ki-67蛋白表达（P＜0.05）;LiCl能逆转右美托咪定对移植瘤的抑制作用（P＜0.05）。结论 右美托咪定能抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

五子衍宗丸调控睾丸线粒体融合蛋白2减轻内质网应激改善肥胖大鼠生精功能

目的 观察五子衍宗丸对高脂饮食诱导肥胖大鼠生精功能的影响,并从睾丸内质网应激角度探讨可能机制。方法 30 只雄性 SD 大鼠随机分为对照组、模型组和五子衍宗丸低、中、高剂量（0.5、1.0、2.0 g·kg^-1）组。对照组给予普通饮食,其余组给予高脂饲料喂养,16 周后各组 ig 给予相应剂量药物,连续 4 周;取附睾进行精子功能分析;血清 ELISA 分析性激素水平变化;苏木素-伊红染色观察睾丸组织病理改变;透射电镜观察睾丸支持细胞线粒体和内质网结构改变;免疫荧光染色检测睾丸线粒体融合蛋白 2（Mfn2）及内质网应激标识蛋白葡萄糖调节蛋白 78（GRP78）的定位及表达;Western blotting 检测睾丸组织 Mfn2 和蛋白激酶 R 样内质网激酶（PERK）通路 相 关 蛋 白 相 对 表 达 。结果 与对照组比较, 模型组大鼠体质量明显增加（P＜0.01）,血清雌二醇水平明显升高（P＜0.01）,睾酮水平明显降低（P＜0.01）;睾丸生精细胞排列稀疏,细胞变性;精子活力明显降低（P＜0.05）,精子畸形率明显升高（P＜0.01）;睾丸支持细胞内质网和线粒体肿胀,呈空泡状,部分网膜断裂,Mfn2 表达明显降低,GRP78 荧光表达明显增加;PERK、 活 化 转 录 因 子 -4 （ATF4） 和 CHOP 蛋白量明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,五子衍宗丸高剂量组体质量减轻明显（P＜0.05）;中、高剂量组血清雌二醇水平明显降低（P＜0.05、0.01）,睾酮水平明显升高（P＜0.05、0.01）;高剂量组精子活力明显升高（P＜0.05）,精子畸形率明显降低（P＜0.05）;睾丸病变减轻,排列较致密,支持细胞内质网和线粒体肿胀改善;Mfn2 荧光表达逐渐增强,蛋白相对表达明显增加 （P＜0.05、0.01）,GRP78 荧光表达逐渐减弱;低剂量组 ATF4 蛋白量明显降低 （P＜0.01）,中剂量组PERK、ATF4 蛋白量明显降低（P＜0.05、0.01）,高剂量组 PERK、ATF4 和 CHOP 蛋白量均明显降低（P＜0.01）。结论 五子衍宗丸可改善高脂饮食诱导肥胖引起的大鼠生精障碍,其机制可能与调控睾丸支持细胞Mfn2表达,减轻内质网应激有关。     

西洋参醇提物对慢性萎缩性胃炎大鼠的逆转效应研究

目的 探讨西洋参醇提物对亚硝基胍（N-methyl-N''-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG）诱发慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）模型大鼠的萎缩逆转作用及对PCNA蛋白、Bcl-2蛋白、PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、TFF3 mRNA、TNF-α mRNA的影响。方法 Wistar大鼠自由饮用浓度为167 μg·mL^-1的MNNG饮用液,实验造模12周。确定成模后,将大鼠分为模型组、正常组、西洋参醇提物组。并分别给予药物干预后,观察大鼠体质量,胃组织病理组织学,血清胃泌素（gastrin,GAS）,胃组织PCNA蛋白、Bcl-2蛋白、PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、TFF3 mRNA、TNF-α mRNA表达情况。结果 治疗第8周西洋参醇提物组体质量恢复显著高于模型组（P<0.05）。西洋参醇提物组腺体萎缩、不典型增生、肠化显著减轻（P<0.01）。西洋参醇提物组炎症等级、GAS较模型组无显著性差异。西洋参醇提物组PCNA蛋白、Bcl-2蛋白较模型组显著降低（P<0.01）。西洋参醇提物组PCNA mRNA、TFF3 mRNA、TNF-α mRNA较模型组均有下降,但差异无统计学意义;Bcl-2 mRNA较模型组有显著升高（P<0.01）。结论 西洋参醇提物对CAG模型大鼠具有良好的治疗作用,减轻体质量丢失,减轻胃黏膜萎缩和肠化生,其作用机制之一可能是通过下调胃黏膜PCNA蛋白、Bcl-2蛋白的高表达,起到改善乃至逆转CAG病理状态的作用。     

复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究

目的探讨复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,取对数生长期细胞,将其消化后随机分为对照组,复方木鸡颗粒高、低(10、5mg/m L)剂量组,顺铂组(1mg/m L)和复方木鸡颗粒(5mg/m L)联合顺铂(1mg/m L)组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用Hoehcst染色法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光联合激光共聚焦分别检测各组细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、蛋白天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、细胞色素C氧化酶(Cyt-C)表达水平。结果与对照组比较,复方木鸡颗粒10、5 mg/mL组及顺铂组、联合组的细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡显著增加,细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P0.05、0.01),而Bax、Caspase-9、Cyt-C蛋白显著上调(P0.05、0.01),且联合组在抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、促进其凋亡、调控凋亡相关蛋白表达的作用效果最佳。结论复方木鸡颗粒可显著抑制Hep G2细胞增殖并促进其凋亡,其与顺铂联合起到协同增效的效果,其作用机制可能与下调人肝癌Hep G2细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2,上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-9、Cyt-C表达水平有关。     

芦丁通过抗氧化抗凋亡对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的保护作用

目的探讨芦丁通过抗氧化抗凋亡对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的保护作用。方法颈内动脉穿刺法构建SAH模型。SD雄性大鼠分为假手术组、模型组和芦丁50 mg/kg组,24 h后对SAH评分、神经功能评分、脑含水量和伊文思蓝渗出率进行考察。并利用ELISA法检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;并采用免疫荧光检测调亡相关蛋白p53、Bax、caspase-3和Bcl-2的表达情况。结果与模型组比较,芦丁50mg/kg组SAH评分明显降低(P<0.05),神经功能评分明显提高(P<0.01)。与模型组比较,芦丁50mg/kg组大鼠左脑、右脑和小脑的脑水含量和伊文思蓝渗出率明显降低(P<0.05),提示芦丁能够减轻SAH大鼠血脑屏障的损伤。与模型组比较,芦丁50mg/kg组大鼠MDA水平显著降低(P<0.05),SOD、CAT和GSH-Px水平显著升高(P<0.05、0.01),提示芦丁具有改善SAH大鼠氧化应激的作用。芦丁50 mg/kg给药后p53、Bax和caspase-3表达量减少,Bcl-2表达增加。结论芦丁能够通过抗氧化抗凋亡减轻SAH大鼠的早期脑损伤。     

基于AMPK/ULK1介导的自噬探讨牡荆素对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制

目的 探究牡荆素对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的调控机制。方法 将BALB/c裸鼠通过左侧前肢腋窝下接种CNE-2细胞构建鼻咽癌裸鼠成瘤模型,待模型构建成功后随机分为模型组、牡荆素组（5、10 mg/kg）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激动剂组（AICAR,200 mg/kg）、牡荆素+AMPK抑制剂组（Compound C,20 mg/kg）,每组各10只。牡荆素组分别按照相应剂量ig;AICAR组ip 200 mg/kg AICAR;牡荆素+Compound C组采取ig 10 mg/kg牡荆素的同时ip 20 mg/kg Compound C,以上各组连续给药21 d。给药结束后测定裸鼠移植瘤体积和质量;苏木素–伊红（HE）染色观察移植瘤组织病理学改变;TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡情况;免疫组织化学检测肿瘤组织微管相关蛋白轻链3(LC3)-II、泛素结合蛋白（p62）蛋白表达;免疫荧光检测肿瘤组织LC3-II和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达;Western blotting检测肿瘤组织Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞...     

刺芒柄花素对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制研究

目的 研究刺芒柄花素（formoononetin,FOR）对脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia-reperfusion injury,I/R）大鼠的保护作用,并探讨其可能的机制。方法 SD大鼠50只,♂,分为假手术组、I/R组、FOR高、中、低剂量组（100,50,20 mg·kg^-1）。连续灌胃给药7 d后,除假手术组外均采用MCAO法造成大鼠脑缺血模型,2 h后拔出线栓,再灌注24 h后进行神经功能评分;跳台法检测大鼠学习记忆能力;HE染色法观测脑组织病理形态;ELISA法检测血清中NO表达及NOS活性水平;Western blot法检测脑组织中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 与I/R组相比,FOR高、中、低剂量组能显著降低大鼠神经功能评分（P<0.01）、提高大鼠学习记忆能力（P<0.05或P<0.01）、改善脑组织形态、降低血清中NO表达水平及NOS活性（P<0.01）、降低caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达水平并提高Bcl-2的表达水平（P<0.01）。结论 刺芒柄花素对I/R大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化应激和抗凋亡有关。     

九节龙皂苷对小鼠胰腺癌p53、Bcl-2和Bax表达的影响

目的通过观察九节龙皂苷在胰腺癌发病不同阶段中对凋亡调控基因的影响,初步探讨九节龙皂苷防治肿瘤作用可能存在的分子机制。方法利用二甲基苯并蒽诱发的实验性胰腺癌小鼠模型,采用免疫组化染色的方法,分别标记p53、Bcl-2和Bax阳性细胞,分阶段动态观察九节龙皂苷对各种蛋白表达的影响。结果实验开始,预防组、治疗组的p53阳性率与对照组差别就均有统计学意义(P均<0.01);随实验观察时间延长,p53表达达到高峰,Bax则呈逐渐升高趋势,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值分别在第2和第3阶段达到峰值后呈下降趋势。至实验结束时,预防组p53、Bcl-2以及Bcl-2/Bax比值均低于对照组(除p53外,P均<0.05),而治疗组与对照组仅Bax差别具有统计学意义(P<0.01)。结论九节龙皂苷可能通过抑制突变型p53和Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡,从而抑制胰腺癌瘤形成和发展。     

蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞Bax、Bcl-2的影响

目的观察蜂毒注射液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(类风湿关节炎-FLS)B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA和蛋白的影响,探讨蜂毒注射液治疗类风湿关节炎的作用机制。方法滑膜组织取自行关节置换或关节镜手术的4名活动期类风湿关节炎患者,分离出FLS并原代培养,逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)观察Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Bax、Bcl-2蛋白水平的变化。结果与对照组比较,蜂毒注射液4、8、16 mg/L组能促进Bax mRNA表达(P<0.05),蜂毒注射液8、16 mg/L组抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.05、0.01);蜂毒注射液4、8、16 mg/L组提高Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P<0.05、0.01),且有一定的剂量相关性。结论蜂毒注射液可能通过抑制Bcl-2蛋白、促进Bax蛋白的表达,达到促进类风湿关节炎-FLS凋亡的作用。     

夏黄颗粒治疗慢传输型便秘的实验研究

目的 采用吗啡致小鼠慢传输型便秘模型,评价夏黄颗粒的治疗作用,并对其通便作用进行实验研究。方法 采用连续sc 2.5 mg/kg盐酸吗啡45 d致小鼠慢传输型便秘模型,观察夏黄颗粒的通便作用;采用1次性ip 5 mg/kg盐酸吗啡致小鼠小肠推进、胃排空抑制模型,观察夏黄颗粒对胃肠抑制的拮抗作用;采用测定小鼠小肠湿、干质量法,观察夏黄颗粒对肠水分吸收的作用;采用顺铂致大鼠异嗜模型,观察夏黄颗粒的止吐作用;采用吗啡致豚鼠离体回肠、结肠痉挛模型,观察夏黄颗粒的作用及机制。结果 与模型组比较,小鼠给药5 d,夏黄颗粒14.95、7.48 g生药/kg能显著增加慢传输型便秘小鼠的24 h排便量（P<0.05、0.01）,继续给药至7 d,14.95、7.48 g生药/kg能显著增加小肠推进率、14.95 g生药/kg显著升高血清P物质含量（P<0.05、0.01）;给药1次,14.95、7.48 g生药/kg剂量组能显著增加小鼠小肠推进率、加快胃排空（P<0.01）,14.95 g生药/kg显著增加小鼠小肠含水量（P<0.01）;大鼠给药3 d,10.35 g生药/kg剂量组能显著降低大鼠异嗜高岭土质量（P<0.05）;给药1次,2.49、1.25 mg生药/mL（浴槽终浓度）能显著降低吗啡所致痉挛性回肠的肠张力（P<0.01）,2.49、1.25、0.62 mg生药/mL（浴槽终浓度）能显著降低吗啡所致痉挛性结肠的肠张力（P<0.05、0.01）。结论 夏黄颗粒对吗啡所致慢传输型便秘有显著的治疗作用,具有显著的通便、解痉、促进胃肠运动、肠吸收及止吐作用。