丹参-红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响

目的 研究丹参、红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。方法 分别选用咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的探针药物。将大鼠随机分为4组,即空白对照组、丹参（1.2 g生药/kg）组、红花（0.4 g生药/kg）组、丹参（1.2 g生药/kg）+红花（0.4 g生药/kg）组,按上述剂量ig给药7 d。于末次给药后30 min,尾iv探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑溶液,在不同的时间点取血进行检测;以甲硝唑为内标,采用HPLC法检测探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的量,评价各药物组对大鼠CYP3A4、CYP2E1和CYP1A2活性的影响。结果 与空白对照组比较,丹参组咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的清除率（CL）有所增强,曲线下面积（AUC）减少,其半衰期（t_1/2）有减少趋势,但差异均不显著;红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL有所降低,但差异不显著,咪达唑仑的CL显著降低（P<0.01）,氯唑沙宗的AUC增加,但差异不显著,咖啡因和咪达唑仑的AUC明显增加（P<0.05、0.01）;丹参+红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL明显降低（P<0.05）,曲线下面积（AUC）明显增加（P<0.05）,其t_1/2有延长趋势,但差异不显著。结论 丹参、红花配伍后对CYP450亚型CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,这可能是丹参、红花配伍协同增效的作用机制之一。     

鸡尾酒法评价石蒜对大鼠细胞色素P450酶活性的影响

目的 运用鸡尾酒法评价石蒜对细胞色素P450酶活性的影响。方法 将大鼠随机分为对照组和石蒜低、高剂量组。对照组给予生理盐水，石蒜低、高剂量组大鼠灌胃给药0.5，1.0 g·kg^-1石蒜，连续给药15 d。然后第16天给予探针药物，UPLC-MS/MS检测探针药浓度。结果 与对照组对比，石蒜低剂量组和高剂量组的安非他酮AUC_（0-t）、C_max都显著升高（P<0.05），CL_z/F显著降低（P<0.05）。与对照组对比，石蒜高剂量组的美托洛尔、咪达唑仑和非那西丁AUC_（0-t）显著降低（P<0.05）、CL_z/F显著升高（P<0.05），而低剂量组与对照组比较差异无统计学意义。与对照组对比，石蒜组的甲苯磺丁脲AUC_（0-t）、CL_z/F差异无统计学意义，C_max显著降低（P<0.05）。结论 石蒜能抑制大鼠CYP2B1酶活性，诱导大鼠CYP2D1、CYP3A2和CYP1A2酶活性，稍有诱导大鼠CYP2C11酶活性的作用。     

大黄素对大鼠肝脏CYP450酶的诱导研究

目的 探讨大黄素对大鼠肝脏细胞色素P450酶(CYP450)及其主要亚型的影响。方法 20只雄性SD大鼠, 随机分成4组, 每组5只, 分别为溶剂对照组, 170、500和1 500 mg/kg大黄素染毒组, 大黄素蒸馏水混悬后连续经口给药16 d, 结束后次日取大鼠肝脏组织制作微粒体, 分别采用CO还原差示光谱法、分光光度法及化学发光法检测大鼠肝脏微粒体总CYP450水平, 红霉素脱甲基酶(CYP3A)、氨基比啉-N-脱甲基酶, CYP1A、CYP2B和CYP2E1酶活性变化。结果 大黄素连续经口给药16 d, 能够引起大鼠肝脏微粒体总CYP450显著升高、可轻度诱导CYP3A、CYP1A、CYP2E1和CYP2B酶, 500 mg/kg剂量组最明显。结论 大黄素对大鼠肝脏中CYP3A、CYP1A、CYP2B和CYP2E1酶均有诱导作用。     

多糖类组分对大鼠肝微粒体酶CYP1A2的体外活性抑制作用

目的 建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量，研究人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体细胞色素P450（cytochrome P450，CYP）1A2的体外抑制作用。方法 以格列齐特为内标，建立LC-MS/MS测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量方法。以α-萘黄酮为阳性对照药，分别将系列多糖溶液、CYP1A2酶的特异性探针底物非那西丁及大鼠肝微粒体进行孵育，LC-MS/MS测定代谢产物对乙酰氨基酚的含量，计算半数抑制浓度（IC₅₀），评价人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体CYP1A2酶的抑制活性。结果 对乙酰氨基酚在10~1 000 ng·mL^-1内线性良好，精密度试验RSD均<8.24%，提取回收率为92.53%~103.23%，稳定性试验RSD均<10.77%。该试验条件下，在大鼠肝微粒体温孵体系中，人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2的IC₅₀值均>100 μmol·L^-1。结论 在正常剂量下，人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2酶亚型均无抑制作用，可以与其底物联合用药。     

基于药物代谢酶CYP3A4的乌头碱配伍人参皂苷、甘草苷的减毒机制研究

目的 考察乌头碱配伍人参皂苷Rb₁、甘草苷后对HepG2药物代谢酶（Cytochrome P450,CYP450）中3A4亚型的报告基因荧光活性、mRNA转录及蛋白翻译水平的影响。方法 将pGLuc-CYP3A4报告基因质粒与pcDNA3.1-hPXR表达质粒共转染HepG2细胞,检测乌头类生物碱、人参皂苷和甘草的单体成分对CYP3A4的激活效应;并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western blotting技术检测人参皂苷Rb₁、甘草苷与乌头碱对CYP3A4 mRNA及蛋白水平的影响。结果 报告基因模型检测结果显示,与对照组比较,乌头碱、新乌头碱、次乌头碱和乙酰乌头碱能下调CYP3A4报告基因荧光强度（P<0.05）,其中乌头碱下调能力最强,人参皂苷Rb₁、Rc、Re、Rg1以及甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸均能上调报告基因的荧光强度（P<0.05、0.01）,其中人参皂苷Rb₁和甘草苷上调能力最明显;同时乌头碱能下调CYP3A4 mRNA与蛋白表达水平（P<0.05、0.01）,人参皂苷Rb₁和甘草苷能逆转乌头碱下调CYP3A4的能力（P<0.05、0.01）。结论 人参皂苷Rb₁、甘草苷与乌头碱配伍后可上调CYP3A4的表达,减少乌头碱在体内蓄积时间,起到减毒的作用。     

CYP1A1体外诱导活性评价模型的建立及其在人参皂苷筛选中的应用

目的 建立hAhR介导的CYP1A1体外诱导活性评价模型,应用于体外快速筛选通过hAhR途径介导的对CYP1A1具有激活能力的药物。方法 利用双荧光素酶报告基因系统,将CYP1A1启动子序列插入报告基因质粒上游,构建pGL4.17-CYP1A1质粒,并与含有hAhR编码区序列的pcDNA3.1-hAhR表达质粒瞬时共转染HepG2细胞, pGL4.17-control、pcDNA3.1（+）分别为pGL4.17-CYP1A1、pcDNA3.1-hAhR的空载体,建立hAhR-CYP1A1报告基因模型;应用AhR的完全激动剂TCDD（2 nmol/L）验证该报告基因模型的可靠性,应用该模型考察人参皂苷Rf、Rc、Re、Rg₁、Rb、Rd、Rh₂和Rg₃（20 μmol/L）通过hAhR途径对CYP1A1的诱导作用。结果 经验证,报告基因模型构建成功;人参皂苷Rf、Re、Rg₁和Rc对AhR具有激活作用,其中与对照组比较,人参皂苷Rg₁、Rc对AhR激活效应显著（P<0.05、0.01）,人参皂苷Rb、Rd、Rh₂和Rg₃对AhR无激活作用。结论 本研究建立基于hAhR的CYP1A1体外诱导活性评价模型,可为具有潜在CYP1A1诱导作用的目标化合物的筛选提供有效、快速的体外筛选手段,人参皂苷Rg₁、Rc对AhR-CYP1A1激活效应显著。     

注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

蜂毒肽通过Th1/Th2途径对胶原诱导关节炎大鼠模型免疫调节的影响

目的 探讨蜂毒肽对胶原诱导关节炎大鼠模型免疫调节的影响。方法 成功建立胶原诱导关节炎大鼠模型，随机分为模型组、蜂毒肽（0.5 mg/kg）组、甲氨蝶呤（1 mg/只）组，每组6只，另选取未造模大鼠为对照组；造模第14天起，隔日1次ip蜂毒肽，每周1次ip甲氨蝶呤，对照组、模型组ip等量生理盐水，给药21 d。观察关节肿胀程度、进行关节炎指数（AI）评分；给药结束后，收集血清，ELISA法检测血清中免疫球蛋白G （IgG）、IgG1、IgG2a、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平；分离大鼠脾脏，提取淋巴细胞，流式细胞术检测Th1、Th2细胞比例。结果 蜂毒肽组大鼠关节皮肤发红，关节肿胀明显减轻；与模型组比较，蜂毒肽显著抑制AI评分（P<0.05）；显著降低血清中IgG、IgG2a、IFN-γ浓度（P<0.05），升高IgG1、IL-4浓度（P<0.05）；显著下调Th1细胞比例、Th1/Th2比值（P<0.05），上调Th2细胞比例（P<0.05）。结论 蜂毒肽能通过调节Th1/Th2平衡抑制胶原诱导关节炎大鼠的炎症。     

Cocktail探针药物法评价灯盏花素对大鼠CYP450体内代谢活性的影响

目的用Cocktail探针药物法研究灯盏花素对大鼠CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP2D6体内代谢活性的影响。方法将大鼠随机分为3组,空白对照组、低剂量组和高剂量组。低剂量组和高剂量组分别尾静脉给予灯盏花素粉针剂1.8,5.4 mg.kg-1.d-1,空白对照组给予生理盐水,共14 d。各组分别于第15 d注射Cocktail探针溶液,用HPLC检测各探针药物的血药浓度,用DAS2.0计算药代动力学参数,评价相应的CYP450亚型的体内代谢活性。结果高剂量组美托洛尔的AUC和t1/2显著高于空白对照组,CL显著低于空白对照组(P<0.05)。低剂量组美托洛尔虽然也有相同趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。各组咖啡因、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的主要药代动力学参数均无显著差异(P>0.05)。结论高剂量灯盏花素粉针剂可明显抑制大鼠CYP2D6的体内代谢活性,而对CYP1A2、CYP2E1和CYP2C9无显著性影响。     

复方银杏叶胶囊对肝损伤大鼠CYP2E1、CYP3A4的影响

目的研究复方银杏叶胶囊(CGB)对酒精性肝损伤大鼠CYP2E1、CYP3A4活性的影响。方法正常组和酒精性肝损伤模型组均以CGB[(250 mg/(kg.d)]灌胃,分别在灌胃CGB前及灌胃1周后,灌胃探针药氯唑沙宗(50 mg/kg)及氨苯砜(20 mg/kg),于探针药灌后24 h内不同时间点采血,测定各探针药血药浓度。结果灌胃CGB前,模型组氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24、Cmax均显著低于正常组(P<0.05或P<0.01)。灌胃CGB后,模型组氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24、Cmax均较灌胃前显著升高(P<0.05或P<0.01);且氯唑沙宗的t1/2灌胃CGB后明显高于灌胃前(P<0.05)。结论 CGB能够明显抑制酒精性肝损伤大鼠CYP2E1、CYP3A4酶活性。     

VKORC1-3673G>A、CYP2C9*3、CYP4F2 rs2108622和CYP2C19*2基因多态性对中国汉族房颤患者华法林维持剂量的影响

目的 探讨VKORC1-3673G>A、CYP2C9^*3、CYP4F2 rs2108622和CYP2C19^*2位点基因多态性对中国汉族房颤患者华法林维持剂量的影响。方法 收集107例服用华法林达维持剂量的汉族房颤患者的血样和临床相关资料,应用PCR-RFLP法检测VKORC1-3673G>A、CYP2C9^*3、CYP4F2 rs2108622和CYP2C19^*2基因型,采用独立样本t检验分析基因型与华法林维持剂量的相关性。多元线性回归建立给药模型,探讨基因多态性对华法林维持剂量的影响。结果 VKORC1-3673G>A、CYP2C9^*3、CYP4F2 rs2108622基因多态性和患者年龄、体质量能解释45.2%的华法林维持剂量差异。CYP2C19^*2基因多态性对本研究人群华法林维持剂量无影响。结论 VKORC1-3673G>A、CYP2C9^*3、CYP4F2 rs2108622基因多态性显著影响中国汉族房颤患者的华法林维持剂量。     

氟伏沙明和CYP1A2*1F基因多态性对血清奥氮平浓度的影响

目的研究氟伏沙明与细胞色素P450酶1A2(cytochromeP4501A2,CYP1A2)基因*1F位点多态性对精神分裂症患者血清奥氮平浓度的影响。方法入组精神分裂症患者单用奥氮平者(奥氮平组)92例以及奥氮平联用氟伏沙明者(联合组)103例,采集血液,测定CYP1A2*1F基因型以及血清奥氮平浓度,比较2组以及CYP1A2*1F各个基因型间的血清奥氮平浓度差异。结果奥氮平组血清奥氮平浓度(3.39±2.70)mg·L-1·mg-1显著低于联合组(5.14±3.06)mg·L-1·mg-1(t=4.23,P=0.000)。AA型血清奥氮平浓度比CC型低[奥氮平组:(2.46±1.64)mg·L-1·mg-1 vs(4.42±2.88)mg·L-1·mg-1,P<0.05;联合组:(4.06±2.65)mg·L-1·mg-1 vs(6.86±3.25)mg·L-1·mg-1,P<0.01],但是CA型与CC型的差异无统计学显著意义。结论氟伏沙明可升高血清奥氮平浓度;不同基因型个体,血清奥氮平浓度不同;应根据氟伏沙明使用情况和CYP1A2*1F基因型个体化给药。     

NONMEM法探索CYP1A2对儿童卡马西平群体药动学的影响

目的 用非线性混合效应模型法探索CYP1A2对儿童卡马西平群体药动学的影响。方法 回顾性收集180名癫痫患儿的临床资料及720个卡马西平血药浓度监测数据,采用非线性混合效应模型法估算群体药动学参数并建立模型,采用图形法和可视化预测检验的方法对最终模型进行验证。结果 建立了该药物的一级吸收一室模型,最终模型参数如下：CL=3.25×（WT/29.8）^0.22×e^{0.05（AA=1）}×e^ηCL（L·h^-1）,V_d=34.78×e^ηVd（L）,K_a=1.2·h^-1。当CYP1A2-163为AA时,AA=1;当CYP1A2-163为CA或CC时,AA=0。患儿体质量的增长可以导致药物清除率的非线性增加,CYP1A2-163C>A突变可加快卡马西平的清除。结论 患儿的体质量与CYP1A2基因突变（-163C>A）对CL有显著影响,在用药前建议考虑患者体质量与CYP1A2基因型。     

密蒙花与其替代品结香总提物体外抗氧化活性作用的比较研究

目的通过体外抗氧化活性检测,比较密蒙花与其替代品结香总提物体外抗氧化能力的差异。方法采用福林酚法测定密蒙花、结香总提物中总酚,并采用DPPH自由基清除能力法、ABTS清除能力法、Fe~(3+)还原能力法和Fe~(2+)螯合能力法分别测定两者体外抗氧化能力,选取维生素C和EDTA-Na_2作为阳性对照。结果密蒙花中总酚为结香的3~5倍;除亚铁离子螯合试验外,密蒙花的抗氧化作用均明显优于结香,这与总酚的量呈正相关性。结论两者总提取物中总酚和抗氧化能力差异显著,密蒙花明显优于结香。     

细胞色素P450酶4F2基因多态性对华法林剂量影响的研究

目的：探讨中国苏南地区心脏机械瓣膜置换术后汉族人群细胞色素P450酶4F2（CYP4F2）基因rs2108622多态性对华法林剂量的影响,为以后利用基因多态性指导临床合理用药提供进一步理论依据。方法：采用碱基淬灭探针技术,检测197名心脏机械瓣膜置换术后患者的CYP4F2 rs2108622的基因型,分析与华法林剂量的相关性及影响。结果：CYP4F2 rs2108622基因多态性检测有115例CC型纯合子,73例CT型杂合子,9例TT型突变纯合子;等位基因频率为C 76.9%,T 23.1%;CC型患者华法林的平均稳定剂量为（2.51&#177;0.82）mg&#183;d^-1,CT型为（2.74&#177;0.96）mg&#183;d^-1,TT型为（3.20&#177;1.22）mg&#183;d^-1,采用方差分析方法得到各组间华法林剂量差异P值小于0.05,有显著性差异。结论：在苏南地区心脏机械瓣膜置换术后汉族人群中,CYP4F2 rs2108622基因多态性与华法林剂量相关性有显著性差异,对华法林剂量有影响。     

Metabolic profile of nicotine in subjects whose CYP2A6 gene is deleted

Generally, 70-80% of absorbed nicotine is mainly metabolized to cotinine by cytochrome P450 (CYP) 2A6. There is genetic polymorphism in the human CYP2A6 gene. Among several mutated alleles, CYP2A6*4 allele is a whole deleted type. The purpose of the present study was to clarify the metabolic profile of nicotine in subjects whose CYP2A6 gene is deleted. We developed a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for nicotine and its nine metabolites. Excretion levels of nicotine and its metabolites in 24 h accumulated urine after the chewing of one piece of nicotine gum were evaluated in five Japanese subjects whose CYP2A6 genotype was determined. In three subjects with CYP2A6*1A/CYP2A6*1A, CYP2A6*1A/CYP2A6*1B, and CYP2A6*1A/CYP2A6*4 (group I), nicotine was mainly excreted as cotinine, trans-3'-hydroxycotinine, and their glucuronide (approximately 60%). In contrast, in two subjects with CYP2A6*4/CYP2A6*4 (group II), trace levels of cotinine, cotinine N-glucuronide, and cotinine 1'-N-oxide were detected. Trans-3'-hydroxycotinine and its O-glucuronide were not detected. The excretion levels of nicotine itself, nicotine N-glucuronide, and nicotine 1'-N-oxide were higher than those in the other three subjects. The total excretion levels of these three compounds were approximately 95% in group II versus 35% in group I. However, the sum of the excretion levels of nicotine and all metabolites was similar among these five subjects. This is the first report of the metabolic profile of nicotine in subjects whose CYP2A6 gene is deleted.     

山胡椒内生真菌Trichoderma sp. SHJN1和Perenniporia sp. SHJG1的抗肿瘤活性成分研究

目的 从民族药山胡椒内生真菌Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1的代谢物中寻找活性先导化合物。方法 采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及制备型HPLC等对Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1发酵物进行分离纯化，再通过NMR、ESI-MS等鉴定化合物结构，同时采用人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肺癌细胞（A549）对这些化合物的抗肿瘤活性进行初步评价。结果 从2株内生真菌次级代谢产物中共分离鉴定了12个化合物：alantrypinone （1）、oryzalactam （2）、phomoindene A （3）、cis-gregatin B （4）、huaspenone B （5）、stigmasta-7，22-dien-3β，5α，6α-triol （6）、ergosterol （7）、1-deoxy-2-demethylviridiol （8）、viridiol （9）、trichodermamides A （10）、chromone （11）、对-羟基苯乙酸（12）。抗肿瘤活性评价结果显示，化合物3 抑制MCF-7细胞增殖活性IC₅₀为（62.9±1.02）μmol·L^-1[顺铂（cisplatin，DDP） IC₅₀为（30.1±1.67）μmol·L^-1]；化合物8 和9 抑制A549细胞增殖活性的IC₅₀分别为（34.6±1.57）μmol·L^-1和（44.9±1.74）μmol·L^-1[DDP IC₅₀为（20.6±1.42）μmol·L^-1]。结论 化合物3 ，8 和9 具有潜在抗肿瘤活性。