HSA基因转染小鼠淋巴细胞EL-4诱导宿主的体内抗瘤效应

将热稳定抗原(Heat-stable Antigen,简称HSA)的cDNA与质粒载体(PcDNA3)连接,构建成真核表达载体,通过电穿孔的方法将重组质粒导入到小鼠淋巴瘤细胞EL-4中,使其表达抗性基因和HSA分子,通过高剂量G418(400μg/ml)选择培养和有限稀释法克隆,获得高比例表达HSA的阳性细胞克隆,以提供活化T细胞所必需的协同刺激信号,从而诱导宿主体内有效的抗肿瘤免疫应答。实验发现:表达HSA的EL-4淋巴瘤细胞在同系小鼠(C57BL/6)体内的致瘤性明显较野生型肿瘤弱。HSA~ EL-4瘤细胞经丝裂霉素灭活后,腹腔免疫同系小鼠后可获得对低剂量(2×10~3/鼠)野生型瘤细胞EL-4攻击的免疫保护效应。用HSA~ 瘤细胞灭活后作为瘤苗治疗早期带瘤动物显示一定的治疗效果。     

IL-4基因及B7-1基因共转染新型瘤苗的制备及其治疗作用的初步研究

本文研究了ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染后Ｂ１６黑色素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１的表达水平，并探讨了基估ＣＴＬ诱导过程中的作用。结果表明，ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染Ｂ１６黑素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１表达均高于野生型Ｂ１６黑色素瘤细胞及转染对照质粒的Ｂ１６黑色素瘤细胞。     

腺病毒介导的IL—2基因及B7—1基因联合转染G422细胞致瘤原性和免疫原性的变化

目的研究联合细胞因子基因转染的D422胶质母细胞瘤细胞体内致瘤原性和免疫原性的变化,为胶质瘤的免疫基因治疗打下基础.方法IL-2基因和B7-1基因转染的G422细胞1×105皮下和脑内接种,观察肿瘤生长速度和荷瘤小鼠的存活期,2周取脾脏,检测NK、LAK和CTL的杀伤活性.结果IL-2和B7-1基因联合转染的G422细胞,皮下接种后肿瘤生长明显减慢,脑内接种动物存活期明显延长,NK、LAK和CTL的杀伤活性增强.结论IL-2基因和B7-1基因联合转染的G422细胞,致瘤原性下降,免疫原性增强,能有效激活机体特异性与非特异性抗肿瘤免疫反应.     

HSA基因转染小鼠淋巴瘤细胞EL-4诱导的抗瘤效应

本文将热稳定抗原(HSA)的CDNA与质粒PcDNA3连接,构建成真核表达体,通过电穿孔的方法将重组质粒导入不表达HSA的淋巴瘤细胞EL-4中,使其表达抗性基因和HSA分子,通过高剂量G418(400μg/ml)选择培养和流式细胞仪免疫荧光染色检测,并进一步通过有限稀释法克隆到高表达HSA的单细胞克隆,用含低剂量G418(200μg/ml的RP-MI1640完全培养液维持培养,以维持转染瘤细胞上的HSA的表达,从而提供活化T细胞必要的协同刺激信号,以诱导出有效的抗肿瘤免疫应答.实验观察了高表达HSA淋巴瘤细胞EL-4在体内诱导的抗癌效应及其提高肿瘤免疫原性的作用.结果表明,用丝裂霉素C灭活的HSA~ 癌细胞作为瘤苗早期治疗野生型瘤细胞EL-4接种小鼠的动物模型显示     

B7-1基因转染骨肉瘤细胞诱导抗骨肉瘤主动免疫的实验研究

目的:探讨B7-1基因转染骨肉瘤细胞能否诱导抗骨肉瘤主动免疫作用。方法:利用脂质体将B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1和空载体pcDNA3分别导入骨肉瘤细胞株LM8中,G418筛选出阳性克隆(分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3),通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪检测B7-1基因与蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验观察转基因细胞株LM8/B7-1的体外增殖能力;用LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞和致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤活力;将LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3细胞分别接种到C3H雄性小鼠前腋下,观察其致瘤能力;观察LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8是否具有免疫保护作用。结果:B7-1基因在转基因细胞LM8/B7-1中能得到高表达;LM8/B7-1体外增殖能力与LM8和LM8/pcDNA3无明显差异(P>0.05);LM8/B7-1诱导的CTL的杀伤活力显著高于LM8和LM8/pcDNA3诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活力,LM8/B7-1诱导的CTL对LM8/B7-1的杀伤活力也明显高于对LM8和LM8/pcDNA3的杀伤活力(P<0.05);LM8/B7-1致瘤能力较LM8和LM8/pcDNA3细胞明显下降(P<0.01);LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8具有免疫保护作用。结论:B7-1基因转染骨肉瘤细胞能诱导抗骨肉瘤主动免疫作用,为利用B7-1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗提供了实验依据。     

B7-1基因转染对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的:研究B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1转染对骨肉瘤细胞株LM8的生物学行为的影响。方法:用脂质体(lipofectamine)介导B7-1基因和空载体pcDNA3转染LM8细胞,G418筛选得到抗性克隆,分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3,用聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞仪(FCM)鉴定转染基因的表达,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)和FCM检测细胞体外增殖活性,并观察转染细胞在C3h小鼠体内致瘤能力。结果:RT-PCR和FCM显示B7-1基因在骨肉瘤细胞株LM8中呈高表达,LM8/B7-1体外增殖活性与LM8/pcDNA3和LM8细胞差异并无显著性(P>0.05),但LM8/B7-1的致瘤能力显著下降(P<0.01)。结论:B7-1基因对骨肉瘤细胞的体内增殖能力产生明显抑制作用,可以作为骨肉瘤基因治疗的理想目的基因之一。     

IL-23基因转染小鼠乳腺癌细胞的体内外促凋亡作用研究

目的:将小鼠IL-23基因转染小鼠乳腺癌细胞MA-891,检测该细胞在体内外的凋亡变化,探讨IL-23抗肿瘤作用机制.方法:应用逆转录病毒载体(LXSN)将含 IL-23 基因质粒经ψ2(亲嗜性)和PA317(双嗜性) 2种细胞包装,G418筛选获得携带 IL-23 基因的病毒,后者转染MA-891细胞,经G418筛选后获得IL-23/MA-891阳性克隆.用ELISA法检测IL 23/MA-891细胞分泌IL-23的能力,用MTT比色法检测细胞体外增殖能力.小鼠皮下接种转染IL-23/MA-891细胞,观察其体内致瘤性变化;用流式细胞术及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;用RT-PCR和Western 印迹法检测肿瘤组织Fas和survivin的表达.结果: IL-23 基因成功转染MA-891细胞,获得了IL-23高表达细胞IL-23/MA-891.转染 IL-23 基因不影响MA-891细胞的体外生长和细胞凋亡,但体内 IL-23 基因转染组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织细胞凋亡率增高( P <0.01),细胞表面Fas的表达水平明显增加( P <0.01),survivin表达水平明显降低( P <0.01).结论:转染小鼠 IL-23 基因后对小鼠乳腺癌细胞MA-891的体外凋亡无影响,但在体内 IL-23 可能通过降低survivin表达和上调Fas表达,诱导细胞凋亡而产生抗肿瘤作用.     

白细胞介素-18基因转染的NCI-H460肺癌细胞生物学特性研究

目的:研究IL-18基因转染的NCI-H460肺癌细胞的生物学特性.方法:设转染组(GT组)、空载体转染组(PT组)和未转染组(NT组),分别以IL-18转染的NCI-H460细胞、pcDNA3.1(+)转染的NCI-H460细胞及未转染的NCI-H460细胞为实验细胞,观察3组细胞生长情况;MTT法测定细胞增殖.Boyden Chamber试验比较细胞侵袭能力.将3种细胞接种裸鼠,观察成瘤时间、生存时间及肿瘤大小.结果:培养第7天3组的细胞数量为GT组(5.92±0.27)×104,PT组(7.20±0.20)×104,NT组(7.09±0.12)×104,72 h时A值为GT组0.97±0.08,PT组1.35±0.07,NT组1.28±0.10,3组穿透滤膜细胞数为GT组27.50±5.72,PT组38.67±6.31,NT组41.33±5.89,GT组细胞增殖及侵袭力低于PT组及NT组.3组成瘤时间为GT组(12.0±2.19) d、PT组(9.17±1.94) d、NT组(8.67±1.86) d,生存时间为GT组(51.67±7.45) d、PT组(40.17±9.83) d及NT组(37.83±10.07) d,肿瘤体积为GT组(2 082.4±670.2) mm3、PT组(3 893.4±316.3) mm3、NT组(3 338.2±725.4) mm3,GT组细胞在裸鼠体内生长速度低于PT组及NT组.结论:IL-18基因转染的NCI-H460肺癌细胞增殖减慢,侵袭性减弱,致瘤性下降,为IL-18用于治疗恶性肿瘤奠定基础.     

白细胞介素6基因转染的瘤苗体内造血调控的实验研究

将人白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染至小鼠红白血病细胞（ＦＢＬ－３），经丝裂霉素Ｃ灭活制备成瘤苗，接种于小鼠。接种后第４天，血小板、中性粒细胞即开始升高，第１０天达高峰并持续至第２５天，但白细胞数量变化不大。骨髓和脾脏粒细胞／巨噬细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）、巨核细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）数量亦有不同程度增高。实验表明，ＩＬ－６基因转染的瘤苗能显著增强骨髓和脾脏造血功能，提高外周血血小板和中性粒细胞数量     

抗胃癌生物活性肽对荷胃癌裸鼠酯酶同工酶代谢的影响

本文观察了协同刺激分子B7-1某因导入小鼠EL-4淋巴瘤细胞后在小鼠体内诱导的抗瘤效应.结果表明,逆转录病毒(PLXSN)载体重组的小鼠B7-1基因表达质粒导入小鼠EL-4淋巴瘤细胞,经有限稀释法克隆后获得高表达的B7-1~ EL-4细胞.B7-1~ 瘤细胞的形态,体外增殖能力及MHC Ⅰ类分子表达水平与野生型肿瘤细胞无显著差别,但致瘤性显著降低,用野生型肿瘤致死剂量接种C57BL/6小鼠完全排斥.同时免疫原性明显增强,以X-线灭活的B7-1~ 肿瘤细胞免疫后小鼠获得了对随后致死剂量野生型细胞攻击的免疫保护作用.以X-线灭活的肿瘤细胞作为瘤苗进行实验性免疫治疗,对早期(接种7天)形成的肿瘤有一定的治疗效果,但时晚期(接种14天)肿瘤.B7-1和B7-1~ 瘤细胞都未显示出明显的治疗效果.上述结果提示肿瘤细胞表达B7-1分子可有效激发机体的抗肿瘤免疫应答.     

GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究

目的：研究ＧＭ－ＣＳＦ及Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法：我们将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ及ＣＤ８０基因通过逆转录病毒载体分别导入ＥＬ－４淋巴瘤细胞中,进而研究了ＥＬ－４／ＧＭ－ＣＳＦ及ＥＬ－４／Ｂ７－１在同系Ｃ５７Ｂ习中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转Ｂ７－１基因的肿瘤细胞诱发了ＣＤ８０的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降,免疫原笥增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤     

mB7－1基因转染小鼠黑色素瘤细胞诱导的抗瘤效应研究

目的：研究共刺激Ｂ７－１（ＣＤ６０）在诱导有效的抗肿瘤免疫反应反应中所起的作用。方法：在体外,三种肿瘤细胞与同上鼠脾淋巴细胞混合培养（ＭＬＴＣＳ）后,测定淋巴细胞增殖指数（ＭＴＴ法）和特异杀伤活性（ＬＤＨ释放改良法）;ＭＴＴＩ地测定肿瘤细胞体外增殖能力后,将Ｂ１６－ｎｅｏ和Ｂ１６－ｍＢ７－１妆种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下后观察成瘤期、荷瘤小鼠存活以及肿瘤结节生长速度。结果：与野生型Ｂ１６细胞和模拟转     

树突状细胞与髓性白血病的免疫治疗 *

目的：我们应用逆转录病毒构建了ＩＬ－１２,Ｂ－７和ＧＭ－ＣＳＦ表达载体,以研究基因修的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将３种表达载体分别转染ＥＬ－４胞腺瘤细胞并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种子ＥＬ４／ＩＬ－１２细胞后,在Ｃ５７ＰＬ／６同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较ＥＬ４／Ｗｔ和ＥＬ－４／Ｎｅｏ组明显减少（Ｐ〈０．０１）。在ＥＬ４／ＩＬ－１２被排斥后,体内试验中诱发了实验动物抗     

4-1BBL基因修饰colon26细胞的体内抗肿瘤作用

背景与目的:研究4-1BBL基因修饰的小鼠结肠癌细胞瘤苗在小鼠体内诱导产生免疫反应及抗肿瘤效应的能力. 材料与方法:采用脂质体介导法将真核表达质粒pMKIT/4-1BBL导人小鼠结肠癌细胞colon26,经G418筛选后获得4-1BBL稳定高表达细胞克隆colon26/4-1BBL和空载体细胞克隆colon26/pMKITneo,以丝裂霉素C处理,制成癌细胞瘤苗.将野生型colon26、eolon26/pMKITneo和colon26/4-IBBL细胞分别接种于BALB/c小鼠右侧背部皮下,观察细胞致瘤性.取MMC处理的colon26细胞、colon26/pMKITneo细胞和colon26/4-1BBL细胞,分别腹腔免疫BALB/c小鼠,采用改良MTT法测定CTL和NK细胞杀伤活性,取血清用ELISA法测定IL-2、IFN-γ含量.于BALB/c小鼠皮下接种colon26细胞制备早期癌模型,第2 d腹腔注射colon26/4-1BBL瘤苗,7 d后再注射1次,观察肿瘤生长情况.结果:与野生型colon26和colon26/pMKITneo细胞相比,colon26/4-1BBL细胞在小鼠体内的致瘤性明显下降,表现为肿瘤结节出现时间延迟,肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05).MMC处理的肿瘤细胞瘤苗免疫小鼠后,colon26/4-1BBL组小鼠CTL和NK细胞的杀伤活性明显增高(P＜0.05);血清IL-2和IFN-γ的含量明显增高(P＜0.01);而且能对亲本肿瘤细胞colon26产生免疫保护作用,大部分小鼠能保持无瘤状态长期存活(100 d以上).colon26/4-1BBL瘤苗治疗后,部分小鼠保持无瘤生存,成瘤小鼠肿瘤生长缓慢,小鼠生存期明显延长(＞70 d).结论:4-1BBL基因修饰的小鼠结肠癌细胞瘤苗能显著增强小鼠的免疫功能,并能产生显著的抗肿瘤作用.     

联合IL-2基因和B7-1基因转染G422细胞体外生物学特性

目的　通过研究联合基因转染后胶质母细胞瘤G42 2细胞生物学特性的变化 ,探讨脑胶质瘤细胞因子基因治疗的新途径。方法　通过重组腺病毒作载体 ,将IL 2基因和B7 1基因转染至小鼠G42 2细胞 ,通过CTLL 2细胞增殖的MTT法检测IL 2的分泌水平 ,FACS检测B7 1和ICAM 1的表达 ,MTT法检测转基因后G42 2细胞的增殖活性 ,双层琼脂糖培养法检测其克隆形成能力。结果　IL 2基因转染 4小时后即可检测到IL 2的分泌 ,2 4小时达高峰 ( 4 83U/ml) ,一周时表达明显下降 ,B7 1高表达 ,ICAM 1表达增加 ,增殖能力和克隆形成能力无变化。结论　重组腺病毒作载体 ,IL 2基因及B7 1基因共转染G42 2细胞 ,能得到目的基因的高效表达 ,同时促进了粘附分子ICAM 1的表达 ,体外增殖活性不受影响。     

GM-CSF gene or B7-1 gene modified murine EL-4 cells vaccine

Since 1990, gene transduced tumor vaccine has been studied. Many articles reported that tumor cells transduced with some cytokine or costimulatory molecule could induce system antitumor immunity[1,2] In this study, EL-4 lymphoma was transduced with recombinant retrovirus containing the murine GM-CSF gene and B7-1 gene, respectively. The effect of gene transduction on antitumor immunity was investigated.MATERIALS AND METHODSMice and Cell Lines Female C57BL/6 mice were bought from …     

转染CD80(B7-1)基因前后人肿瘤细胞系表面标志表达

第十七届国际癌症大会将于1998年8月24～28日在美丽的巴西港口城市里约热内卢举行.此次大会是继1994年印度新德里第十六届国际癌症大会后,肿瘤界的又一次盛会.会议将特邀世界最著名的科学家作10个大会演讲,并分临床及基础两个大专题广泛交流肿瘤研究领域的最新进展.临床专题:脑、头颈、口腔、甲状腺、食管、肺、胃、肠、肝、胰腺、前列腺、卵巢、子宫、皮肤、软组织、骨等各种癌肿,及原发灶不明者、淋巴瘤、白血病等的诊断与治疗(临床试验、近距离放疗、体外放疗、单抗治疗、大     

转4-1BBL 基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究

 目的 研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM-CSF）的能力。方法 以丝裂霉素C（MMC）处理高表达转m4-1 BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞，制成肿瘤细胞瘤苗（TCV），体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后，观察其对脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM—CSF）的影响。结果 TCV-4-1 BBL刺激后，脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高。结论 转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF。