核转录因子-kB-圈套抑制血管内皮细胞核转录因子-kB激活机制的探讨

目的观察核转录因子(NF)-κB圈套(decoy)对脂多糖(LPS)刺激后人脐静脉内皮细胞NF-κB激活的抑制作用,并就其作用机制进行探讨.方法获取和培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),平均分成4组.NF-κB-圈套组和错配-圈套组分别预先以NF-κB-圈套-Lipofectamine2000复合物和错配-圈套-Lipofectamine2000复合物(对照组)处理,LPS组和对照组分别加入同体积的培养液,观察荧光标记DNA转染细胞情况.用10μg/ml LPS刺激2 h激活NF-κB,收集细胞,分别提取细胞核蛋白,检测不同组NF-κB活性以及P65和P50亚基蛋白质含量.结果转染5 h后大于90%细胞核内可观察到绿色荧光.NF-κB-圈套组NF-κB P65亚基活性显著低于错配-圈套组和LPS组,但P65和P50亚基蛋白质含量两组之间无显著差异.结论NF-κB-圈套能抑制细胞核内NF-κB的DNA结合活性,这一作用可能是NF-κB-圈套转入细胞核后占据转录因子核定位区的结果.     

核因子-κB圈套对Kupper细胞活化的抑制作用及其机制

目的探讨核因子-κB（NF-κB）圈套对大鼠Kupper细胞（KCs）活化的抑制作用及其机制。方法分离大鼠KCs并随机分为3组：正常对照组、内毒素（LPS）刺激组及NF-κB圈套组，后者KCs在LPS刺激前转染NF-κB圈套。除对照组外，两个实验组培养液中加入终浓度为1mg／L的LPS。于LPS刺激6h后，凝胶电迁移率改变分析法（EMSA）检测NF-κB蛋白结合活性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测KCs膜表面CD80mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6表达情况。结果转染NF-出圈套可以高效抑制KCs激活。EMSA结果显示NF-κB活性仅为LPS组的0．53，RT—PCR结果显示KCs CD80 mRNA表达仅为LPS组的0．46，ELISA结果显示培养上清TNF-α表达量仅为LPS组的0、37，IL-6仅为LPS组的0．60。结论NF-κB圈套可以高效抑制NF—κB的转录活性，降低KCs膜表面共刺激分子和细胞因子的产生，为活体内应用NF—κB圈套提供了可靠的实验依据。     

核转录因子-κB组成性激活对胃癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及其对胃癌细胞增殖的影响机制。方法 采用蛋白免疫印迹法(Western blot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB蛋白质表达水平的差异。通过Trans AM~(TM)NFκBp65试剂盒来比较不同胃癌细胞株中p65亚基的蛋白活性差异。选取活性较高细胞株,观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对NF-κB活性的影响;利用噻唑蓝(MTT)法,分别观察24、48、72h,PDTC对细胞增殖的影响。并采用流式细胞分析技术(FCM)检测细胞的凋亡情况。结果 4株胃癌细胞株胞核中均存在NF-κB蛋白的表达,即存在NF-κB的组成性激活,且存在表达差异。活化的p50亚基在AGS细胞株中表达较低,在MKN28、MKN45、SGC-7901细胞株中表达较高;活化的p65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞,NF-κB的活性均被抑制(P<0.01);同时细胞表现为不同程度的增长抑制(P<0.01),FCM结果显示PDTC可诱导细胞的凋亡。结论 胃癌细胞株中存在NF-κB的组成性激活,并在不同的细胞株中存在表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖,其机制与PDTC所诱导的细胞凋亡有关。     

转录因子核因子-κB p65通过miR-17调控血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究miR-17在血管平滑肌细胞(VSCM)增殖中的作用,以及转录因子核因子(NF)-κB调控miR-17的作用机制。方法将miR-17mimics转染人VSCM,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期。生物信息学预测NF-κB p65与miR-17启动子区存在结合位点,将pcDNA3.1-p65与报告基因载体p GL3-miR-17启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因Luc活性分析NF-κB p65对miR-17启动子区的影响。脂多糖(LPS)刺激细胞后,检测NF-κB p65、miR-17的表达水平。结果与miR-NC组相比,转染miR-17 mimics后,VSMC增殖能力增强,差异具有统计学意义(P0.05),细胞周期G0/G1期明显减少,S与G2/M明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。与miR-17启动子区结合位点突变型(Mutant)组相比,转染miR-17启动子区野生型(Wild)组荧光素酶Luc活性增高,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,LPS刺激细胞后,NF-κB p65、miR-17表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 NF-κB通过直接结合miR-17启动子区,促进miR-17的表达从而促进VSMC的增殖。     

9型重组腺相关病毒介导抗核转录因子-κB核酶基因体外转染大鼠心肌细胞及对核转录因子-κB活性的影响

目的 观察9型重组腺相关病毒(rAAV9)介导抗核转录因子-κB(NF-κB)核酶基因(rAAV9-ECFP-R65)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对NF-κB活性的影响.方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数(MOI)1×106v.g./cell转染H9C2细胞,在倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性表达,采用流式细胞仪检测转染效率.Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP-R65对H9C2细胞增殖影响.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、rAAV9-EGFP-R65及PDTC处理H9C2细胞,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性.结果 转染后第1天EGFP开始表达,表达强度随着时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,此时流式细胞仪检测转染率为(32.27±3.19)%.Alamar Blue法检测表明转染组细胞增殖末受影响.常态下H9C2细胞NF-κB有一定活性,TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,而rAAV9-EGFP-R65、PDTC抑制NF-κB活性.结论 rAAV9-ECFP-R65能够有效地转染H9C2细胞,对细胞增殖无明显抑制,并能显著抑制H9C2细胞NF-κB活性.     

胃癌细胞株核因子κB组成性激活对细胞增殖的影响

目的探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及对胃癌细胞增殖的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)和蛋白免疫印迹法(Westernblot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB的mRNA和蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB的转录和蛋白质表达水平的差异,并利用TransAMTMNF-κBP65试剂盒比较不同胃癌细胞株中P65亚基的蛋白活性差异。采用噻唑蓝(MTT)比色法观察NF-κB活性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对胃癌细胞增殖的影响。结果4株胃癌细胞株中均存在NF-κB的组成性激活,且存在蛋白表达和活性差异。活化的P65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞的增殖明显受到抑制,对照组呈正常生长。结论胃癌细胞株中存在NF-κB组成性激活及P65蛋白表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖。     

胃癌及癌周淋巴细胞核转录因子-κB激活的临床意义

目的探讨胃癌及癌周浸润淋巴细胞核转录因子(NF)-κB激活状态对胃癌预后的影响。方法采用EnVision两步法对41例胃癌标本进行NF-κB检测;应用CD31、CD20、CD4、CD8单克隆抗体分别检测其微血管密度(MVD)及淋巴细胞亚型;并结合随访资料进行预后分析。结果本组28例有NF-κB组成性激活(68.3%),NF-κB激活与临床病理分期有关。NF-κB激活组MVD明显高于NF-κB阴性组(P=0.002),且生存期短于NF-κB阴性组。24例(58.5%)有癌周淋巴细胞NF-κB激活;淋巴细胞NF-κB激活与病理组织学分型无明显关系;TNMⅢ、Ⅳ期胃癌多缺乏淋巴细胞NF-κB激活(P=0.046)。癌周淋巴细胞NF-κB激活组预后优于NF-κB阴性组(P=0.0001)。结论胃癌细胞NF-κB组成性激活可促进肿瘤内新生血管形成及浸润性生长,从而导致患者生存期缩短;而癌周淋巴细胞的NF-κB激活可使机体抗肿瘤免疫反应增强,是预后良好的标志。     

白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌白细胞介素-8的研究

目的研究白细胞介素-1β(IL-1β)对肺II型上皮A549细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的诱导作用,探讨相关的细胞内信号通道的激活和传导的机理。方法以1ng/ml终浓度的IL-1β干预经核转录因子-κB(NF-κB)的IKK2复合物抑制物(AS602868)预处理的A549细胞,Western blot检测IL-1β干预后细胞内磷酸化IκBα(p-IκBα)和IκBα蛋白的表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)检测NF-κB的p65和p50蛋白的核转移过程;ELISA检测NF-κB的p65和p50蛋白与DNA结合活性及IL-8蛋白的释放。结果IL-1β干预后细胞内p-IκBα蛋白明显升高,IκBα蛋白明显下降;LSCM扫描显示p65和p50蛋白从胞浆向胞核转移,同时p65和p50与DNA结合活性明显升高(P<0.01);IL-8的蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。细胞经AS602868的预处理,阻断了细胞内p-IκBα蛋白升高和IκBα蛋白降解;减少了p65和p50蛋白的核转移和与DNA结合活性(P<0.01);降低了IL-8蛋白的表达水平(P<0.01)。结论IL-1β通过激活NF-κB介导了A549细胞分泌IL-8,结果提示可能通过抑制NF-κB信号通道的方法,减轻呼吸机相关肺损伤(VALI)的生物性损伤。     

061氯胺酮抑制内毒素诱导的细胞核因子κB表达

细胞核因子κB(NF-κB)是转录多种基因时所必需的诱导型转录因子,包括促炎细胞因子、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6和8(IL-6,IL-8)的编码。大多数细胞质(包括脑细胞)含有潜伏性NF-κB蛋白并作为一种无活性的P50蛋白和P65蛋白异源体与抑制蛋白IκB相结合而共存。细胞与TNF-α或脂多糖(LPS,内毒素)接触引起包含体(IB)降解,则许可游离B蛋白易位进入细胞核并激活DNA链成为特殊基因编码,例如TNF-α基因。接着细胞内TNF-α基因增多,引起TNF-α mRNA转录.结果导致一系列细胞过程并释放TNF-α。     

S100A10基因沉默对人软骨细胞内核转录因子NF-κB活性的影响

目的针对人S100A10基因设计siRNA序列并构建shRNA表达载体;重组载体转染人关节软骨(HCs)细胞,观察细胞内S100A10基因表达及其对细胞内核转录因子κB(NF-κB)活性的影响。方法登陆美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,根据人钙结合蛋白A10(S100A10)基因信息,设计3条针对其编码区(CDS)区的小干扰RNA(siRNA)序列。根据设计的siRNA序列,设计两条互补的shRNA序列,构建shRNA重组表达载体;阳离子脂质体法转染shRNA重组表达载体到HCs细胞,转染后48 h,收集细胞,提取细胞总RNA及总蛋白,使用实时PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)的方法检测转染后细胞中S100A10 mRNA及蛋白相对含量;Western blot检测细胞内NF-κB的P65及P50亚基磷酸化。数据统计使用单因素方差分析。结果成功设计siRNA序列并成功构建了shRNA表达载体;mRNA及蛋白含量检测结果显示,三条siRNA序列对目的基因均有沉默效果,其中1号siRNA序列最为-有效,其转染后48 h,细胞内mRNA及蛋白含量相比较未转染组细胞,分别下降了74.2%和76.4%,差异均有统计学意义(t=5.21,P0.01);HCs细胞内S100A10基因沉默,能够明显抑制核转录因子NF-κB活性,与对照组比较,P65及P50亚基磷酸化明显减弱(t=3.02,P0.01)。结论 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs细胞内NF-κB活性。     

核转录因子-κB小干扰RNA转染对食管癌细胞化疗敏感性的影响

我们通过小分子干扰RNA(siRNA)阻断核转录因子(NF) -κB信号通路,观察其对食管鳞癌细胞增殖及化疗敏感性的影响.一、材料与方法构建NF-κB p65 siRNA载体质粒“p65 siRNA”及无义序列质粒“HK”并转染食管癌Eca109细胞,转染72 h后将细胞分为:(1)对照组:未转染Eca109细胞;(2) HK组:Eca109细胞转染HK;(3) p65siRNA组:Eca109细胞转染p65siRNA.     

Celecoxib可通过抑制核转录因子-κB活性诱导SGC7901/ADR细胞的凋亡

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)特异性抑制剂Celecoxib对胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药1(mdr1)基因表达、核转录因子(NF)-κB激活水平及细胞凋亡的作用.方法 实验分为4组:SGC7901组、SGC7901+Celecoxib组、SGC7901/ADR组和SGC7901/ADR+Celecoxib组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测mdr1基因的表达,电泳迁移率实验(EMSA)测定NF-κB激活水平,流式细胞术检测细胞内Rh123聚集及细胞凋亡.结果 SGC7901/ADR细胞中mdr1基因表达和NF-κB活性分别为SGC7901组的2.4倍和3.2倍(P＜0.01),Celecoxib可显著抑制SGC7901和SGC7901/ADR细胞mdr1基因的表达及NF-κB活性,使SGC7901和SGC7901/ADR细胞内Rh123的聚集分别增加1.2倍和1.9倍,可使ADR诱导的SGC7901和SGC7901/ADR细胞的凋亡率分别提高1.65倍和2.98倍.结论 Celecoxib可能通过抑制NF-κB活性而抑制mdr1基因的表达,进而增加SGC7901/ADR细胞内药物聚集并促进细胞凋亡.     

NF-κB P65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究

目的 探讨NF-κB P65亚基siRNA(NF-κB P65 siRNA)在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1,分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组.MTT方法检测细胞增殖情况;Western blot方法检测NF-κB P65及凋亡相关蛋白的表达水平;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况;电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性.BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型.治疗后监测肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数.结果 转染后72 h,与其他组相比,联合治疗组显著降低了细胞活力指数(P<0.05),下调了Bel-2和proeaspase-3的表达水平,同时上调了Bax的表达水平;流式细胞仪检测结果显示,联合治疗组细胞凋亡率高于其他组(P<0.05);EMSA实验结果证实,NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组(P<0.05).联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01).结论 NF-κB P65 siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性,调控凋亡相关蛋白的表达水平,激活线粒体凋亡途径,从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用.     

抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

目的 观察突变型IκBα抑制核转录因子κB(NF-κB)活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1(mdr1)的表达及细胞凋亡的影响.方法 突变型IκBα真核表达重组体(pCMV4-mIκBα)经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验(EMSA)检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123(Rh123)的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为(14.15±1.52),与对照组(4.37±1.31)比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.     

核因子κB圈套策略对膀胱癌细胞侵袭力的影响

目的 探讨核因子(NF)-κB环状哑铃型圈套寡核苷酸(CD-ODN)对膀胱癌NF-κB活性和细胞侵袭能力的影响以及有关的作用机制.方法 脂质体介导法瞬时转染CD-ODN及其突变体(CD-ODN-mut)入膀胱癌BIU87细胞株,荧光素酶报告基因的方法检测不同处理组NF-κB活性的改变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot检测尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的表达水平;重建基底膜试验检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染CD-ODN后BIU87细胞株NF-κB活性被抑制,uPA的表达水平下降,细胞侵袭能力减弱,而转染CD-ODN-mut后无此作用.结论 NF-κB组成性活化可促进uPA的表达,从而导致膀胱癌细胞的侵袭和转移.而CD-ODN能有效的阻断这一通路,降低膀胱癌的侵袭潜能.     

ERK1/2-核因子-κB通路介导乙型肝炎病毒x蛋白抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-α表达

目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）-α的抑制作用，并探讨其中的内在机制。方法 培养人肝癌细胞系HepG2，转染HBx表达质粒，Western blot方法检测PPAR-α、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK，ERK1／2）和IκB蛋白的变化，凝胶迁移率实验检测核转录因子（NF）-κB蛋白的活性改变，分别加入MAPK和NF-κB特异性的抑制剂PD98059与吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC），观察PPAR-α蛋白的变化。结果（1）HBx质粒转染HepG2后，与对照组相比，ERK2表达增加，NF-κB被激活，PPAR．a的表达下调；（2）阻断NF-κB后，NF-κB的活性下降，PPAR-α的表达增加；（3）阻断MAPK后，转染HBx表达质粒，NF-κB的活性下降，PPAR-α的表达增加。结论 HBx抑制细胞核转录因子PPAR-α的表达，可能与ERK1／2-NF-κB激活有关。     

核因子-κB参与人骨髓间充质干细胞的增殖上调研究

目的探讨核因子(NF)-κB在人类骨髓间充质干细胞增殖调节中的作用。方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞后:①蛋白免疫印迹法(Western-blot)观察脂多糖(LPS)作用下NF-κB活性亚型p65及其活性形式磷酸化p65的表达水平随时间变化的情况;②Western-blot法观察NF-κB活性抑制剂PDTC对磷酸化p65表达水平影响;③Western-blot法检测PDTC与LPS单独及共同作用下,细胞增殖标志物增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的变化;④MTT法检测PDTC与LPS作用下细胞增殖水平的变化。结果 LPS可显著上调p65及其磷酸化状态的表达水平,上调作用可被PDTC部分地抑制;NF-κB上调后可提高细胞增殖蛋白PCNA的表达水平,并促进细胞增殖。结论初步证实了NF-κB参与人骨髓间充质干细胞增殖的调节。     

创伤小鼠脾细胞核因子-κB的表达及与全身炎症反应综合征发生的关系

目的探讨创伤后不同时相点脾细胞核因子-kappaB(NF-κB)的DNA结合蛋白和NF-κB P65蛋白亚型表达的动态变化.方法采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后1、4、7d处死动物,分离、纯化脾细胞,提取脾细胞核蛋白.用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性,用免疫蛋白印变法(Western blotting)检测NF-κB P65蛋白亚型表达.结果NF-κB的DNA结合活性在创伤后1、4、7d表达明显增加.NF-κB P65蛋白亚型在创伤后1、4、7d表达明显增高.结论创伤可明显增强脾细胞NF-κB的DNA结合活性和P65蛋白亚型的表达,在创伤后淋巴细胞活化及全身炎症反应综合征(SIRS)发生、发展过程中可能起重要作用.     

脂质体介导NF-κB圈套寡核苷酸体外转染Kupffer细胞的实验研究

目的 研究核因子κB(NF-κB)圈套寡核苷酸(decoy oligodeoxyribonucleotide,ODN)体外借助阳离子脂质体转染大鼠Kupffer细胞(KCs)的效率,并观察其对KCs活化的抑制作用.方法 24只Wistar大鼠分为3组,每组8只.(1)对照组:分离培养正常大鼠KCs;(2)LPs组:KCs培养液中加入终浓度为1 ms/L的LPS作为刺激因素;(3)NF-κB圈套寡核苷酸组:先用阳离子脂质体(lipofectamine)将人工合成的NF-κB圈套寡核苷酸转染KCs(4μg/1×105个KCs),观察转染效果,再用1 mg/L LPS刺激,观察其对KCs活化的抑制作用,包括KCs的吞噬功能、NF-κB易位,以及膜表面分子CD4O mRNA的表达.结果 在LPS刺激下,KCs呈高度活化状态,吞噬功能增强,NF-κB向细胞核移位,细胞膜表面共刺激分子CD40 mRNA呈高表达状态,与对照组相比差异有统计学意义(t=4.01,P<0.01).在阳离子脂质体介导下,人工合成的NF-κB圈套ODN可以高效转染KCs,有效地抑制NF-κB活化,降低其下游基因的表达,与LPS组相比差异有统计学意义(t=4.89,P<0.01).结论 在脂质体介导下,NF-κB圈套寡核苷酸可以高效转染KCs,并有效抑制KCs的活化.     

磷脂酰肌醇-3-激酶参与过度机械通气诱导的核因子-κB激活

目的通过观察磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）抑制剂（ly294002）对不同潮气量机械通气中NF-κB活性的影响,探讨机械通气肺损伤发生机制.方法40只SD大鼠随机分为对照组（A组）、正常通气组（B组）、过度通气组（C组）、正常通气＋ly294002组（D组）、过度通气＋ly294002（E组）,每组8只.分别采用Western blot测定磷酸化蛋白激酶B（Akt）的活性、免疫组化观察I-κB β、NF-κB在肺细胞中的分布及表达;电泳迁移率测定NF-κB的DNA结合活性.结果C组大鼠肺组织中Akt的磷酸化水平较其他各组增加（P＜0.05）,NF-κB的DNA结合活性较A、D、E组显著提高（P＜0.01）,肺组织中I-κB β表达显著降低,NF-κB表达增加,且主要表达于肺内巨噬细胞和肺上皮细胞.ly294002可明显抑制Akt磷酸化,降低NF-κB的活性及在肺组织中的表达.结论PI3K参与了过度机械通气导致的NF-κB激活.