血小板活化因子对人肾小球系膜细胞的影响

利用体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）观察了血小板活化因子（ＰＡＦ）对其增殖、释放肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的影响，发现ＰＡＦ在较低浓度时（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ），对ＧＭＣ摄取四唑盐（ＭＴＴ）的影响甚微，而较高浓度时（１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ）则有明显的抑制作用。经ＰＡＦ刺激１８ｈ的ＧＭＣ上清，对ＴＮＦ敏感的Ｌ９２９细胞株的杀伤能力有所增强，在ＰＡＦ１０－７ｍｏｌ／Ｌ时达高峰。此外，高浓度的ＰＡＦ尚具有促进ＧＭＣ释放ＬＤＨ的作用。这些结果说明：ＰＡＦ可以通过多种机理损伤肾小球系膜细胞，在肾小球的炎症反应中起重要作用     

茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a的影响

目的 探讨茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a（LPa）的作用.方法以LPa刺激体外培养的大鼠系膜细胞,同时用不同浓度茶多酚干预,测定系膜细胞内总胆固醇（TC）含量;油红-O染色光镜观察细胞形态.结果LPa刺激下的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例均较无LPa刺激的对照系膜细胞增高.随培养液茶多酚浓度由40ng/L～40mg/L递增,LPa刺激的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例递减,呈剂量依赖性关系.结论40ng/L～40mg/L茶多酚可呈剂量依赖性抑制大鼠系膜细胞摄取Lpa.     

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;     

曲格列酮对肿瘤坏死因子α诱导肾小球系膜细胞的作用及其机制

目的：探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小球系膜细胞增殖的影响及机制。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白组,TNF-α组、TNF-α+曲格列酮组,MTT法检测各组系膜细胞的增殖情况,ELISA法测定各组系膜细胞上清液中细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达,免疫组化法测定各组系膜细胞核因子κB (NF-κB)的表达情况。结果 TNFα组肾小球系膜细胞6 h、12 h、24 h和48 h增殖的OD值分别为(0.198±0.025)、(0.241±0.028)、(0.286±0.030)、(0.267±0.042),空白组分别为(0.159±0.021)、(0.161±0.019)、(0.164±0.023)、(0.170±0.020),TTNF-α+曲格列酮组分别为(0.187±0.023)、(0.184±0.017)、(0.172±0.018)、(0.168±0.026),TNF-α组肾小球系膜细胞增殖的OD值明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率为(62.34±10.26)%,空白组为(29.97±4.88)%,TNF-α+曲格列酮组为(45.67±8.36)%,TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率明显高于空白组,而TNF-α+曲格列酮组则明显低于TNF a组,高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度为(967.8±77.4) pg/mL,空白组为(571.2±69.6) pg/mL,TNFα+曲格列酮组为(787.5±81.2) pg/mL,TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,但仍高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进肾小球系膜细胞增殖,促进NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达,曲格列酮能够抑制肾小球系膜细胞增殖,降低NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达。     

LDL和HDL对体外培养的人肾小球系膜细胞生长的影响

我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ），观察了低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和高密度脂蛋白（ＨＤＬ）对其增殖的影响。我们发现，经ＬＤＬ刺激４８ｈ，在浓度为５０～２００ｍｇ／Ｌ范围内，ＬＤＬ能促进系膜细胞增殖，且在１００ｍｇ／Ｌ时促进作用达高峰，ＭＴＴ掺入后细胞的Ａ值为０．２０８±０．０１９，较阴性对照（含５％脱脂小牛血清）０．０８５±０．０２４明显升高（ｔ＝８．０９２，Ｐ＜０．００１）。延长刺激时间至１０６ｈ，则高峰为２００ｍｇ／Ｌ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入后的ｍｉｎ－１数为３０１０±３２４．５６，是阴性对照（１４３２．３４±５７０）的２倍多（ｔ＝４．２４１，Ｐ＜０．０１）。但当ＬＤＬ浓度＞２００ｍｇ／Ｌ时，细胞增殖水平均有所下降，甚至显示出轻度抑制作用。用２０％脱脂血清取代全脂血清，细胞增殖明显降低，Ａ值由０．４２２±０．０９降至０．１０２±０．０４２（ｔ＝７．８６，Ｐ＜０．００１）；在脱脂血清中重新加入２０ｍｇ／Ｌ和１００ｍｇ／Ｌ的ＬＤＬ，Ａ值上升为０．３３５±０．０５７和０．６４±０．０９８，分别为脱脂血清的３．２８和６．２７倍（ｔ值分别为８．０３和１１．９７，均Ｐ＜０．００１）。而不同浓度的ＨＤＬ对细胞显示有     

低密度脂蛋白对体外培养的人肾小球系膜细胞产生活性氧的影响

观察了人低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的人行小球系膜细胞（ＧＭＣ）Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－产生的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平相比较，结果发现：经ＬＤＬ刺激３０ｍｉｎ，浓度≤１００ｍｇ／Ｌ时，ＬＤＬ能明显促进ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－，＞１００ｍｇ／Ｌ时，ＧＭＣ上清中该类物质的浓度并不随之增加。ＬＤＬ刺激ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－的浓度曲线与经ＬＤＬ刺激４８ｈ后ＧＭＣ的增殖曲线以及ＬＤＨ释放曲线相符合。说明ＬＤＬ除可直接影响ＧＭＣ增殖外，尚可通过对ＧＭＣ释放或产生活性氧和ＬＤＨ等炎性介质来间接损伤肾小球。     

血小板激活因子对大鼠肾小球系膜细胞作用研究

目的探讨血小板激活因子(PAF)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的影响及其机制。方法利用体外培养的大鼠MGC与PAF作用,并以各类拮抗剂观察其对GMC的影响。结果 PAF刺激后GMC死亡率与对照组相比较有显著性差异,细胞内蛋白(Pr)漏出增加,细胞外钙内流增加及脂质过氧化加强(P<0.01)。verapamil组与PAF组相比较。GMC死亡率有所减少。细胞外钙内流显著减少。银杏叶组与PAF组相比较,GMC死亡率、细胞脂质过氧化、细胞内Pr漏出及细胞外钙内流均显著减少。MnSo_4组与PAF组相比较,钙内流有所减少,但无显著性差异(P>0.05)。结论 PAF作用于GMC机制与其通过受体影响细胞膜钙通道开放,促进脂质过氧化,从而损伤GMC有关,而与Na~+/Ca~(++)交无关。     

脂蛋白(a)的检测

目的讨论脂蛋白(a)的检测.方法对采集到的样本进行检测并根据检测结果进行诊断.结论许多临床实验研究证明:Lp(a)能抑制纤溶酶原激活,抑制血液凝块溶解,延缓血管壁损伤的修复,加速AS的进程.这一点也可从在动脉粥样硬化斑块常见到Lp(a)推论出,Lp(a)具有致动脉粥样硬化的作用.Lp(a)是冠状动脉粥样硬化的危险因素,它独立于所有其他参数和外源性因素.     

氧化型脂蛋白（a）对大鼠GMCs增生及ICAM-1表达的影响

目的探讨氧化型脂蛋白（a）[Ox-Lp（a）]对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生及细胞闻粘附因子-1（ICAM-1）表达的影响。方法分离Lp（a）并氧化修饰，培养GMCs，分别加入终浓度2、5、5、10、20nmol／L的Ox-Lp（a）作用12h，终浓度5nmol／L的OX-Lp（a）作用12h、24h、48h、60h。采用MTT法测定GMCs增生率，免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原（PCNA）阳性表达率，酶联免疫法检测培养液上清的ICAM-1浓度。并与加入终浓度5nmoL／L的天然Lp（a）[n-Lp（a）]作用12h的Lp（a）组及不加任何刺激因素的空白对照组比较。结果与对照组比较，Lp（a）组GMCs的MTr增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。与Lp（a）比较，Ox-LD（a）刺激后的GMCs MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量明显增高，且Ox—Lp（a）2．5nmoL／L作用高于终浓度5nmoL／L的Lp（a）组（P〈0．01）。随着Ox—Lp（a）浓度的增加，GMCs的MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量呈明显变化，Ox—LF（a）5nmol／L时达高峰，在Ox-Lp（a）10nmoL／L组出现下降，20nmoL／L明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。随着处理时间的延长，GMCs的MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量呈上升趋势，48h达到高峰，60h出现下降（P〈0.01）。GMCs上清的ICAM-1浓度与MTT和PCNA阳性表达率呈正相关（P〈0．01）。结论Lp（a）、Ox—Lp（a）能明显影响GMCs的增生，Ox-Lp（a）生物学作用强于Lp（a）。Ox—Lp（a）对GMCs的作用呈剂量依赖性和时间依赖性，小剂量时刺激GMCs的增生，大剂量则表现为细胞毒作用。Ox—Lp（a）明显影响大鼠GMCs的ICAM-1表达，GMCs上清的ICAM-1浓度与MTT和PCNA阳性表达率呈正相关。提示Ox—Lp（a）对肾小球系膜细胞的作用可能与ICAM-1有关。     

人肾小球系膜细胞原代培养及鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法。方法：取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取最下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞。同时采用形态学观察和免疫荧光技术,对鼠抗人结蛋白,鼠抗人角蛋白进行鉴定,采用MTT、 流式细胞仪技术对不同来源肾脏的系膜细胞生长状况进行比较。结果：形态学、免疫荧光法鉴定表明培养细胞为肾小球系膜细胞,胎肾原代培养后8～10d即可传代,而成年肾脏原代培养后需15～16d方可传代。成年肾脏培养细胞至第4代细胞生长缓慢,贴壁能力减弱,出现死亡。而胎肾培养细胞则可继续培养至第7～10代。结论:三层滤网法分离人肾小球系膜细胞, 方法简单、高效,培养的原代肾小球系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特性,且进一步证明胚胎组织比成年个体肾脏原代细胞培养容易成功。     

复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响

目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。     

L—EGCG对Lp（a）诱导大鼠系膜细胞增生及ICAM-1表达的影响

目的探讨儿茶素的主要成分L-表没食子基儿茶素没食子酸酯（L—EGCG）对脂蛋白（a）[Lp（a）]诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生影响及可能机制。方法选定最佳剂量与最佳时间将GMCs分为对照组、Lp（a）组[Lp（a）（5．0pg／ml）]、L—EGCG组[Lp（a）（5．0μg／ml）＋L—EGCG（200mg／L）处理]共三组分瓶培养。观察L—EGCG对GMCs增生率（MTT）、增生细胞核抗原（PCNA）阳性表达率及培养液上清的细胞间粘附因子-1（ICAM-1）浓度的影响，并与对照组相比较。结果在对照组、Lp（a）组及L—EGCG组，随着处理时间的延长，GMCs的MTT、PCNA、上清ICAM-1浓度呈增加趋势，经F检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组比较，应用Lp（a）5．0g／ml处理后，在不同的处理时间，Lp（a）组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显增高，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与Lp（a）组比较，应用L—EGCG处理Lp（a）诱导的大鼠GMCs，在不同的处理时间，L—EGCG组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显降低，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。在Lp（a）组、L—EGCG组，培养上清ICAM-1浓度与PCNA阳性率及与反映系膜细胞增生指标的MTT呈正相关。结论Lp（a）能明显促进肾脏GMCs的增生，L—EGCG可明显抑制Lp（a）诱导的大鼠GMCs增生，此可能与影响ICAM-1表达有关。     

氧化修饰引起脂蛋白(a)结构和生化特性变化

目的 :研究体外丙二醛 ( MDA)、铜离子 ( Cu2 +)氧化修饰脂蛋白 ( a) [L p( a) ]结构和生物学性质的变化。　 方法与结果 :氧化修饰 L a( a)过氧化程度增高 ,负电荷增加 ,易被巨噬细胞——清道夫受体识别和摄取。MDA修饰 Lp( a)出现新的 MDA- L DL位点 ;同纤维蛋白溶酶原 ( Pg)竞争抑制试验显示氧化、修饰 Lp( a)同 Pg同源性增加。　 结论 :提示载脂蛋白 ( a)状态与动脉粥样硬化的病理过程有关     

102例脑血管疾病患者血清脂蛋白(a)的检测

本文采用免疫透射比浊法对58例脑出血患者和44例脑梗塞患者血清Lp(a)进行检测并与健康体检者进行分析比较,三者结果分别为336.0±168.7mg/L和350.7±173.1mg/L及184.1±132.2mg/L,患者血清Lp(a)较正常人明显升高(P<0.01),Lp(a)是脑血管疾病一种重要危险因子。     

纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞与冠心病的相关研究

目的探讨血浆纤维蛋白原(FN)、D-二聚体(D-dimerDD)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、外周血白细胞(WBC)与冠心病的相关关系。方法入选经冠状动脉造影证实的冠心病患者78例(冠心病组),分为急性心肌梗死(AMI)组,不稳定型心绞痛(UA)组及稳定型心绞痛(SA)组。并入选冠状动脉造影阴性的对照组60例,入院后24小时内测定纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量并进行比较。结果冠心病组纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量均高于对照组,有显著性差异(P<0.01,P<0.05);纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量在AMI组>UA组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);UA组的纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量明显高于SA组,差异有显著性(P<0.01,P<0.05);纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量在SA组>对照组,但差异无显著性(P>0.05)。同时,冠心病组中随冠状动脉累及支数的递增,纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量也有递增趋势。结论冠心病是多因素疾病,应用纤维蛋白原、D-二聚体、脂蛋白(a)、外周血白细胞含量测定评价冠心病的发生风险及严重程度具有重要参考价值。     

IgA肾病患者血清IgA1活化细胞外信号调节激酶并诱发肾小球系膜细胞增殖的作用

目的探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对体外培养的正常人肾小球系膜细胞(HMC)细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化及细胞增殖的刺激作用,并比较其与正常人血清IgA1作用力的异同.方法亲和层析提取正常人及患者血清IgA1,加热聚合(aIgA1),原代培养正常人HMC,Western 杂交测定ERK 蛋白磷酸化,DNA荧光标记技术结合流式细胞仪观察HMC细胞周期变化,直接计数检测HMC增殖.结果 (1)患者及正常人aIgA1均呈时间依赖性诱发HMC ERK信号蛋白磷酸化、DNA 合成和细胞增殖,二者作用趋势相似,作用高峰时间分别为孵育15 min、24～36 h和48～72 h;(2)患者aIgA1刺激强度显著高于正常人aIgA1,在作用高峰时间,患者组和正常人组磷酸化ERK/总ERK 的比值分别为49.5%±10.1%和30.7%±4.4%,S-G2-M期细胞数所占的比例分别为(33.0%±0.3%和30.7%±0.7%,HMC计数分别为(57.78±2.45)×104/ml和(50±1.51)×104/ml,差异均有显著意义(P<0.05);(3)阻断ERK通路只能部分抑制患者aIgA1对HMC增殖的诱导作用. 结论 IgAN患者血清IgA1可以诱导正常人HMC ERK信号蛋白磷酸化并刺激细胞增殖,其作用强于正常人血清IgA1.     

血清脂蛋白(a)、胆红素水平与冠状动脉病变程度关系研究

目的 检测冠心病(CHD)患者的血清脂蛋白(a)和胆红素水平,并探讨其与CHD的关系.方法 对196例疑诊冠心病而接受冠状动脉造影的患者检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL).根据冠状动脉狭窄情况分为非冠心病组(冠状动脉狭窄小于50%,52例)、单支病变组(仅有一支冠状动脉分支狭窄大于或等于50%,53例)和多支病变组(有一支以上冠状动脉分支狭窄大于或等于50%,91例).分析影响冠状动脉病变的相关因素及冠状动脉病变程度与血脂、胆红素的关系.结果 各组间LDL-C、Lp(a)水平依次呈递增趋势,差异有统计学意义(P＜0.05)各组间间接胆红素水平呈依次递减趋势,多支病变组与非冠心病组、单支病变组差异有统计学意义(P＜0.05).单因素logistic回归结果表明血清脂蛋白(a)、间接胆红素均为影响冠状动脉病变的因素(回归系数分别2.125、-1.557,P＜0.01).进一步多因素logistic回归分析表明脂蛋白(a)对冠状动脉病变的影响要弱于低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯(0R值分别为1.238、5.031、3.996,95%CI分别为1.069-6.322、2.457-12.356、2.785-14.764).结论 血清Lp(a)水平升高、IBIL水平降低是CHD发病及病变程度的危险因素. Abstract： Objective To investigate the association of Lipoprotein (a) and bilirubin with coronary heart disease(CHD). Methods One hundred and ninty -six patients undergone coronary angiography and completed clinical examination of TC, TG, HDL - C, LDL - C, Lp ( a), TBIL, DBIL, IBIL were divided into the without coronary diseases group ( coronary artery stenosis ＜50% ,52 cases) ,the single vessel disease group(with only one vessel stenosis ≥50% ,53 cases) and the multi -vessel disease group (with more than one vessel stenosis ≥50% ,91 cases)according to the coronary angiographic results. The correlative factors of coronary lesion and the relationship between Lipid,bilirubin and the severity of coronary lesion were analyzed. Results Higher levels of LDL - C and Lp(a) were found in the single vessel disease group and in the multi -vessel disease group compared with the without coronary disease group, significant difference was found in the LDL- C and Lp(a) level among the 3 groups(P＜0.05). The levels of IBIL were lower in the single vessel disease group and in the multi -vessel disease group compared with the without coronary disease group,significant difference was found in indirect bilirubin level in the multi -vessel disease group compared with in the without coronary disease group and in the single vessel disease group(P＜0.05). Single factor logistic regression showed that Lp (a) and indirect bilirubin are both correlation factors with coronary lession (r =2. 125 and - 1. 557, P ＜0.01 respectively). Advanced multi - factor logistic regression showed weaker correlation of Lp (a) with coronary lesion compared with LDL - C and TG (OR = 1. 238,5.031 and 3.996,95% CI1.069 - 6.322,2.457 - 12.356,2.785 - 14.764 respectively). Conclusions High level of Lp(a) and Low level of IBIL in human significantly influence the severity of coronary heart disease(CHD).