严重急性呼吸综合征血细胞动态变化及预测意义

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者血细胞的变化规律,分析SARS预后的临床指征。方法 对43例SAP6患者动态观察血细胞变化规律,做出趋势图,并比较SARS组与正常对照组、SAPS康复组与病死组之间的区别。结果初诊时SARS组白细胞、淋巴细胞、红细胞均低于对照组(P<0.01)差异有显著意义。SARS病死组淋巴细胞和血小板持续降低,康复组则无降低,据此可提示SARS预后。结论动态观察血细胞变化有利于SARS早期诊断及病情预警,从而提示治疗方法,降低病死率。     

SARS冠状病毒编码蛋白质及其基因分析的研究进展

20 0 3年初 ,一种严重的急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)从我国广东省迅速向周边地区蔓延。直到 6月 4日 ,世界卫生组织 (WHO)共接到来自全球 2 9个国家和地区累计 84 0 2起病例报告 ,其中国内就有 5 32 9人感染。在WHO的协调下 ,全球 10个国家的 11个实     

广东地区严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清的IFA检测

目的：证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸。方法：应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色，检测2003-02-04-04-13期间，广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体，以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本，并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组。结果：72例SARS患者中，62例血清特异性：IgG呈阳性；而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者，血清特异性IgG和IgM均呈阴性。结论：SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体。     

5株SARS-CoV部分基因序列比较分析

目的　分析SARS CoV部分结构区的基因序列 ,了解其变异程度。方法　采用套式PCR法扩增各结构区基因 ,对阳性PCR产物进行克隆和测序 ,并对序列进行分析。结果　完成了LC1株病毒的M、N、E和S基因的扩增和克隆 ,对LC2、LC3、LC4和LC5株病毒的M区基因进行了扩增和克隆。序列分析显示各结构基因的核苷酸序列与已报道的 18株序列的同源性在 99%以上。结论SARS CoV的基因序列较保守 ,有利于PCR诊断试剂和预防用疫苗的研制。     

SARS-CoV的培养和灭活条件的研究

目的　研究SARS CoV的大量培养和灭活方法,为制备马抗SARS免疫球蛋白制剂提供安全的病毒。方法　使用SARS CoV感染Vero、Vero E6和2BS细胞株,筛选对SARS CoV较敏感的细胞株和最佳病毒感染量;在2 5℃、33℃和37℃培养条件下,检测SARS CoV的最适培养温度。在室温下,使用1∶2 0 0 0～1∶2 0 0 0 0的β丙内酯浓度灭活SARS CoV ,观察最佳灭活时间和效果。结果　SARS CoV对Vero和Vero E6细胞株比较敏感。在37℃、5 %CO2 孵箱中培养72h ,细胞病变达75 %以上。1∶4 0 0 0的β丙内酯能够完全灭活SARS CoV。将灭活后的病毒液在2℃～8℃作用16h ,37℃水浴2h能够完全使β丙内酯的毒性水解。结论　用Vero或Vero E6细胞培养SARS CoV ,在37℃、5 %CO2 孵箱中培养72h ,病毒滴度最高。用1∶4 0 0 0的β丙内酯浓度加入病毒液中,作用1h能够完全灭活SARS CoV。     

发现一种与严重急性呼吸综合征相关的新型冠状病毒

目前“传染性非典型性肺炎”在世界范围内爆发流行，世界卫生组织称其为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrom，SARS)。美国CDC采集了SARS患者的各种标本，并使用病毒分离、电子显微镜、组织学研究、分子与血清学分析等技术对这些标本进行广谱的病原学研究。研究结果显示这次的爆发流行与一种新的冠状病毒有关，而且有证据显示这种病毒是引起SARS的病原体。     

SARS肺部病变胶原纤维的检测及其意义

目的 研究SARS肺部病变形态特征和探讨胶原纤维在SARS肺部病变中的变化规律。方法 4例SARS肺标本组织，经HE、苦味酸天狼猩红和免疫组化染色、光镜或偏振光观察胶原纤维的分布及表达。结果 SARS肺部病变发展过程分3期：急性渗出期、纤维增殖期、胶原化期。急性渗出期：胶原纤维较正常稍增多，可见Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型，Ⅰ型较多；纤维增殖期：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维增多；胶原化期：基膜及肺间质Ⅳ型胶原显著增多，而Ⅰ型胶原明显减少。结论 胶原纤维过度增生及代谢异常是导致肺纤维化重要因素之一，苦味酸天狼猩红和免疫组化联合应用对认识胶原纤维的变化规律起到互补作用。     

SARS患者血清细胞因子临床意义探讨

目的　探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)患者病情进展的宿主免疫机制。方法　使用流式细胞仪检测急性SARS感染患者 5 0例和正常对照 2 0例的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 6、IL 10、IFN γ、TNF α)。按照疾病预后分成死亡组和治愈组 ,前瞻性设计分析细胞因子在 2组患者中的异同及对病情发展的影响。结果　治愈组与死亡组患者的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 6、IL 10、IFN γ、TNF α)均明显高于正常对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。治愈组和死亡组比较 :治愈组IFN γ高于死亡组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,死亡组IL 6、IL 10明显高于治愈组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　SARS病毒感染确实引起机体的免疫系统紊乱。功能受损的程度与疾病的预后有一定相关性 ;TH2类细胞因子免疫反应过强 ,TH1类细胞因子免疫反应相对减弱 ,造成的机体免疫自稳平衡失调可能是SARS患者死亡的因素之一     

急性骨髓炎患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α动态变化及其临床意义

目的探讨急性骨髓炎(AOL)患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)动态变化及其临床意义。方法病例源于2018年1月至2018年6月本院骨科收治的48例AOL患者和同期健康的42例骨折患者,分别记为疾病组、对照组,对比两组血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平,观察不同临床特征AOL患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平变化,并分析不同预后患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α动态变化及其临床意义。结果与对照组比较,疾病组血清IFN-γ明显降低、IL-6及TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),AOL患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平在性别、年龄、BMI分布上差异无统计学意义(P>0.05);但在感染部位分布上差异有统计学意义(P<0.05);AOL患者第1、3、5d IFN-γ水平依次明显升高、IL-6及TNF-α水平则依次明显降低(P<0.05),且入院后第1、3、5d与预后不良组比较,预后良好组血清IFN-γ水平明显升高、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.05);AOL患者血清IFN-γ水平与预后呈明显正相关(r=0.421,P<0.01),而IL-6及TNF-α水平与预后呈明显的负相关(r=-0.368、-0.407,P<0.01)。结论AOL患者血清IFN-γ水平呈下降趋势、IL-6、TNF-α水平呈上调趋势,三者动态监测利于AOL患者预后评估及早期治疗方案的制定。     

抗SARS-CoV临床药物治疗及其选择

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种严重威胁人类健康的新发传染病。由于人类对SAILS病毒普遍缺乏免疫力。即使目前采取了较为全面的对症治疗措施。但病死率仍居高不下。据WHO公布。SAILS病死率达14％。15％。60岁以上老年患者的病死率高达60％以上。提示目前临床上采用治疗SAILS的方法有较大的局限。寻找和开发安全有效的治疗方法非常迫切。     

传播链和非传播链SARS患者中SARS冠状病毒抗体的分布及变化规律

目的　探讨人体对SARS CoV血清抗体反应及分布规律。方法　对 30 1例临床诊断病例的血清标本 (其中传播链上的病例 15 8例 ,非传播链病例 14 3例 ) ;采用北京华大GBI生物技术有限公司生产的间接ELISA试剂 ,进行SARS CoVIgG抗体的检测 ,部分病例还进行了SARS CoVIgM的检测。结果　传播链涉及 15条 ,最多涉及 4代 ,各条链的SARSIgG抗体阳性率为 85 70 %～ 10 0 .0 0 % ,总阳性率为 94 30 % (14 9 15 8)。SARS病例数随代数增加而减少。但各代间IgG阳性率的差异无显著意义 ;χ2 =5 11,P >0 0 5。非传播链病例的血清抗体阳性率为 12 5 9% (18 14 3)。与传播链的阳性率比较 ,两者间的差异有显著意义 ;χ2 =199 6 4 ,P <0 0 0 1。在发病后的 0～ 7d、8～ 14d、15～ 2 1d、2 2～ 30d内 ,SARS CoVIgG的累计阳性率分别为 16 6 7%、4 0 0 0 %、70 0 0 %、93 10 % ;然后进入平台期 ,并可以维持 6个月以上。在发病 7d内 ,SARS CoVIgM的累计阳性率为 16 6 7% ,8～ 14d时 ,已有 5 5 17%的标本IgM抗体阳转 ,在 2 1～ 30d时 ,抗体阳性率达高峰 (86 96 % ) ,以后迅速下降。结论　SARS感染后 ,94 %的感染者可产生IgG抗体。检测该抗体可以作为临床核实诊断的依据。SARS CoVIgG抗体在 7d时可能检出 ,一般在 4周达     

CD107a/b分子用于评价SARS-CoV/S抗原特异性免疫应答

目的 观察抗原刺激以后CD4+和CD8+T细胞表面CD107a/b分子的表达与效应性细胞因子的产生之间的关系.方法 正常Balb/c小鼠脾细胞经多克隆刺激剂刺激或者SARS-CoV/S DNA疫苗免疫小鼠脾细胞经S抗原多肽刺激以后,使用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞表面CD107a/b分子的表达与IFN-γ、INF-α、IL-2等细胞因子的表达之间的关系.结果 经抗原多肽刺激后,抗原特异性CD4+ 和CD8+T细胞表面均表达CD107a/b.约80%的CD8+IFN-γ+细胞同时表达CD107a/b;约25%～40%的CD8+TNF-α+细胞表达CD107a/b;而大部分分泌IL-2的抗原特异性T细胞均不表达CD107a/b.结论 可以通过对抗原特异性T细胞表面CD107a/b分子的检测来鉴定抗原特异性T细胞.同时检测效应性细胞因子,可以提高检测的准确性和灵敏度.     

SARS-CoV S DNA疫苗诱导特异性T细胞及相关细胞因子的特性研究

目的 小鼠经皮下SARS-CoV S DNA疫苗免疫后，研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性。方法SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB／c小鼠后，获取淋巴细胞悬液。经S抗原多肽刺激后，采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ／的水平，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果 当S混合多肽刺激后，DNA疫苗免疫小鼠的淋巴细胞产生大量的IFN-γ，与对照鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞亚群分析的结果表明，IFN-γ^＋和IL-2^＋的CD4^＋T细胞百分率明显高于CD8^＋T细胞。单独产生IL-2的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IFN-γ的细胞很少。结论 SARS-CoV S DNA疫苗免疫小鼠后可以诱导抗原特异性CD4^＋和CD8^＋T细胞的产生。     

SARS-CoV受体ACE-2基因的克隆及在真核细胞中的表达

目的克隆、真核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)受体ACE2基因,建立安全、可靠的SARS-CoV保护性体液免疫评价体系。方法采用Trizol一步法提取人右心衰心房组织总RNA,逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)扩增ACE2全长基因,克隆人pcDNA4/HisMax-TOPO表达载体,重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,Western Blot检测其真核表达;建立细胞融合抑制实验以检测SARS-CoV中和抗体,并与SARS-CoV假病毒中和试验进行平行比较。结果重组质粒可在真核细胞中表达ACE2蛋白,其蛋白表达细胞可与S蛋白表达细胞产生细胞融合现象,并可用于中和抗体的检测;其结果与SARS-CoV假病毒中和试验较为一致。结论克隆和真核表达了SARS-CoV受体ACE-2基因;基于其蛋白真核表达的细胞融合抑制实验可用于SARS-CoV中和抗体的检测。     

严重急性呼吸综合征相关冠状病毒检测探针制备及组织原位杂交

严重急性呼吸道综合征(SARS)的流行暴发引起了世界范围内对SARS病原体的分离及发病机制的研究。国内外多个研究机构报道一种新型的冠状病毒为SARS的致病因子；于部分患者的血液、呼吸道分泌物，粪便中检测到这种病毒的存在，或血清中具有该病毒的抗体产生。这对SARS的诊断和治疗都具有重要的意义。但直接于患者的病变组织中检测SARS病毒的报道较少。我们尝试从病变组织中检测SAPS病毒。     

北京株和广州株SARS病毒与非典型肺炎患者血清中和抗体反应观察

目的 研究北京和广州地区分离的SARS病毒的抗原性关系，为非典型肺炎疫苗候选株的筛选提供依据。方法 采用Reed-Muench法测定BJ01和GZ01株病毒的滴度，分别选取北京和广州地区SARS病人血清各6份，采用固定病毒．稀释血清法进行微量细胞交叉中和试验，测定两地病人血清对BJ01和GZ01株病毒的中和抗体水平及交叉中和能力，分析这两株SARS病毒抗原性的差异。结果 北京和广州两地的非典型肺炎病人血清能够中和本地分离的SARS病毒。两地血清可互相交叉中和BJ01和GZ01株SARS病毒。中和抗体水平相同。结论 北京和广州两地分离的SARS病毒BJ01和GZ01株抗原性相似、差异较小。     

应用CBA方法检测一例SARS患者血清Th1/Th2类细胞因子

细胞因子(Cytokine，CK)是由机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的多肽类小分子，分子量在15kD～80kD之间。CK能调节多种细胞产生生理效应，在异常情况下也可导致病理反应。检测细胞因子的技术大致可分为3类：1．生物活性检测法；2．免疫学细胞因子直接定量法；3．分子杂交检测法。但因分子杂交检测法及生物活性检测法所需的实验室条件要求较高，目前多数医院采用免疫学细胞因子直接定量法(ELISA法)，ELISA法每次测得一种细胞因子，操作简单、经济，但因细胞因子之间具有协同或抑制作用，即细胞因子之间具有网络关系，检测单一细胞因子不能阐释免疫动态演变关系，若     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

SARS冠状病毒研究进展

2003年初,不明原因的非典型肺炎从我国广东省迅速向周边地区蔓延。3月15日,世界卫生组织（WHO）将广泛流行的、发病急、传播快、严重威胁患者生命的“非典型肺炎”命名为严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）。SARS的潜伏期为2-12 d,主要临床表现有高热（〉38℃）、头疼和干咳,部分病人有气促等呼吸困难症状,少数进展为呼吸窘迫综合征（ARDS）,后者死亡率极高。同年4月16日,在日内瓦举行的9国科学家会议上,WHO正式确定非典型肺炎的病原体是冠状病毒的一个变种,并将其命名为“SARS冠状病毒（SARS-CoV）”。现就该病毒的研究进展作一综述。     

严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清超氧化物歧化酶含量测定及其临床意义

为观察SARS患者血清超氧化物歧化酶(SOD)含量变化，本文采用RIA检测了66例SARS患者血清SOD含量，并与对照组比较。患者SOD含量明显低于对照组，重型的SARS患者SOD含量明显低于普通型的。恢复期患者SOD含量回升，但仍低于对照组。SARS患者体内产生过量的自由基，使SOD过度消耗。SOD含量变化可以反映SARS病情的严重程度。为此，检测血清SOD有助于观察病情的变化。采用清除机体自由基的药物可能是一种治疗措施。