CTGF siRNA质粒对UUO小鼠肾脏间质纤维化的影响

目的利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响。方法制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达。结果转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05)。结论经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略。     

Hirudin improves renal interstitial fibrosis by reducing renal tubule injury and inflammation in unilateral ureteral obstruction (UUO) mice

Renal interstitial fibrosis (RIF) often occurs in many chronic kidney diseases (CKD). Hirudin now is applied to treat fibrosis in some organs. In this study, we verified the treatment effects of hirudin on RIF in vivo and in vitro with the underlying mechanism. The RIF in vivo was the unilateral ureteral obstruction (UUO) model and RIF in vitro was the renal tubular epithelial cells induced by TGF-β. The renal pathological changes and renal fibrosis were observed by hematoxylin and eosin (H&E) staining and Masson staining. The α-SMA in renal tissues was detected by immunohistochemistry. The inflammatory factors were analyzed by the ELISA assay. The cell apoptosis was observed by TUNEL assay. The related proteins of fibrosis, epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis were assessed by western blot analysis. The experimental data demonstrated that hirudin decreased fibrosis, EMT, inflammation and cell apoptosis in renal tissues of UUO rats and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. Furthermore, hirudin also reduced the expression of collgen-I, FN, α-SMA, N-cad, slug, E-cad, IL-1β, IL-6 and TNF-α in mice serum and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. The apoptosis related proteins (pro-caspase3, pro-caspase9, bcl2 and bax) expression was also down-regulated in renal tissues of UUO rats. In conclusion, hirudin depressed the fibrosis in renal tissues and renal tubular epithelial cells by inhibiting the inflammation, regulating the related proteins of fibrosis and ETM and decreasing the apoptosis of renal tubular epithelial cells. These findings may offer an effective treatment method for RIF.     

1,25-二羟维生素D_3对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化调节性T细胞的作用研究

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化调节性T细胞(Treg)的作用。方法:54只健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、1,25(OH)2D3治疗组(C组)。每组于术后第1天、第3天、第7天分批处死6只,留取肾脏组织。用HE染色观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学染色法测定肾脏人叉头框蛋白P3(FOXP3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与假手术组相比,UUO组FOXP3表达水平显著降低,α-SMA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与UUO组相比,1,25(OH)2D3治疗组FOXP3表达水平显著升高,α-SMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:调节性T细胞可能参与了肾间质纤维化的发生及发展;1,25(OH)2D3作为免疫调节剂可通过上调调节性T细胞减缓肾脏纤维化的进展。     

温阳活血方对UUO大鼠肾组织CTGF表达的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化中的表达及温阳活血方的干预作用。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)肾间质纤维化模型。将大鼠随机分为4组,即:假手术组、模型组、温阳活血治疗组、蒙诺组。药物治疗14天后,收集尿液,检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),处死大鼠,腹主动脉采血观察肾功能,取肾组织观察其病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织CTGF的表达。结果模型组大鼠尿NAG,血尿素氮(BUN)较假手术组显著升高,温阳活血方组尿NAG和血BUN较模型组显著降低;模型组肾组织表现为纤维化病理改变,假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆CTGF有较弱的表达;模型组呈强阳性表达;温阳活血组病理改变较模型组纤维化程度减轻,且CTGF的阳性表达较模型组显著减弱,差异有统计学意义(P<0.05),与蒙诺组比差异无统计学意义。结论温阳活血方可降低UUO大鼠尿NAG和血BUN,而具有保护肾小管功能和改善肾功能作用,可能与其能抑制肾组织CTGF过度表达而减缓肾纤维化病程进展。     

红景天在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及对CTGF、PDGF-B表达的影响

目的:探讨红景天提取物(rhodiola)在肾间质纤维化中的保护作用及其机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分成4组:假手术组、模型组、依那普利组、红景天组。术后第10天处死各组大鼠,经Western蛋白印迹分析方法检测各组结缔组织生长因子(CTGF)、血小板源性生长因子B(PDGF-B)的蛋白表达水平。用免疫组化半定量检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果:模型组CTGF、PDGF-B、α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),红景天及依那普利治疗组明显低于模型组(P<0.01)。组间比较,CTGF、PDGF-B差异有极显著性(P<0.01),α-SMA、肾小管间质损伤指数无显著性差异(P>0.05)。各项指标作相关分析,CTGF与PDGF-B,α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数为正相关关系。结论:红景天可抑制肾间质纤维化,其作用可能与下调CTGF、PDGF-B的表达有关。     

红花对大鼠肾间质纤维化和肾功能的影响

目的：探讨红花对左肾静脉结扎大鼠动物模型中肾功能及肾脏病理的影响，旨在了解红花在延缓肾间质纤维化中的作用。方法：48只大鼠随机分为6组，正常对照、假手术组、手术对照、手术未治疗组、红花提取液治疗组、依那普利治疗组。以菊粉清除率检测肾小球滤过率（GFR）。常规病理染色及免疫组织化学染色后，采用Motic医学图象分析系统分析肾脏病理改变。结果：红花提取液治疗组、依那普利治疗组经治疗，GFR有所恢复，与手术未治疗组组比较，P〈0．05；病理结果显示，手术未治疗组和手术治疗组均可见灶性肾小管萎缩，间质纤维组织增生，但前两者较重。CK-18免疫组化染色显示，手术治疗组阳性染色的比值较对照组及手术治疗组高（P〈0．05）；测肾小管直径结果显示，红花及依那普利治疗组与手术治疗组组相比，P〈0.05。FN表达分析结果显示，红花提取液治疗组、依那普利治疗组较手术对照组和手术非治疗组低（P〈0．05）。结论：红花通过阻止肾间质纤维化，可延缓慢性肾脏疾病的进程。     

Berberine ameliorates renal interstitial inflammation and fibrosis in mice with unilateral ureteral obstruction

Berberine acts via multiple pathways to alleviate fibrosis in various tissues and shows renoprotective effects. However, its role and underlying mechanisms in renal fibrosis remain unclear. Herein, we aimed to investigate the protective effects and molecular mechanisms of berberine against unilateral ureteric obstruction-induced renal fibrosis. The results indicated that berberine treatment (50 mg/kg/day) markedly alleviated histopathological alterations, collagen deposition and inflammatory cell infiltration in kidney tissue and restored mouse renal function. Mechanistically, berberine intervention inhibited NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3 (NLRP3) inflammasome activation and the levels of the inflammatory cytokine IL-1β in the kidneys of unilateral ureteric obstruction mice. In addition, berberine relieved unilateral ureteric obstruction-induced renal injury by activating adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK) signalling and promoting fatty acid β-oxidation. In vitro models showed that berberine treatment prevented the TGF-β1-induced profibrotic phenotype of hexokinase 2 (HK-2) cells, characterized by loss of an epithelial phenotype (alpha smooth muscle actin [α-SMA]) and acquisition of mesenchymal marker expression (E-cadherin), by restoring abnormal fatty acid β-oxidation and upregulating the expression of the fatty acid β-oxidation related-key enzymes or regulators (phosphorylated-AMPK, peroxisome proliferator activated receptor alpha [PPARα] and carnitine palmitoyltransferase 1A [CPT1A]). Collectively, berberine alleviated renal fibrosis by inhibiting NLRP3 inflammasome activation and protected tubular epithelial cells by reversing defective fatty acid β-oxidation. Our findings might be exploited clinically to provide a potential novel therapeutic strategy for renal fibrosis.     

黄芪当归合剂对大鼠肾间质纤维化的影响及机制探讨

目的探讨黄芪当归合剂（A＆A）对肾间质纤维化模型大鼠的影响并探讨其可能的作用机制。方法采用单侧输尿管结扎（UUO）致大鼠肾间质纤维化模型。将大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、黄芪当归合剂治疗组。手术后第9d处死各组大鼠,分别经免疫组化方法观察各组大鼠肾组织的血小板源性生长因子-B（PDGF-B）的表达部位、表达水平及铲平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组PDGF-B、α-SMA、PCNA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组（P〈0．05）,而黄芪当归合剂组均明显低于模型组（P〈0．05）。各项指标作相关分析PDGF-B与肾小管间质损伤指数（r=0．870,P〈0．01）、α-SMA（r=0．956,P〈0．01）、PCNA（r=0．881,P〈0．01）呈显著正相关。结论黄芪当归合剂可能通过下调PDGF-B的表达减轻肾小管间质纤雏化。     

沙利度胺对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究沙利度胺(Thd)对单侧输尿管梗阻(UUO)后大鼠肾间质纤维化的作用。方法 48只SD大鼠随机均分为四组,每组12只:假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、Thd200mg.kg-1.d-1治疗组(Thd组)和洛丁新10mg.kg-1.d-1治疗组(Lot组)。术后7、14d取血检测肾功能,Masson染色观察肾间质病变,免疫组织化学和RT-PCR检测肾组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果与Sham组比较,UUO组血尿素氮和肌酐水平、肾间质纤维化程度以及HIF-1α、α-SMA、ColⅠ蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.01);Thd组上述各观察指标均较UUO组减少(P<0.01);除HIF-1α表达外,Lot组其余指标均较UUO组下降(P<0.01),且与Thd组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Thd可改善肾功能,并可能通过下调HIF-1α表达而抑制肾小管上皮细胞转分化和肾间质细胞外基质积聚,进而发挥肾保护作用。     

CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响.方法 选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1 R.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射.观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达.结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05).结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化.     

五苓散对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响

目的观察五苓散对腺嘌呤致慢性肾衰竭(CRF)大鼠一般状况、肾功能及病理形态的影响。方法采用腺嘌呤灌胃制备大鼠CRF模型,观察药物对大鼠一般情况,体质量、饮水量、尿量、尿蛋白定量24 h,尿素氮(BUN),肌酐(CRE)的影响,采用苏木精-伊红(HE)染色法、Masson染色观察肾组织结构及肾间质胶原沉积情况。结果五苓散治疗后一般情况症状减轻,体质量于给药3～4周明显高于模型组(P<0.05);饮水量、24 h尿量、尿蛋白定量24 h、BUN、CRE明显低于模型组(P<0.05)。肾组织肉眼观察五苓散组比模型组体积有所减小,颜色稍带红褐色;HE染色五苓散组肾脏损伤程度较模型组有所缓解。Masson染色五苓散组肾小管、间质蓝染区域、肾间质纤维化程度较模型组有所减轻。结论五苓散对腺嘌呤致CRF大鼠模型恶化有一定改善作用,对血尿生化指标尿蛋白量24 h、BUN、CRE有降低作用,对肾脏组织结构损伤有改善作用。     

血小板衍生生长因子与CD68在单侧输尿管结扎大鼠肾间质中的表达及意义

目的研究血小板衍生生长因子（PDGF-BB）及CD68（巨噬细胞标志物）阳性细胞在单侧输尿管结扎（UUO）大鼠肾间质中的表达。方法制作大鼠肾间质纤维化模型,于术后第7、14天用免疫组化方法检测肾间质中PDGF-BB、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达及CD68阳性细胞（巨噬细胞）浸润,并进行相关性分析。结果与假手术组比较,模型组肾间质中PDGF-BB、和α-SMA的表达水平明显升高（P〈0.05）,CD68阳性细胞浸润明显增多（P〈0.05）,模型组CD68阳性细胞在第14天时较第7天时减少。α-SMA与PDGF-BBT CD68的表达呈正相关（r1=0.92,P〈0.01,r2=0.98,P〈0.01）。结论PDGF-BB和巨噬细胞参与肾间质纤维化早期改变。     

小鼠内皮型一氧化氮合酶表达的变化与肾间质纤维化的关系

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的变化及其与肾间质纤维化的关系。方法 48只小鼠随机均分为UUO模型组和假手术组,每组术后第1、3、7、14天分别处死6只小鼠,观察肾组织的病理改变,检测eNOS和结缔组织生长因子(CTGF)表达,计算管周毛细血管(PTC)密度。结果模型组术后第7天部分肾小管萎缩,纤维化形成;术后第14天肾小管间质纤维化更加明显。假手术组eNOS表达较多,CTGF低表达。与假手术组相比,模型组第7、14天eNOS表达减少(P<0.05),CTGF表达增多(P<0.05),第3-14天PTC密度下降(P<0.05)。结论小鼠UUO肾组织eNOS表达下降参与了肾间质纤维化的进展。     

肾上腺髓质素在肾间质纤维化实验小鼠肾脏细胞增殖中的作用

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)在梗阻性肾病中对细胞增殖的影响。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法制备梗阻性肾病模型,给予缬沙坦10mg·kg-1·d-1灌胃治疗,采用免疫组化及RT-PCR检测野生小鼠(WT)和肾上腺髓质素基因敲除小鼠(AMKO)肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果野生UUO组小鼠与假手术组相比PCNA阳性细胞数增加,缬沙坦能减少PCNA阳性细胞数。与野生小鼠比较,AMKO假手术组PCNA阳性细胞明显增多,AMKO-UUO组尤为明显,缬沙坦能减少AMKO-UUO组的PCNA阳性细胞数,Ⅲ型胶原和TGF-β1的蛋白表达与mRNA在AM-KO-UUO组明显上调,可被缬沙坦拮抗。结论肾上腺髓质素在UUO介导的肾间质病变的细胞增殖过程中有着重要的作用。     

来氟米特抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察来氟米特对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化指标转化生长因子-β1(TGF-β1)及胶原(Col)Ⅰ、ColⅢ的表达程度的影响及相互关系,从而探讨其作用机制。方法将36只健康、雄性SD大鼠中的24只行左输尿管结扎术,另外12只行假手术。术后第2天开始给药,结扎后的大鼠分为单侧输尿管结扎(UUO)组和治疗组各12只。术后第7、14天分别处死各组中的6只大鼠,用免疫组织化学方法测定TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达情况。行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,动态观察肾间质病理学改变。结果来氟米特能显著减少UUO大鼠肾小管间质TGF-β1的表达,减轻ColⅠ和ColⅢ在肾小管间质的沉积。结论来氟米特抑制受伤的肾小管间质TGF-β1的表达,减少基质的聚集从而减轻肾间质纤维化。提示来氟米特有潜在的延缓慢性肾功能衰竭进程的作用。     

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的的影响,探讨其肾脏保护机制。方法45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction;UUO）组（B组）、UUO联合红花黄色素治疗组（C组）,各15只。C组红花黄色素5mg/（kg·d）,造模术前1d开始腹腔注射给药,各组术后10d处死大鼠,处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果B组、C组可见明显肾间质纤维化的病理改变,可检测到凋亡细胞。C组与B组相比,肾间质纤维化病变程度较轻,凋亡细胞明显减少（P〈0.01）。结论注射用红花黄色素对大鼠肾间质纤维化有保护作用,这种作用可能通过抑制肾小管细胞过度凋亡实现。     

肾性高血压大鼠胰岛素抵抗与肾间质纤维化相关研究

目的 从肾素.血管紧张素系统(RAS)角度初步探讨胰岛素抵抗(IR)对肾性高血压大鼠肾间质纤维化的影响.方法 SD大鼠行"两肾一夹"手术后随机分为蔗糖喂养组和对照组,蔗糖喂养组蔗糖喂养,对照组正常饲养,18周后处理.于处理前1日测定24 h尿蛋白定量;处理日测定2组血浆空腹血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数、肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、尿素氮和肌酐水平.结果 与时照组相比,蔗糖喂养组空腹胰岛素水平明显增高(P<0.01),胰岛素敏感指数水平明显降低(P<0.01),血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、尿素氮和肌酐水平及24 h尿蛋白定量均明显高于对照组(P<0.01).相关分析显示,24 h尿蛋白定量与血浆空腹胰岛素、胰岛素敏感指数、醛固酮及尿素氮水平呈明显相关.结论 IR状态能够加速肾性高血压大鼠肾间质纤维化的损害,除与血压升高、胰岛素的直接促增殖作用有关外,还可能与HIS引起的肾组织局部RAS的激活有关.     

血小板源性生长因子-B在肾间质纤维化模型大鼠肾组织中的表达及意义

目的探讨血小板源性生长因子-B（PDGF-B）在肾闰质纤维化中的表达及意义,比较黄芪当归合剂（A8LA）、霉酚酸酯（MMF）的肾脏保护作用并探讨其可能的作用机制。方法采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、黄芪当归合剂组、霉酚酸酯组。手术后第9天处死各组大鼠,经免疫组化方法观察各组PDGF-B的表达部位、表迭水平及α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组PDGF-B、α-SMA、PCNA的表达及肾小管阃质损伤指数明显高于假手术组（P〈0．05）,而黄芪当归合剂组、霉酚酸酯组均明显低于模型组（P〈0．05）。黄芪当归合剂组与霉酚酸酯组相比两组差异无显著意义（P〉0．05）。各项指标作相关分析．PDGF-B与肾小管间质损伤指数（r=0．870,P〈0．01）、α—SMA（r=0．956,P〈0．01）,PCNA（r=0．881,P〈0．01）呈显著正相关。结论PDGF-B在肾间质纤维化的病程进展中起重要促进作用,黄芪当归合剂、霉酚酸酯则可能通过下调PDGF-B的表达减轻肾间质纤维化。     

Potential methods to prevent interstitial fibrosis in renal disease

Almost all forms of end stage renal disease (ESRD) are characterised by progressive interstitital fibrosis and tubular atrophy. Since most forms of chronic renal failure are initiated by inflammatory processes, anti-inflammatory strategies can be successful, if initiated early, in preventing progression of the disease process. Unfortunately, in most cases the disease is only detected clinically following robust progression of interstitial fibrosis. In these patients, control of secondary risk factors, such as hypertension and hyperglycaemia, can slow the progression rate but cannot stop the process completely. Certainly, ACE inhibitors remain the mainstay of preserving renal function. However, additional therapies are needed for the effective treatment of progressive renal fibrosis. A number of compounds have shown some very potent antifibrotic properties in vitro and in vivo, and are currently undergoing further evaluation. This review discusses the most promising among them. However, few of the therapeutic agents discussed here have been tested clinically. Studies evaluating the potential of a number of these have just commenced whereas for many others clinical use is still many years away. However, some very promising reagents may enhance our clinical arsenal within a relatively short period of time.