影响铜锌超氧化物歧化酶活性的几个因素

影响铜锌超氧化物歧化酶活性的因素很多。溶液介电常数的增加减弱了酶分子活性中心附近ε－ＮＨ＾＋Ｏ＾２的静电吸引力，从而导致酶活的降低。Ｃｌ＾－浓度对ＣｕＺｎ－ＳＯＤ有明显的抑制作用是由于Ｃｌ＾－引起活性部位构象的变化。     

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆表达及活性鉴定

目的获得高表达人铜锌超氧化物歧化酶（hCu／Zn—SOD）的工程菌方法采用RT—PCR技术从人胃组织总RNA中分离扩增了hCu／Zn—SOD的eDNA序列,将该基因重组到T7启动予控制下的分泌型表达载体pET22b（＋）中,构建了表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌B121（DE3）进行诱导表达采用SDS—PAGE、蛋白质免疫印迹分析其活性。结果该工程菌可高表达一相对分子质量大约16kD的蛋白,与抗人Cu／Zn-SOD多克隆抗体有特异的免疫反应,表达量可达菌体可溶性蛋白的20％以上,且具有特异性SOD酶活性。结论该菌株分泌表达了有天然酶活性的hCu／Zn—SOD,为大量制备HCuZn-SOD）和下一步研究工作奠定了基础．     

锌、铜对大鼠红细胞超氧化物歧化酶活性的影响

为探讨锌、铜在抗衰老中的作用及观察老龄大鼠的抗氧化能力的变化,我们测定了给予锌、铜的成年与老年大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,给锌、铜组红细胞SOD活性比对照组明显增高(P<0.01),但给铜组较给锌组高(P<0.01)。老龄大鼠抗氧化能力是降低的。这说明锌、铜可以提高机体的抗氧化能力。     

唾液腺肿瘤铜锌超氧化物歧化酶的免疫组化研究

采用生化手段检测肿瘤组织匀浆中铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)的含量及活性在献上已有报道，而肿瘤组织中CuZnSOD的免疫定位及定量研究报道较少，唾液腺肿瘤的CuZnSOD的免疫定位及定量仍不清楚，本应用卵白素一生物素一酶复合物(ABC)免疫组化法、免疫荧光直接法定位72例唾液腺肿瘤组织中的CuZnSOD，旨在探讨唾液腺肿瘤CuZnSOD的定位和含量变化及其与抗肿瘤治疗敏感性的关系。     

利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300～600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90％以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。     

铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)的硅胶吸附分离法

从牛血或猪血的红细胞中提取铜锌SOD的关键步骤是用二乙氨基乙基纤维素将粗SOD进行纯化。我们以水玻璃为主要原料合成了成本极低的硅胶吸附剂,SOD回收率为90％。制品只有一条凝胶电泳带,效果很好,完全可以代替二乙氨基乙基纤维素用于SOD的纯化。     

柞蚕幼虫铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从柞蚕幼虫分离铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分性质进行研究。方法用氯仿 乙醇除杂蛋白质、丙酮沉淀、热变性、DE 32柱色谱等方法 ,对柞蚕幼虫Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果得Cu ,Zn SOD干粉 9.5 3mg ;比活 10 116 .5 8u/mgpro ;活力回收 5 5 .87% ;纯化倍数为 36 0 .6 7。该酶相对分子质量 (Mr)约为 310 0 0 ;亚基Mr 约为 15 5 0 0 ;最大吸收波长 2 5 8nm ;pH在 5～ 9范围内基本稳定 ;在 4 0℃～ 6 0℃内保温 30min酶活基本不变 ;2mmol/L十二烷基硫酸钠对此酶没有明显的抑制 ;该酶对KCN和H2 O2 敏感。结论柞蚕幼虫含有丰富的Cu ,Zn SOD。     

羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分理化性质进行研究。方法采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、DE FF柱色谱的方法 ,对羊红细胞Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果羊红细胞 5 2 0g得Cu ,Zn SOD总活力为 4 6 70 0 0u ,比活为 812 6u/mg·pro,纯化倍数为 2 6 .2 ,活性回收率为 6 1%。理化性质分析表明 :该酶的最大紫外吸收波长为 2 5 8nm ,亚基相对分子量为 16 .1kD ,每个亚基含 1个铜原子和 1个锌原子。pH在 6～ 11范围内该酶稳定性很好 ,在 35℃～ 75℃范围内 ,保温 2 0min ,酶活基本没有损失。 2mmol/L的SDS对Cu ,Zn SOD没有明显的抑制作用 ,而 2mmol/L的H2 O2 对该酶表现出较强的抑制作用。结论采用此方法分离纯化的Cu ,Zn SOD达到电泳纯 ,其理化性质与其它动物血液来源的Cu ,Zn SOD一致。     

重组人铜锌SOD的部分理化性质研究

对rhCu，Zn-SOD进行SDS-PAGE测定该SOD的亚基分子质量为19ku，该酶对热稳定，在pH5左右的活力最高，对乙腈、EDTA等抑制剂敏感，但是对SDS、尿素等变性剂表现出很好的稳定性。对该酶进行光谱分析表明，在265nm和673nm具有吸收峰，原子吸收光谱分析表明每分子SOD含有2个铜原子和2个锌原子，ESR表明铜原子价态为2价。可认为该重组酶与天然Cu，Zn-SOD在理化性质和结构上基本相同。     

60例心血管疾病患者血清铜-锌超氧化物歧化酶检测初步观察

采用放射免疫分析法，测定冠心病、高血压病及充血性心力衰竭血清CuZn—SOD(SOD—1)。冠心病、充血性心力衰竭血清SOD—1与正常对照组有极显差异。高血压病血清SOD—1与对照组无明显差异。心绞痛发作后与冠心病无心绞痛组也有显差异，但其测定值有重叠现象对心绞痛鉴别诊断意义不大。对充血性心力衰竭随着心衰加重，血清SOD—1值也逐渐升高，尤其是伴肺部感染时，当肺部感染控制，心衰纠正，血清SOD-1也明显降低。     

羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的：从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶(Cu，Zn—SOD)．并对其部分理化性质进行研究．方法：采用有机溶剂去除血红蛋白，热变性，超滤浓缩，丙酮沉淀、DF—FF柱色谱的方法．对羊红细胞Cu．Zn-SOD进行分离纯化。结果：羊红细胞520g得Cu，Zn—SOD总活力为467000IU．比活为8126μ／mg.pro，纯化倍数为26．2，活性回收率为61％，理化性质分析表明，该酶的最大紫外吸收波长为285nm，亚基相对分子量为16．1ku，每个亚基含1个铜原子和1个锌原子，pH在6-11范围内该酶稳定性很好，在35℃-75℃范围内，保温20min，酶活基本没有损失。2mmol／L的SDS对Cu，Zn—SOD没有明显的抑制作用，而2mmol／L的H2O2对该酶表现出较强的抑制作用，结论：采用此方法分离纯化的Cu，Zn—SOD达到电泳纯，其理化性质与其它动物血液来源的Cu，Zn—SOD一致。     

突变的人铜、锌超氧化物歧化酶基因的克隆、测序及表达

目的：通过基因工程的方法将ｒｈＣｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ ｃＤＮＡ基因改造以得到更加稳定的酶。方法：以本实验室构建的 ｒｈＣｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ ｃＤＮＡ为模板,利用含有突变核苷酸的引物进行 ＰＣＲ扩增,将正确测定的含 ｒｈＣｕ, Ｚｎ－ＳＯＤ突变（ｒｈＣｕ,Ｚｎ－ＭＳＯＤ）基因的重组质粒重组到表达载体ＰＥＴ－２２ｂ（＋）中,重组质粒在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达ｒｈＣｕ,Ｚｎ－ＭＳＯＤ。结果：表达产物占菌体总蛋白的３８％,具有特异性ＳＯＤ酶活性。结论：从基因突变的角度改善酶的性能不仅具有理论意义,又有一定的实用价值。     

手术期间影响血清锌,铜变化的因素

对７３例手术患者分别在术前，术中，术后测定血清锌，铜浓度，结果术后比术前明显降低。按年龄，性别、麻醉方法分组进行分析，发现血清锌，铜浓度在不同年龄，性别之间和各种麻醉方法之间无显著差异，而按输液量和手术时间分组进行分析，发现血清锌，铜浓度下降随输否认 量的增多及手术时间的延长而显著下降，说明术中血清锌，铜浓度下降主要和血液稀释及手术刺激有关，而与性别，年龄和麻醉方法无关。     

β—环糊精修饰铜锌—超氧化物歧化酶的研究

β－环糊精（β－Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ，β－ＣＤ）用高碘酸钠氧化成为具有二醛钠结构的活性化合物，在一定条件下与铜锌－超氧化物歧化酶（Ｃｕ，Ｚｎ－ＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＤｉｓｍｕｔａｓｅ，Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ）分子赖氨酸残基上ε－ＮＨ２反应，经硼氢钠还原形成β－ＣＤ修饰的ＳＯＤ，用２，４，６－三硝基磺酸方法得测定其氨基修饰率为３２．４０％，剩余酶活力为６６．４８％，修饰ＳＯＤ在薄层平板ＳＤＳ－ＰＡＧＥ     

蛋白转导结构域4-铜/锌-超氧化物歧化酶融合蛋白的制备及其穿细胞膜的功能研究

目的 拟构建蛋白转导结构域(PTD)4-铜/锌-超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)原核表达质粒,纯化制备PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白,探讨其穿膜能力.方法 设计合成hCu/ZnSOD引物,扩增hCu/ZnSOD cDNA片段;采用PCR靶向克隆法将扩增产物与含有相同酶切位点载体质粒PET16b-PTD4进行重组,扩增质粒,双酶切鉴定和DNA测序;获得PET16b-PTD4-Cu/ZnSOD(CDs)原核表达载体,导入感受态E.coli BL21(DE3)中,进行扩增培养,收集菌体,将其裂解离心、Ni+2亲和层析、收集目的蛋白.融合蛋白孵育人心肌细胞,免疫荧光法检测融合蛋白穿膜能力.结果 通过测序证实实验扩增所得的PTD序列与设计的预期序列一致.设计并简并PTD4-Cu/ZnSOD基因长度为567 bp,通过引物进行正反向测序证实该序列与已被登录的GEN-BANK中Cu/ZnSOD序列相一致,并构建了相应的原核表达质粒.并在E.coli BL21进行大量表达,最终收集的PTD4-Cu/Zn-SOD具有良好水溶性.SDS-page分析显示构建的PTD4-Cu/ZnSOD分子量约为20 kDa,与预期的蛋白分子量20.45 kDa相符合.融合蛋白可以穿透心肌细胞胞膜,进入细胞后主要分布在胞质和胞核内并具有天然活性.结论 成功地构建了PET16b-PTD4-Cu/ZnSOD原核表达质粒,获得了可穿透心肌细胞膜的PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白,为应用Cu/ZnSOD治疗缺血性疾病的研究奠定了基础.     

微生物超氧化物歧化酶的分离纯化及其理化性质研究

本文报道了微生物酵母ＳＩＰＩ－２１５ｙ所产生的超氧化物歧化酶的分离纯化及其理性质的研究，酵母ＳＩＰＩ－２１５ｙ经破壁，提取，透析，超滤及ＤＥＡＥ－５２柱分离纯化所得ＳＯＤ为铜／锌－ＳＯＤ，分子量４６０００ｄ，由两个相同亚基组成，微生物ＳＯＤ对热及ＰＨ相当稳定，在６０～６５℃以下及ｐＨ５～１０的范围内，可保持大部分酶活力，与牛血ＳＯＤ及其它铜，锌－ＳＯＤ的性质相同，可作为食品及化妆品添加剂应用。