PKC-γ和ERK在慢性染铅小鼠脑皮质区的异常表达

目的观察和探讨铅对小鼠脑皮质区蛋白激酶C-γ(PKC-γ)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法小鼠出生1d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,21,28,35d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达状况;分别在7,14,21,28d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区ERK蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度铅2.4mmol/L使ERK表达升高,此后随铅浓度升高ERK表达量逐渐降低,铅浓度升高至9.6mmol/L时,随着铅浓度升高,ERK表达量不再降低,相反有所回升。结论铅扰乱小鼠脑皮质区PKC-γ及ERK蛋白正常表达。     

活化ERK的表达与食管鳞癌病理特征关系探讨

目的　研究人食管鳞癌及癌旁正常食管黏膜组织中细胞外信号调节激酶 (ERK1 / 2 )及其活化态 (p -ERK1 / 2 )的表达 ,探讨ERK1 / 2活化与人食管鳞癌病理特征的关系及其在人食管鳞癌发生发展中的意义。方法　应用westernblot方法和免疫组织化学方法检测 6 0例人食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的ERK1 / 2及p -ERK1 / 2蛋白的表达情况。结果　食管鳞癌组织与癌旁正常黏膜组织中的ERK1 / 2的蛋白水平无明显差异 ,p -ERK1 / 2明显增高 ,分别为癌旁正常黏膜组织的 1 30倍和 1 2 0倍 (t=1 7 2 3,t=1 8 1 8,P <0 0 1 )。p -ERK1 / 2在不同病理分期食管鳞癌中的表达无明显差异 ,而与分化程度有关 (P <0 0 1 )。结论　细胞外信号调节激酶的活化与食管鳞癌的分化有关 ,与食管癌病理分期无关 ,对食管鳞癌的发生可能起重要的促进作用     

ERK蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法：采用Westem blot技术和免疫组化方法，研究ERKI和ERK2蛋白在50例上皮性卵巢癌，10例卵巢良性肿瘤，10例正常卵巢组织中的表达。结果：ERK1和ERK2在卵巢癌中有过度表达，与正常卵巢及卵巢良性肿瘤相比，差异十分显著（P〈0．01）。Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅰ～Ⅱ期，差异显著（P〈0．05）。ERK1和ERK2与卵巢癌分化程度、病理类型无关。结论：ERK的过度表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

PTEN、ERK蛋白在舌鳞癌中的表达及意义

目的：研究PTEN、细胞外信号调节激酶（ERK）表达及与舌鳞状细胞癌（TSCC）临床病理参数的关系。方法：应用免疫组化SABC法分别检测PTEN、ERK蛋白在74例TSCC组织和15例癌旁正常黏膜中的表达。Spearman法和Mann—Whitney U法分析表达的相关性及与TSCC临床病理参数的关系。结果：TSCC组织中PTEN和ERK阳性表达率分别为66．2％和67、6％，表达呈负相关。PTEN、ERK表达水平与肿瘤病理分级、T分期无关，与淋巴结转移相关。结论：PTEN及ERK蛋白表达可作为TSCC预后的指标。     

维生素C对慢性铅暴露小鼠海马NMDAR表达的影响

目的探讨维生素C对慢性铅暴露小鼠海马N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)表达的影响。方法将健康昆明系小鼠随机分为染铅组(从出生第l天起饲以醋酸铅水溶液9.6mmol/L)、维生素C给药组(从出生第l天起饲以醋酸铅9.6mmol/L及维生素C 7.5mL/kg水溶液)及对照组(饲以不含铅的饮用水),每组9只。小鼠于出生21d后断颈处死,采静脉血检测血铅浓度,并同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其海马中NMDAR亚单位的表达水平。结果维生素C给药组小鼠的血铅浓度显著低于铅染组,但仍然高于对照组(P<0.01),维生素C给药组小鼠海马细胞的NMDAR亚单位ε1mRNA表达水平较染铅组明显提高(P<0.01),而ε2mRNA表达水平基本不变(P>0.05)。结论维生素C可降低染铅小鼠的血铅浓度,并可以影响小鼠海马NMDAR的表达水平,对海马细胞具有一定保护作用。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马ERK2及p-ERK表达变化的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆（VD）小鼠海马中细胞外信号调节激酶（ERK2、p-ERK）表达变化的影响。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。将小鼠随机分为对照组、模型组及药物组，药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。术后第29、30天，经跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试，用免疫组化方法观察各组小鼠海马CA1区ERK2及海马CA3区p-ERK的表达变化。结果盐酸多奈哌齐明显改善了VD小鼠学习、记忆成绩（P〈0．05）。模型组海马CA1区ERK2的阳性细胞数目较对照组，药物组减少（P〈0．05），阳性细胞平均光密度值亦较对照组、药物组降低（P〈0．05）；CA3区p-ERK阳性部位平均光密度值较对照组、药物组降低（P〈0．05）。而药物组与对照组间上述变化无显著性差异（P〉0．05）。结论ERK2的表达减少可能参与了VD的发病机制，盐酸多奈哌齐通过增加乙酰胆碱含量，后者作用于毒蕈碱乙酰胆碱受体（M受体）激活ERK（p-ERK），有助于改善学习和记忆功能。     

卵巢上皮性肿瘤组织中ERK的表达与活化

目的　探讨上皮性卵巢肿瘤组织中细胞外信号调节激酶 (ERK)的表达与活性及其与卵巢上皮性肿瘤临床病理因素的关系。方法　应用免疫组织化学技术 ,检测 4 9例卵巢上皮癌组织 ,2 6例良性卵巢上皮性肿瘤组织及 10例正常卵巢组织中ERK1/2蛋白和活性ERK1/2蛋白表达。结果　ERK1/2在卵巢上皮性癌组织中的表达阳性率为6 3% ,显著高于正常卵巢组织 (阴性 )和卵巢上皮性肿瘤组织 ( 2 7% ) (P <0 .0 1)。Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌组织中的ERK1/2蛋白表达水平高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌 (P <0 .0 5 )。活性ERK1/2在卵巢上皮性癌中的阳性表达率为 6 5 % ,明显高于卵巢良性肿瘤组织中活性ERK1/2的阳性表达率 ( 19% ,P <0 .0 1)。手术病理分期Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌组织的活性ERK1/2表达阳性率为 80 % ,Ⅰ～Ⅱ期为 13例中 3例 ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　ERK蛋白的过表达在卵巢上皮性癌患者的发生、发展中可能起重要促进作用 ,可作为卵巢上皮性癌的一项预后监测指标     

ERK信号通路在肺纤维化大鼠中的研究

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)在博莱霉素致肺纤维化大鼠模型中的表达及活化情况,从分子信号角度探讨肺间质纤维化的发病机制。方法:40只Wistar大鼠分成模型组和对照组,每组20只,于第7,14,28,42d每组处死5只,采用HE染色和Masson染色观察组织形态学的变化,采用免疫组化和免疫印迹Westernblot蛋白定量的方法分析ERK1/2,pERK在肺组织中的表达。结果:模型组大鼠肺组织中的ERK1/2,pERK的表达明显高于同期对照组,各时间段中以第7d表达最强。结论:ERK信号通路参与了肺间质纤维化的发病过程。     

蛋白激酶C-γ亚型在慢性染铅小鼠脑皮质中的表达

目的:探讨铅对小鼠脑皮质中蛋白激酶C-γ亚型(PKC-γ) 蛋白表达的影响.方法:小鼠出生第1天起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4、4.8、9.6 mmol/L;幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠相同浓度的含铅水;分别在第14,21,28,35天处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达.结果:慢性铅暴露对小鼠脑皮质PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组PKC-γ蛋白表达与相应时期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:铅扰乱PKC-γ蛋白正常表达.     

卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠ERK1/2通路的影响

目的 观察卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠心肌组织细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路的影响并探讨其可能的作用机制.方法 188只清洁级近交系4~6周龄雄性Balb/C小鼠随机分成4组.心肌炎对照组（C组）、美托洛尔干预组（M组）、卡维地洛干预组（K组）各60只,空白对照组（B组）8只做总体对照.观察各组小鼠各时间点（1、3、7和14d）的心肌组织病理学改变、血清cTnI水平、IL1β含量及心肌组织磷酸化ERK1/2含量的动态变化.结果 病程第1、3天,M组、K组心肌磷酸化ERK1/2水平低于C组（P＜0.01）,病程第14天,K组心肌磷酸化ERK1/2水平仍低于C组（P＜0.01）.病程第3、7天,M组、K组心肌组织炎症积分、血清cTnI和IL-1β水平低于C组（P＜0.05或0.01）,且K组上述水平下降更加显著（P＜0.01）.结论 卡维地洛可能通过β1、β2肾上腺素能受体双重阻滞作用,抑制ERK1/2信号通路活化,减轻病毒性心肌炎引起的心肌损伤.     

大鼠神经干细胞中MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号转导通路的实验研究

 目的应用丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性阻滞剂PD98059孵育大鼠神经干细胞(NSC),探讨MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路在NSC中的作用。方法体外分离、培养大鼠NSC,应用不同浓度的PD98059孵育NSC后进行WTS-8、Nestin,BrdU、β-tubulin-Ⅲ、Western
      blot检测。结果PD98059对NSC的存活、增殖和分化的影响呈剂量依赖性,在PD98059较高浓度时NSC的存活率明显下降(P<0.05),BrdU和β-tubulin-Ⅲ的阳性细胞数明显少于正常对照组(P<0.05)。PD98059阻断ERK表达的作用呈剂量依赖性。结论MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路对大鼠NSC的存活、增殖、分化起重要作用。     

大鼠蛛网膜下腔出血后海马区磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2表达与细胞自噬的关系

目的 探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SA H)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达与神经细胞自噬的关系. 方法 采用枕大池二次注血法制作SA H大鼠模型,将120只雄性SD大鼠采用数字表法分成假手术组(Sham)、SA H组、U0126(ERK1/2抑制剂)低剂量组及U0126高剂量组.低剂量和高剂量U0126组分别于造模前30 min侧脑室注射U01265和10 g/L.水迷宫行为学测试大鼠的行为学变化;光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化 ERK1/2(p-ERK1/2)和自噬标志蛋白(Beclin-1及LC3-Ⅱ)的表达水平. 结果 与Sham组比较,SA H组大鼠在72 h的逃避潜伏期时间明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且SA H组p-ERK1/2,Beclin-1及LC3-Ⅱ表达均增加,于24 h达高峰;与 SA H 组比较,低、高剂量 U0126组大鼠相应时间点的潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且p-ERK1/2,Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及存活神经细胞比率降低(P<0.05);与低剂量U0126组比较,高剂量U0126组的大鼠相应时间点的逃避潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),p-ERK1/2及存活神经细胞比率降低(P<0.05),但2组间的Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白比较差别均无统计学意义(P>0.05). 结论 大鼠SA H后海马区p-ERK1/2激活对神经细胞有保护作用,且这种保护作用与神经细胞自噬有关.     

Study on Effects of Extracts from Salvia Miltiorrhiza and Curcuma Longa in Inhibiting Phosphorylated Extracellular Signal Regulated Kinase Expression in Rat''''s Hepatic Stellate Cells

Objective: To study the effect of salvianolic acid B (SAB) and curcumin, the extracts of Salvia Miltiorrhiza and Curcuma Longa, on the proliferation and activation of hepatic stellate cell (HSC), and the extracellular signal regulated kinase (ERK) expression in it. Methods: Rat's HSC-T6 were cultured and treated by SAB or curcumin. The inhibitory effect on cell proliferation was determined by 3-(4, 5-dimthyl-2-2thiazoly)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) colorimetry, and the expression levels of a smooth actin (α-SMA), collagen typeⅠ, and ERK were determined by Western blot. Results: SAB and curcumin inhibited the proliferation and activation of rat's HSC-T6 in dose-dependent fashion and significantly reduced the expression level ofα-SMA (P<0.01). Curcumin significantly reduced the expression of collagen typeⅠ(P<0.05). Both SAB and curcumin showed insignificant effect on the ERK expression level, but they could significantly reduce the level of phosphorylated-ERK expression, showing significant difference as compared with that in the control group (P<0.01 and P<0.05 respectively). Conclusion: SAB and curcumin could significantly inhibit the proliferation, activation of HSC, and the production of typeⅠcollagen in HSC, the mechanism may be associated with their inhibition on ERK phosphorylation.     

新藤黄酸与细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的研究新藤黄酸(Gambogenic acid,GNA)与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulatedkinase,ERK)特异性抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059处理肺腺癌A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;甲基噻唑基四唑(methyl th-iazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化;蛋白印迹法(Westernblot)检测ERK、p-ERK蛋白的表达。结果 MTT法结果表明GNA在2.5μmol/L对肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用;与PD98059合用24h,GNA的抑制作用更加明显。倒置显微镜观察显示GNA作用肺腺癌A549细胞24h后,细胞固缩变圆,体积变小,部分细胞呈半贴壁状态;GNA和抑制剂PD98059合用后,多数细胞固缩变圆,脱落,并悬浮于培养液中;少数细胞体积增大、肿胀、破裂呈坏死状。流式细胞仪检测结果表明,20μmol/L PD98059+2.5μmol/L GNA共同作用于A549细胞24h后,与GNA 2.5μmol/L组比较细胞内活性氧生成增加。Western blot法检测表明,PD98059和GNA联合作用A549细胞24h后,p-ERK蛋白表达与GNA组比较显著降低。结论 GNA能诱导肺腺癌A549细胞凋亡,联合应用ERK抑制剂PD98059后可减少ERK蛋白的活化,增加肺腺癌A549细胞的凋亡;结果初步表明GNA诱导肺腺癌A549细胞的凋亡可能与调节ERK信号通路有关。     

急、慢性染铅对cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的探讨急、慢性染铅对大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法急性染铅实验:取正常30d大鼠海马脑片培养,分别用含20μmol·L-1醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,作为急性染铅标本。慢性染铅实验:孕鼠在体染铅,取新生大鼠海马作为慢性染铅标本。用蛋白质免疫印迹法测定标本CREB的活性(即磷酸化CREB)和总量CREB的含量。结果急性染铅实验:海马脑片培养中,染铅组CREB的活性随时间延长而下降,染铅组和对照组总量CREB含量均无显著性变化。慢性染铅实验:总量CREB的含量无显著性变化。结论急性染铅引起CREB的活性下降,对总量CREB含量没有显著影响。慢性染铅总量CREB含量无显著性变化。     

铅暴露对大鼠大脑皮质和海马NOS的影响

目的 观察铅暴露对大鼠海马和大脑皮质一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨铅暴露对中枢神经系统损害的机制.方法 4周龄Wistar雄性大鼠,按体重用45 mg/kg醋酸铅灌胃30天;第30天时测定大鼠海马和大脑皮质总NOS和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,对大鼠脑组织冰冻切片进行β-NADPH染色,并对海马各区nNOS阳性神经元进行数量统计分析.结果 与空白对照组大鼠比较,染铅组大鼠海马和大脑皮质总NOS活性明显降低,而iNOS活性均升高,海马CA1和齿状回nNOS阳性神经元数量减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 铅暴露可以使大鼠海马和大脑皮质总NOS活性降低,iNOS活性升高,海马nNOS阳性神经元数量减少.     

针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响

目的:观察针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响。方法:将30只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、针刺组各10只。模型对照组以及针刺组给予Bannister's颈动脉引流法以建立大鼠脑缺血的动物模型。针刺组造模7 d后,在大鼠保持清醒的状况下,固定于自制鼠架上,予以百会穴平刺2 mm,捻转1 min增强针感,留针20 min;水沟穴点刺1 mm,捻转1 min增强针感,不留针;每日1次,每周6次,2周为1个疗程,共治疗1个疗程。其余两组不予以任何干预措施,至实验结束。比较各组大鼠情况、神经功能缺损量表评分、海马脑细胞凋亡百分率、椎体细胞数、血管内生长因子表达水平、血管密度、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-Jun N-ternuial kinase,p-JNK)以及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extacellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)蛋白表达比较。结果:治疗后,与模型对照组比较,针刺组治疗后7 d、治疗后14 d的神经功能缺损量表分数较低;与治疗后7 d比较,治疗后14 d针刺组神经功能缺损量表评分较低(P0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组和针刺组海马神经细胞凋亡率较高,锥体细胞存活数较低(P0.05);与模型对照组比较,针刺组海马神经细胞凋亡率较低,锥体细胞存活数较高(P0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达以及血管密度较低(P0.05);与模型对照组比较,针刺组VEGF蛋白表达以及血管密度较高(P0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达较高(P0.05);与模型对照组比较,针刺组p-JNK蛋白表达较低,p-ERK1/2蛋白表达较高(P0.05)。结论:针刺能够上调脑缺血大鼠VEGF表达水平,下调海马神经细胞凋亡率,提高促进组织脑血管形成,调节p-JNK以及p-ERK1/2表达水平,从而减轻脑损害程度,显著促进脑缺血后神经功能修复,这可能是针刺治疗脑缺血损伤的机制之一。     

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

机械应力下成骨细胞外信号调节激酶ERK1/2的早期变化

目的:观察体外培养的成骨样细胞在不同机械应力下细胞外信号调节激酶ERK1/2的表达变化.方法:采用四点弯曲细胞力学加载装置系统,对人成骨样细胞进行加力:频率0.5 Hz,加力板变形量4000μstrain,按5,15,30 min和1h不同时间段,使细胞发生单轴牵张和压缩应变.运用Western Blot检测不同方向、不同作用时间的应力应变下细胞外信号调节激酶ERK1/2所产生的变化.结果:在4000μstrain的周期性应力作用时,细胞外信号调节激酶ERK1/2在5 min内被迅速激活,磷酸化程度大幅升高,牵张及压缩应力均有类似表现;1 h左右恢复至基态水平.牵张应力所引发的ERK磷酸化较压缩应力更强,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论:较大的应力应变可以在早期激活成骨细胞内的MAPK/ERK信号转导通路,牵张应力所产生的效应较压缩应力更为明显,机械应力参与了细胞外信号调节激酶的活化.