反义寡核苷酸下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因表达的研究

目的 :研究反义硫代磷酸寡核苷酸 (asODN)抑制人神经母细胞瘤细胞系S10 0A4基因表达的作用。方法 :将S10 0A4反义寡核苷酸通过脂质体转染人神经母细胞瘤细胞系LA N 6和SK N SH ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法分析不同浓度、不同作用时间asODN对两细胞株中S10 0A4mRNA表达水平的影响。结果 :asODN明显抑制S10 0A4mR NA的表达 ,其抑制作用随浓度增加逐渐增强 ,0 9μmol/L的asODN可使 2株细胞S10 0A4mRNA相对丰度与对照组相比下调达 3 0 %以上 ,P <0 0 5 ;asODN的抑制作用 2 4h达高峰 ,以后逐渐降低。结论 :asODN能够下调神经母细胞瘤细胞S10 0A4基因的表达 ,为进一步研究S10 0A4在NB细胞中的作用奠定了基础     

反义PKCα对CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

 目的　观察反义PKCα对鼻咽癌CNE 2Z细胞生长及端粒酶活性的影响。方法　脂质体转染反义PKCα ,MTT法检测细胞生长 ,TRAP ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果　CNE 2Z细胞端粒酶活性为阳性 ,转染反义PKCα可使细胞生长指数 (P <0 .0 1)及端粒酶活性 (P <0 .0 5 )降低。结论　反义PKCα可以抑制CNE 2Z细胞的生长及端粒酶活性 ,PKCα可能通过调控端粒酶活性影响CNE 2Z细胞的生长。     

银杏叶提取物EGb761对TNF-α诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的　初步研究银杏叶提取物EGb761对重组人肿瘤坏死因子- α(rhTNF- α)诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法　采用MTT法观察EGb761对HeLa细胞生长的影响;细胞凋亡实验分5组,即空白对照组,rhTNF -α对照组(10 0 μg/L ) ,EGb761低浓度组[rhTNF- α(10 0 μg/L) +EGb761(10mg/L) ] ,EGb761中浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L ) +EGb761(2 0mg/L ) ] ,EGb761高浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L) +EGb761(4 0mg/L) ] ,采用流式细胞术和Hoechst3 3 2 5 8荧光染色检测凋亡。结果　EGb761在5 .0～80 .0mg/L终浓度范围内对HeLa细胞生长无明显影响;流式细胞术测定各组亚倍体细胞峰积分百分率(% )为:空白对照组(5 .3 5±2 .2 ) ,rhTNF- α对照组(3 7.8±6.1) ,EGb761低浓度组(19.2±3 .4) ,EGb761中浓度组(16.5±5 .7)和EGb761高浓度组(11.3±3 .9) ;荧光染色检测各组凋亡百分率(% ) :对照组(4 .2 3±2 .0 )、rhTNF α对照组(2 7.8±4.3 )、EGb761低浓度组(14 .9±3 .4)、EGb761中浓度组(12 .1±3 .7)和EGb761高浓度组(9.61±2 .3 ) ;结果显示,EGb761在10～40mg/L终浓度范围内对rhTNF α诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系。结论　EGb761能有效抑制rhTNF- α诱导的HeLa细胞凋亡。     

反义寡核苷酸下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因表达的研究

目的：研究反义硫代磷酸寡核苷酸(asODN)抑制人神经母细胞瘤细胞系S100A4基因表达的作用。方法：将S100A4反义寡核苷酸通过脂质体转染人神经母细胞瘤细胞系LA-N-6和SK-N-SH。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析不同浓度、不同作用时间asODN对两细胞株中S100A4mR-NA表达水平的影响。结果：asODN明显抑制s100A4 mRNA的表达。其抑制作用随浓度增加逐渐增强，0．9μmol／L的asODN可使2株细胞S100A4 mRNA相对丰度与对照组相比下调达30％以上。P＜O．05；asODN的抑制作用24h达高峰，以后逐渐降低。结论：asODN能够下调神经母细胞瘤细胞S100A4基因的表达。为进一步研究S100A4在NB细胞中的作用奠定了基础。     

神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究外源性神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和VEGF表达的影响.方法 不同浓度GM3干预HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞学技术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术检测细胞VEGF mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞VEGF蛋白水平.结果 (1) GM3浓度分别为2、10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞生长抑制率分别为9.8％、32.9％、50.7％和78.6％,半数抑制浓度(IC50)为49.8 μmol/L.(2) GM3浓度分别为10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞凋亡率分别为(4.9±0.4)％、(15.1±0.3)％、(24.4±0.7)％.(3)当GM3浓度高于10 μmol/L时,HeLa细胞VEGF mRNA表达水平以及VEGF蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05).结论 外源性神经节苷脂GM3能呈浓度依赖性抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡,下调HeLa VEGF mRNA水平和蛋白水平,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.     

蛋白激酶C-α与KBV200细胞多药耐药相关性的初步研究

目的　探讨蛋白激酶C -α(PKC)与KBV 2 0 0肿瘤细胞多药耐药 (MDR )的关系及其机制。方法　应用3 2 P掺入法检测 2株细胞的PKC活性 ;用Westernblot法检测PKC -α在耐药株KBV 2 0 0及敏感株KB的表达及亚细胞分布 ;流式细胞仪检测PKC -α的荧光强度。结果　KBV 2 0 0细胞的PKC活性较KB细胞明显升高 ,且膜组分PKC活性所占总活性的百分率升高 ;PKC-α亚型的表达选择性升高 ;流式细胞仪检测发现KBV 2 0 0细胞的PKC -α的荧光强度 ( 5 .3 4± 0 .5 6)显著高于KB细胞PKC -α的荧光强度 ( 2 .0 7± 0 .2 1) ,P <0 .0 1。结论　PKC -α与KBV 2 0 0细胞株的MDR表型关系密切 ,PKC -α可能在KBV 2 0 0细胞的MDR表型中起重要作用。     

光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的:探讨光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:以0、1、2.5、5、10和20 μmol/L光甘草定作用于体外培养的Hela细胞24 h后,采用细胞计数（CCK-8)法检测细胞存活率并计算出光甘草定的半抑制浓度。将体外培养的Hela细胞分别以0、2.5和5 μmol/L光甘草定处理后,采用Transwell小室检测细胞侵袭变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和生存素（Survivin）的表达情况。结果:与对照（0 μmol/L）组相比,1、2.5、5、10和20 μmol/L 光甘草定处理组细胞存活率均明显降低（P<0.05）,且呈浓度依赖性;同时,光甘草定对Hela细胞的半抑制浓度为4.56 μmol/L。与对照（0 μmol/L）组相比,2.5和5 μmol/L光甘草定处理组中侵袭细胞数和细胞在S期与G2/M期的百分比以及细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1、MMP-2、Survivin蛋白的表达水平均明显减少,而细胞凋亡率和细胞在G0/G1期百分比明显升高（P<0.05）,且5 μmol/L光甘草定处理组细胞的变化更为显著。结论:光甘草定可抑制Hela细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制

目的探讨 LPS 诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与 PKC 相关的分子机制。方法两种巨噬细胞系 P388D1和 RAW264.7用 LPS 刺激、或先用 PMA 长期处理下调 PKC 表达、或用 L-NAME 阻断 iNOS 后再以LPS 刺激,检测其杀伤肿瘤细胞系 P815(MTT 法)及分泌 IL-1,TNF-α(ELISA 法)和 NO(Griess 试剂)的作用;并用 Western blot 法检测 PMA 长期作用后两株细胞系中 PKC 亚型的表达。结果 LPS 刺激的 RAW264.7细胞有杀伤靶细胞的功能,而 P388D1几乎没有杀伤作用。PMA 预处理(1μg/mL,24h)后可明显抑制 LPS 诱导的杀瘤作用。因上述结果提示 PKC 在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用,比较了 PMA 处理后两株细胞 PKC 亚型的表达:Western blot 结果显示,在所检测的 PKCα,β1,β2,δ及ε5种亚型中,在 P388D1细胞均有表达,而在 RAW264.7细胞仅有 PKCα,PKCβ1,PKCδ表达;1μg/mL PMA 作用24h 后明显下调了 RAW264.7细胞 PKCα,PKCβ1和PKCδ的表达,在 P388D1则有 PKCα、PKCδ和 PKCε下调,而 PKCβ1和 PKCβ2不被下调。结合 LPS 诱导的与 PKC 活化有关的 IL-1、TNF-α及 NO 的产生,发现在 P388D1细胞几乎不产生 NO,而在 RAW264.7细胞,NO 合成酶抑制剂 L-NAME 不仅能阻断 LPS 诱导的 NO 的产生,而且明显抑制 LPS 诱导的杀瘤活性。结论 LPS 诱导的巨噬细胞杀瘤作用主要是 NO 的杀伤作用来完成而非巨噬细胞直接与瘤细胞作用所致;而该作用与 PKCβ活性密切相关。     

两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制

目的 探讨LPS诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与PKC相关的分子机制。方法 两种巨噬细胞系P388D1和RAW264．7用LPS刺激、或先用PMA长期处理下调PKC表达、或用L-NAME阻断iNOS后再以LPS刺激,检测其杀伤肿瘤细胞系P815(MTT法)及分泌IL-1,TNF-α(ELISA法)和NO(Griess试剂)的作用;并用Western blot法检测PMA长期作用后两株细胞系中PKC亚型的表达。结果 LPS刺激的RAW264．7细胞有杀伤靶细胞的功能,而P388D1几乎没有杀伤作用。PMA预处理(1μg／mL,24h)后可明显抑制LPS诱导的杀瘤作用。因上述结果提示PKC在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用,比较了PMA处理后两株细胞PKC亚型的表达：Western blot结果显示,在所检测的PKCα,β1,β2,δ及ε5种亚型中,在P388D1细胞均有表达,而在RAW264．7细胞仅有PKcd,PKCα,PKCβ1,PKCδ表达;1μg/mL PMA作用24h后明显下调了RAW264．7细胞PKCα,PKCβ1和PKCδ的表达,在P388D1则有PKCα、PKCδ和PKCε下调,而PKCβ1和PKCβ2不被下调。结合LPS诱导的与PKC活化有关的IL-1、TNF-α及NO的产生,发现在P388D1细胞几乎不产生NO,而在RAW264．7细胞,NO合成酶抑制剂L-NAME不仅能阻断LPS诱导的NO的产生,而且明显抑制LPS诱导的杀瘤活性。结论 LPS诱导的巨噬细胞杀瘤作用主要是NO的杀伤作用来完成而非巨噬细胞直接与瘤细胞作用所致;而该作用与PKCβ活性密切相关。     

反义ST6GalⅠ基因对HeLa细胞黏附和侵袭力的影响

目的研究人α2,6-唾液酸转移酶（ST6GalⅠ）反义寡核苷酸（ASODN）转染对ST6GalⅠ高表达的官颈癌HeLa细胞的黏附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞。实验设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和ASODN组。应用RT-PCR测定细胞中ST6GalⅠ mRNA水平,流式细胞术检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrix^TM细胞黏附试剂盒和细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质（ECM）的黏附与侵袭力。结果HeLa细胞被转染48h后,与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中ST6GalⅠ mRNA表达明显下调（P〈0．01）;与3个对照组相比,ASODN组细胞表面以,6-唾液酸的含量明显降低,同时细胞对ECM的黏附和侵袭力均降低（均P〈0．05）。结论靶向ST6GalⅠ的ASODN能下调HeLa细胞ST6GalⅠ基因的表达,降低细胞表面α2,6-唾液酸含量,继而降低细胞对ECM的黏附和侵袭力。     

蛋白激酶C的下调与KBV200细胞多药耐药性的关系

目的　探讨蛋白激酶C (PKC)在肿瘤多药耐药 (MDR)中的作用。方法　3 2 P掺入法测定PKC的活性 ;Westernblot法检测KBV2 0 0细胞株PKC亚型的表达和亚细胞分布 ;实验组用十字孢碱 (SP)预孵育KBV2 0 0细胞 ;MTT法检测耐药株KBV2 0 0细胞的耐药性。结果　SP可下调膜组分和浆组分的PKC活性及总活性 ;使PKCα膜组分和浆组分的表达均降低 ,PKCβ的膜组分消失 ,浆组分PKCβ的表达稍增强 ,PKCε的膜组分和浆组分表达无变化 ;SP可降低VCR、ADR对KBV2 0 0细胞的IC50 值 (P <0 0 1)。结论　SP使KBV2 0 0细胞耐药性降低 ,可能与下调PKC有关。     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞的抑制作用.方法Hela细胞分以下6组培养:Hela细胞对照组(A),仅用常规培养液培养Opitin-MEM/MEM;正义组(B):加入正义COX-2核苷酸至终浓度10μmol/l+lipofectin+Opitin-MEM;脂质体组(C)lipofectin+Opitin-MEM.每组设4个复孔;反义寡核苷酸转染组(D)设置3个浓度亚组,分别转染AS-ODNs至终浓度为5 μmol/l(D1)、10μmol/1(D2)、15 μmol/l(D3);在转染后24、48、72、96、120小时采用MTT方法检测各组细胞增殖状态,根据测得的OD值画细胞生长曲线.结果(1)与其他组相比,经AS-ODNs的细胞形态和生长状态都有明显改变,可见细胞生长状态差,增长缓慢该组细胞OD值与其它组比较,差异显著(P＜0.01);(2)根据各组细胞的OD值,绘制细胞生长曲线,可见对照组、正义组、脂质体组生长曲线呈明显上升的趋势;AS-ODNs作用的三个亚组则呈下降趋势,且随浓度的增高,细胞生长曲线下降幅度增大,其抑制效果与作用时间有关,转染后48～72小时抑制效果最强,如果不行AS-ODNs补充,120小时抑制效果基本消失.结论COX-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用.     

垂体腺瘤的血管生成、c-myc表达与侵袭性的相关意义

目的　探讨微血管密度 (microvesseldensity,MVD)、c -myc表达与肿瘤侵袭性的关系。方法　应用EnVision二步法免疫组化技术检测 5 8例垂体腺瘤的MVD、c-myc表达情况 ;分为侵袭组和非侵袭组进行统计学分析 ,并对MVD与c-myc的表达强度进行相关性分析。结果侵袭性垂体腺瘤MVD为 6 .78± 1.6 7;非侵袭性垂体腺瘤MVD为 3.72± 1.0 2 ;差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。各型垂体腺瘤中c -myc均有表达 ,总阳性率为 37.9% ;其中侵袭性垂体腺瘤的阳性率为 5 5 .5 6 % ,非侵袭性垂体腺瘤的阳性率为 2 2 .5 8%。差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,侵袭性垂体腺瘤c -myc高表达。直线相关分析显示 ,c -myc表达强度与MVD呈显著正相关 (r=0 .5 5 4 ,P <0 .0 1)。结论　侵袭性垂体腺瘤MVD增高、c -myc高表达 ,是反映垂体瘤侵袭能力及预后的有用指标。侵袭性垂体腺瘤MVD与c -myc表达强度密切相关 ,提示c -myc表达强度与垂体腺瘤MVD在判定垂体腺瘤侵袭性方面有意义     

β1整合素反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞粘附侵袭的实验研究

目的　观察β1整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人卵巢癌细胞系CAOV3粘附侵袭的抑制作用。方法　合成的β1整合素反义寡核苷酸 (asODN)用脂质体转染入CAOV3细胞中 ,通过RT PCR、流式细胞术、MTT法、聚碳酸酯膜侵袭试验测定 β1整合素mRNA和细胞表面β1整合素蛋白表达及癌细胞粘附力、侵袭力的变化。结果　asODN组β1整合素 / β actinmRNA辉度值比值为 (0 .4 4 9± 0 .0 2 9) ,与对照组为 (0 .6 0 8± 0 .0 10 )相比 ,显著下降 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测asODN组平均荧光指数为(2 .4 30± 0 .10 4 ) ,较对照组 (6 .15 6± 0 .0 77)明显下降 (P <0 .0 1) ;asODN组粘附力为 0 .0 86± 0 .0 0 6 ,较对照组 (0 .137± 0 .0 19)显著下降 (P <0 .0 1)。asODN组穿透聚碳酸酯膜的细胞数为 16± 2 ,较对照组 (32± 4 )亦有显著差别 (P <0 .0 1)。而随机序列寡核苷酸 (rODN)组上述各指标较对照组无明显变化。结论　CAOV3细胞 β1整合素的表达与粘附侵袭能力密切相关 ,asODN能有效抑制CAOV3细胞 β1整合素基因的表达 ,从而抑制蛋白质合成 ,降低其粘附侵袭性。     

As2O3和全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的 探讨As2O3和全反式维甲酸(ATRA)对人宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响及其机制.方法 采用不同浓度As2O3和ATRA分别作用于人官颈癌HeLa细胞,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法检测细胞中N-myc下游调节基因1(NDRG1)mRNA和蛋白的表达.结果 As2O3和ATRA能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,12.5 μmol/L As2O3处理HeLa细胞48 h的抑制率为(36.5±1.2)%,明显高于同时间低浓度组;1 × 10-5mol/LATRA处理HeLa细胞48 h的抑制率为(23.5±3.1)%,明显高于同时间低浓度组,并且同浓度的药物处理72 h的抑制率高于处理48 h的抑制率,呈浓度和时间依赖性(P<0.05).As2O3和ATRA能够从分子水平和蛋白水平上调宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因的表达,12.5 μmol/L As2O3和5×10-6mol/L ATRA处理HeLa细胞后,NDRG1 mRNA表达量分别为0.942±0.169和0.894±0.138,明显高于低浓度组的表达量;12.5 μmol/LAs2O3和5×10-6 mol/LATRA处理HeLa细胞后,NDRG1蛋白表达量分别为1.220±0.202和1.233±0.103,明显高于低浓度组的蛋白表达量.结论 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,其抑制作用与NDRG1基因的表达上调相关.

Abstract：

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As2O3 ) and all-trans retinoic acid ( ATRA ) on human cervical carcinoma HeLa cell line.Methods HeLa cells were treated with As2O3 and ATRA.The cell proliferation was evaluated by MTT assay.The expressions of NDRG-1 protein and mRNA were determined by Western blot and RT-PCR analysis.Results MTT assay showed that As2O3 and ATRA inhibited the growth of human cervical carcinoma HeLa cells in vitro in a dose- and time-dependent manner.Western blot and RT-PCR techniques showed that As2O3 and ATRA down-regulated the expressions of NDRG-1 protein and mRNA (P < 0.05 ) .Conclusion As2O3 and ATRA can significantly inhibit the growth and proliferation of HeLa cells.The reason of these changes may be related with the down-regulation of expression of NDRG-1.     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

对MDR肿瘤细胞KBV200的PKC-α亚型cDNA克隆序列的研究

目的 :探讨口腔癌耐药细胞 KBV2 0 0中 ,蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC) α亚型的 c DNA序列与肿瘤多药耐药性 (m ultidrug resistance,MDR)的关系。方法 :应用 Western blotting法检测 PKC- α在 2株细胞中的表达 ,RT- PCR方法获得 2株细胞的 PKC- α亚型的 c DNA片断 ,并克隆到 T载体上 ,转化大肠杆菌并测序。结果 :KBV2 0 0细胞中的 PKC- α表达高于在药敏细胞株 KB中的表达 ,同时发现 KBV2 0 0的 PKC- α亚型的 c DNA序列中 ,第 5 4位碱基发生点突变 ,但并未改变氨基酸序列。结论 :PKC- α与 KBV2 0 0细胞的 MDR表型关系密切 ,引起 MDR的外界因素可能通过改变PKC- α的基因序列来提高这一同工酶的表达从而引起了 MDR现象     

沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制

目的:探讨沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制。方法:沙利度胺（50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml）处理人宫颈癌Hela细胞24 h后,运用CCK-8法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹法检测Cyclin E、p53、p-p53和GAPDH蛋白表达水平。结果:沙利度胺(50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml)作用Hela细胞24 h后,细胞活力显著降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml沙利度胺作用24 h后,Hela细胞G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数显著减少(P<0.05)。此外,沙利度胺作用Hela细胞24 h可明显下调Cyclin E蛋白的表达(P<0.05)。沙利度胺处理Hela细胞24 h后,p-p53/p53比值明显增大(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过促进p53蛋白的活化从而抑制人宫颈癌细胞周期进程。     

辛伐他汀通过调控Chk1基因的表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的:探讨辛伐他汀（simvastatin,SVA）通过调控细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase 1,Chk1）基因表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,采用不同浓度（3.25 μmol/L、6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L)SVA处理细胞,以0 μmol/L SVA为空白组（Con组）。采用MTT法检测SVA对细胞的增殖抑制率,筛选SVA最适浓度（SVA组）用于后续研究。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用2、4、6、8 Gy剂量X射线照射细胞。将Chk1阴性对照质粒、Chk1 siRNA分别转染至Hela细胞,分别命名为si-NC、si-Chk1组;重组pcDNA 3.1/Chk1基因过表达质粒及空载体对照质粒分转染至SVA组细胞中,分别命名为SVA+pcDNA-Chk1组、SVA+pcDNA组。采用qRT-PCR与Western blot法检测各组细胞中Chk1 mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。结果:随着SVA浓度的增加Hela细胞增殖抑制率明显升高且呈剂量依赖性,SVA浓度为12.5 μmol/L时Hela细胞增殖抑制率约为50%,以此用作后续实验研究。SVA组Hela细胞凋亡率显著高于Con组,且不同剂量X射线照射后Hela细胞存活分数明显降低（P＜0.05）;SVA处理Hela细胞后可显著降低Chk1 mRNA及蛋白表达水平（P＜0.05）;si-Chk1组Hela细胞中Chk1蛋白表达水平及细胞存活分数均显著低于si-NC组（P＜0.05）,细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高（P＜0.05）;SVA+pcDNA-Chk1组Hela细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均显著低于SVA+pcDNA组（P＜0.05）,细胞存活分数显著升高（P＜0.05）。结论:SVA可通过下调Chk1基因表达进而抑制宫颈癌细胞增殖并促使细胞凋亡,同时能够增强宫颈癌细胞放疗敏感性。     

雷帕霉素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测分别以不同浓度雷帕霉素处理的体外培养人宫颈癌HeLa细胞的抑制率,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测各组细胞HIF-1 α、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性;随雷帕霉素浓度增加细胞内HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均呈下调趋势.结论 雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有抑制作用并呈剂量依赖性,雷帕霉素具有明显下调HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达的作用.