蛋白质组学研究中双向电泳的样品制备

蛋白质组学是目前生命科学研究中的一个热点,而双向电泳技术是现阶段大多数蛋白质组学研究中分离蛋白质混合物时所采用的主要技术.在双向电泳技术中,样品制备是整个分离过程中的关键一步,对实验结果将起到决定性作用.文章介绍了双向电泳技术的样品来源,并重点对样品制备过程一般包括的步骤,如样品匀质化、蛋白质溶解、干扰物去除和蛋白质富集等进行了详细说明.随着样品制备技术的发展,双向电泳技术将在蛋白质组学的研究中发挥更为显著的作用.     

人PIWIL3特异性抗体的制备和PIWIL3蛋白在肿瘤组织中的分布

目的:制备人Argonaute家族中PIWIL3蛋白的特异性抗体,并检测其在人多种肿瘤组织中的表达和分布.方法:根据序列同源性和多肽免疫性,利用内部多肽选择数据库选择最佳的多肽免疫原合成多肽,再与KLH结合用于免疫;免疫所得的抗血清经多肽包被的凝胶进行亲和层析纯化,酶联免疫吸附分析技术(ELISA)检测纯化后抗体与多肽的结合能力,Western blot检测抗体对相应蛋白的结合能力.人肿瘤组织芯片检测该蛋白在多种肿瘤组织的表达和定位.结果:成功制备特异性人PIWIL3蛋白多克隆抗体.ELISA和Westernblot检测均表明该抗体具有很好的结合能力.肿瘤组织芯片检测到PIWIL3蛋白在人星形细胞神经胶质瘤和脑脊膜瘤胞质中表达.结论:应用内部多肽选择数据库可以得到最佳的多肽免疫原,以区分亚家族中其他有高度序列同源性的蛋白,成功制备出纯度和结合能力均较好的特异性人PIWIL3抗体,对研究人类特定肿瘤的发病具有潜在的应用价值.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

目的 建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性.方法 采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦(IEF)为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化.结果 两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数(678±32)个,非还原烷基化蛋白质斑点数(358±26)个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰.结论 还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用.     

单克隆抗体亲和层析一步纯化重组人生长激素

单克隆抗体亲和层析技术可用来从体液、组织抽提液、细胞培养液中,特别是从基因工程菌体破碎液等复杂组成物中分离出微量蛋白质和多肽.由于其特异性高,操作简便而迅速,在高价值蛋白质和治疗用多肽的下游处理过程中,作为一种良好的分离纯化工具,有较广泛的适用性.本文运用该技术从人生长激素(hGH)基因工程菌发酵破碎液中一步分离制备高纯度并具有生物活性的重组hGH.     

噬菌体肽库的免疫学应用研究

噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,将外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性.本文总结了这一技术及其相关展示系统在蛋白质相互作用的研究、抗体及疫苗的制备、多肽药物的研制等方面的应用潜力和独特的优点.     

蛋白质和多肽类药物的口服给药

由于蛋白质和多肽类药物的口服给药具有很好的发展前景，因此如何实现该类药物的有效输送一直是药剂学长期追求的目标。其中渗透性、稳定性及在胃肠内的转运时间等不仅是影响该类药物口服吸收的因素，同时分子大小也是临床发挥作用的最大障碍。本文主要从处方组成、包囊技术、大分子复合物和化学修饰四种改善蛋白质和多肽类药物在胃肠道吸收状况的基本方法介绍蛋白质和多肽类药物近期在临床中的应用状况。     

表面展示技术研究进展

表面展示技术（ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｌｏｇｅ）是近年来发展起来的一种将外源肽或蛋白质与噬菌体或细菌表面特定量融合并展示于其表面，构建蛋白质或多肽文库，并从中筛选所感兴趣的特异性蛋白质，多肽或抗体的基因工程高新技术，这一技术在抗体的制备，蛋白质间相互作用的研究，活菌苗和生物催化剂发展等方面有其广泛的应用潜力和独特的优点。     

制备型高效液相色谱在生物医药制品领域的应用

 制备型高效液相色谱（preparative high performance liquid chromatography，Prep-HPLC）是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法。应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法，因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用^[1-3]。本文就近年来 Prep-HPLC 方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述。 1 Prep-HPLC 在蛋白质和多肽分离制备中的应用 蛋白质和肽类药物活性强，生物功能明确，特异性高，有利于临床应用，已成为医药产业中的一大类重要产品。但这些产品无论是来自于生物体内还是由化学合成，往往都带有复杂的混合成分，而总目的蛋白或肽类的丰度又低，给分离纯化带来困难，需要多种方法联合使用以获得纯度满意的产品。在此过程中，Prep-HPLC 通常在分离的最后阶段被用作获得高纯度产品的关键方法^[4]。......     

噬菌体展示抗体文库的研究进展

噬菌体展示技术 (Phagedisplaytechniques)兴于 2 0世纪 90年代初。该技术能将目的基因表达的多肽或蛋白质展示在噬菌体表面 ,并保持目的蛋白 (或多肽 )相对独立的空间结构和生物学活性。噬菌体展示技术以其将基因 (DNA信息 )与表型(蛋白表达 )直接相连接的表面筛选优势 ,简化了抗体库构建及单克隆抗体 (mAb)的筛选过程 ,在基因工程抗体制备领域有广泛应用。本文简要介绍了用噬菌体展示技术制备抗体文库的过程 ,重点介绍了在制备过程中一些改进措施以及新技术、新发展。1　噬菌体展示技术简介噬菌体展示技术是一种用于蛋白质筛选的新技术 …     

免疫去除血清高丰度蛋白对组织蛋白质组鉴定的影响

目的分析去除组织中血清高丰度蛋白对组织蛋白质组鉴定的影响。方法用去除12种血清高丰度蛋白抗体柱处理人甲状腺和垂体组织样品,所得到的低丰度蛋白和原样分别进行液质联用分析,分别进行多肽和蛋白质水平的定性定量分析。结果甲状腺和垂体组织中血清高丰度蛋白分别被除去了92.11%±12.87%和78%±25%。所鉴定到的多肽和蛋白与原样品相比,甲状腺组织的非冗余性多肽提高了70%、蛋白数目提高了16.5%,垂体的非冗余性多肽提高了21.9%,鉴定蛋白数目无明显变化。结论去除组织中的血清高丰度蛋白法可以显著的提高肽段和蛋白的鉴定效率,更适用于血管密集的样品。