不同浓度四氯化碳复合法诱导家兔肝纤维化模型的建立

目的 寻找到适宜做影像学和血清学研究的动物家兔肝纤维化模型建市方法.方法 分别用体积比为5%四氯化碳(CCl4)油溶液和纯CCl4,按0.1 ml/kg剂量每周1次腹腔注射,并辅以5%浓度的乙醇作为饮水,诱导家兔肝纤维化形成,并于注射后6、8、10、12周分组处夕匕家兔取其肝脏进行病理学检查.结果 家兔的死亡多发生在4周之内,6周之后趋于稳定.5%CCl4浓度组家兔死亡率为60%,纯CCl4组死亡率为25%.结论 长期给予CCl4可导致家兔的肝纤维化形成,采用腹腔注射纯CCI4,同时辅以5%浓度的乙醇作为饮水的复合法造模,家兔死亡率低,成模率高.     

四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立

家兔血容量大 ,肝脏大小适中 ,其肝纤维化模型易于生化及影像学观察。1　模型制作新西兰家兔 4 0只 ,随机分为 4组。 3个实验组按 0 .10ml kg剂量 ,腹腔注射四氯化碳 ,5d一次 ,分别持续 30d、6 0d、90d。对照组按同样剂量注射生理盐水 ,持续 90d。2　实验结果2 .1　肝脏超声学改变　 30d、6 0d各组间差异无显著性。 90d与对照组比较回声增强、光点增粗 ,下腔静脉周围约 1cm范围内肝组织回声减低 ,可检测到肝短静脉 ,门静脉内径无明显变化 ,血流阻力相对增加 (p <0 .5 ) ,阻力指数 (RI)约为0 .89± 0 .0 9。2 .2　肝脏病理学改变　大体观察 …     

四氯化碳和硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化的对比研究

目的：采用四氯化碳（CCL4）和硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA）两种试剂分别制备大鼠肝纤维化模型,探讨两种方法的优缺点及适用范围.方法：将60只SD大鼠随机分为4组,用CCL4和TAA制备肝纤维化模型并分别设立对照组.观察大鼠一般情况并于第28,56日称体质量,测定血清谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）以及透明质酸（HA）和IV型胶原（CIV）、肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）,取肝组织进行HE和Masson染色,分别观察肝组织的损伤程度和胶原增生的情况.结果：第28日,两模型组的各项指标与其对照组比较均有显著差异,而模型组之间无显著差异;第56日,CCL4组各项指标有明显好转,部分指标与对照组无差异,而TAA组的各项指标进一步恶化,部分指标与CCL4组对比有显著差异.结论：CCL4所致的肝纤维化模型更适用于肝纤维化自发逆转机制以及相关治疗策略的研究.TAA所致的肝纤维化模型适用于肝纤维化的机制研究、治疗药物的筛选和肝纤维化血清学标记物的可靠性评价等.     

采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立研究

背景　肝纤维化动物模型的建立有多种方法,而四氯化碳（CCl4）造模法最常使用,而不同的给药途径对造模成功率也造成一定的影响,本研究选择皮下注射纯CCl4,旨在探讨建立家兔肝纤维化模型的最佳给药剂量及时间间隔。目的　探讨CCl4诱导家兔肝纤维化模型的最佳给药方式。方法　2015年4-9月,选用健康新西兰大白兔46只,随机分为4组,其中G0组10只,G1~G3组各12只。G0组皮下注射0.9%氯化钠溶液0.5 ml/kg,G1~G3组分别以0.2、0.3、0.5 ml/kg的分析纯CCl4背部皮下注射,2次/周,共16周。G2组起始剂量为0.3 ml/kg,3周后增加剂量为0.4 ml/kg,5周后增加剂量为0.5 ml/kg,此后维持剂量在0.5 ml/kg。造模后第4、6、8、10、12、14周,分别从G1~G3组随机选取1只家兔,处死并取肝组织标本。第16周处死G1~G3组家兔及2只G0组家兔,造模期间死亡的家兔立即取肝组织标本进行病理学检查。结果　各组家兔的死亡均发生在造模3周内,各组造模3周内家兔死亡率比较,差异有统计学意义（检验统计量值=7.004,P=0.048）;其中,G3组家兔死亡率高于G0、G1、G2组（P<0.001）。第16周时,G1~G3组造模成功率比较,差异无统计学意义（检验统计量值=4.747,P=0.165）。结论　采用CCl4皮下注射,起始剂量为0.3 ml/kg并剂量递增,可成功建立死亡率低的家兔肝纤维化模型。     

四氯化碳不同注射方式诱导大鼠不同分期肝纤维化模型的研究

目的研究四氯化碳不同注射方式对构建大鼠不同分期肝纤维化模型的作用,为四氯化碳诱导大鼠不同分期肝纤维化模型提供可靠的方法。方法 42只雄性SD大鼠随机分成皮下及腹腔注射组,每周2次分别于后腿内侧皮下、腹腔注射四氯化碳-食用调和油悬浊液。第6周开始各组分别处死2~3只大鼠进行肝纤维化分期。结果皮下注射组造模期间死亡3只,死亡率14.3%;腹腔注射组造模期间死亡11只,死亡率52.4%,两种注射方式死亡率明显差异(P<0.05)。皮下注射组第7周获得有意义肝纤维化,第12周造模完成,造模完成时获得有意义肝纤维大鼠11只;腹腔注射组第6周获得有意义肝纤维化,第10周造模完成,造模完成时获得有意义肝纤维大鼠10只,两种注射方式获得有意义肝纤维化无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔及皮下注射方式均可建立大鼠不同分期肝纤维化模型;皮下注射造模死亡率较腹腔注射低,造模完成时间较长,两种注射方式获得有意义肝纤维无明显差异。     

疏肝健脾方对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型影响

目的:观察疏肝健脾方对四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型的防治作用。方法:小鼠随机分为正常组,模型组,疏肝健脾高、低两个剂量组。除正常组外,其余各组均腹腔注射10%CCl4溶液2 m L/kg体重造模。自造模之日起,两个实验组分别给予疏肝健脾方提取液按1 g生药/m L和3 g生药/m L的剂量灌胃共8周,正常组及模型组给予等量生理盐水。于末次戊巴比妥麻醉小鼠,腹主动脉取血,离心取上清,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)含量以及透明质酸(HA)含量,摘取肝脏、脾脏,检测肝脏器系数、脾脏器系数、肝组织匀浆中羟脯氨酸(Hyp)含量、Western印迹检测肝组织匀浆中TIMP-2及MMP-2的表达,观察疏肝健脾方对上述指标的影响,电镜、光镜下观察大鼠肝脏病理学检查结果。结果:疏肝健脾方预防用药能不同程度降低小鼠肝脏器比、降低血清转氨酶ALT水平、HA含量,降低肝组织Hyp含量,增加MMP-2表达及抑制TIMP-2表达的作用,光镜及电镜下显示疏肝健脾方具有较好的保护肝细胞,减轻四氯化碳对大鼠肝组织破坏、防止胶原纤维增生、沉积的作用,其中以高剂量组按3 g生药/m L给药效果最为明显。结论:疏肝健脾方对CCl4诱导小鼠肝纤维化模型具有防治作用。其可以通过降低小鼠肝脏器比,降低血清转氨酶ALT、AST水平、HA含量,降低肝组织Hyp含量,增加肝组织匀浆MMP-2表达及抑制肝组织匀浆TIMP-2表达,从而达到治疗肝纤维化的目的。     

四氯化碳致大鼠肝纤维化模型的建立

目的探讨适当改进经典四氯化碳模型复制方法。方法采用适当改进的40%(体积比)四氯化碳腹腔注射造模,造模结束后检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性、HPC3、C4、LN、HA含量;通过Mallory染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果模型组肝湿重、肝指数、HPC3、C4、LN、HA含量以及肝纤维化程度均较正常组明显升高(P<0.01)。结论本法能够成功建立大鼠肝纤维化模型,死亡率极低,从而提高了模型质量以及实验效率。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究

目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。     

四氯化碳皮下注射构建大鼠肝纤维化模型的研究

目的 构建大鼠肝纤维化模型，观察纤维化的病理进程。方法轮替给大鼠四肢内侧皮下注射四氯化碳植物油混合液．按0．3ml／100g体重的剂量，每周注射两次。分别于初次注射后1、4、8周解剖大鼠，观察肝脏外观．肝组织切片行Van-Gieson(V-G)染色观察纤维增生情况。结果 随注射时间的增加肝脏外观先后出现了出血、坏死、增生、纤维化的特征。V-G染色证实肝脏纤维增生逐渐增多，8周时肝纤维化已形成。结论 四氯化碳皮下注射构建肝纤维化模型具有以下优点：(1)造模易于成功，大鼠死亡率小；(2)肝纤维化程度比较理想；(3)肝纤维化的进展与注射的时间长度直接相关，易于控制纤维化的程度，有利于进一步的研究。     

神经生长因子对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

目的：观察神经生长因子（NGF）对四氯化碳（CCL4）诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法将30只雌性昆明小鼠分成3组：纤维化模型组（A组）、N G F干预组（B组）和生理盐水对照组（C组）。8周时采集标本,用全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、清蛋白（ALB）;放射免疫法检测肝纤维化指标：透明质酸（H A ）、层粘连蛋白（L N ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）。采用Ishaki评分系统对小鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度进行评分。结果A、B组ALT、AST、HA、LN均明显高于C组（F＝111．45,658．80,157．43,167．99;P＜0．05）;B组ALT、AST、LN均明显低于A组（P＜0．05）。HE染色、网状纤维染色及Masson染色显示,A组肝组织炎症及纤维化程度最明显,B组肝组织炎症较A组显著减轻,未形成纤维间隔,纤维组织细短,C组肝组织未见明显炎症细胞浸润及纤维形成。A组肝脏炎症分级和纤维化分期评分较B、C组高,且3组炎症活动度得分、纤维化得分差异有统计学意义（均 P＜0．05）。结论 NGF可以阻断CCL4诱导的小鼠肝纤维化,减轻肝组织炎症。     

制备低剂量四氯化碳诱导小鼠慢性肝损伤模型的探讨

目的 通过注射低剂量四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl₄）建立B/C小鼠肝损伤模型。方法 正常B/C小鼠随机分为正常对照组、油对照组、CCl₄模型组。正常对照组常规饲养;油对照组腹腔注射鲁花花生油（10 μL/g,1次/3天,连续6周）;CCl₄模型组腹腔注射0.5% CCl₄（10 μL/g,1次/3天,连续6周）。第6周,各组小鼠检测血清AST、ALT浓度,HE及Masson染色后观察小鼠肝脏结构、细胞形态及纤维化程度。结果 第6周CCl₄模型组小鼠血清ALT（P=0.00）、AST（P=0.00）浓度极显著性增高,HE及Masson染色显示CCl₄模型组小鼠肝上皮细胞呈广泛性空泡样变及大量坏死,肝小叶内出现明显的条索样纤维增生,其纤维化程度评分显著性升高（P =0.00）,纤维显色积分光密度值极显著性增高（P =0.00）。结论 注射低剂量CCl₄可以诱导B/C小鼠肝损伤模型,实验模型具备肝损伤和肝纤维化病理特征。     

四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究

目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子的变化,初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳0.025 mL（用花生油1∶6稀释）/次,每周3次,共14周]制作大鼠肝纤维化模型,设立正常、溶剂对照组,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）含量;ELISA法检测转化生因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）;化学法检测血清氧化亚氮（NO）。肝组织行HE和Masson胶原染色,光镜下观察病理学改变,并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子-BB（PDGF-BB）的变化,专业图像分析软件进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较,模型组血清ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ、NO、TGF-β1、TNF-α明显升高（P〈0.05）,大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高（P〈0.05）,肝组织PDGF-BB表达明显增多（P〈0.05）。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。     

家兔肝纤维化模型的建立以及血清学与肝纤维化的相关性

目的 探讨血清学指标HA、PⅢP、LN、Ⅳ-C与肝纤维化程度的关系。方法 选取42只普通级家兔,建立家兔肝纤维化模型,然后进行肝纤维化血清学检查。同时取肝脏做病理学检查。数据处理应用SPSS11.0统计分析软件中的单因素方差分析进行分析,P〈0.05为有统计学意义。结果 病理学检查分别获得轻、中、重度组肝纤维化模型,肝纤维化血清学分析结果 为HA具有统计学差异（P〈0.05）。结论 在血清学检查中,以HA判断肝纤维化程度的价值较高,PⅢP、LN、Ⅳ-C的诊断价值在本试验中未得到证实。     

A combination of Ang Ⅱ and carbon tetrachloride acce lerates process of hepatic fibrosis

Objective To assess whether Angiotensin Ⅱ（Ang Ⅱ）and carbon tetrachloride(CCl4) used in combination could accelerate the process of fibrosis and whether Ang Ⅱ play a role in exaggerating hepatic fibrosis in rats.Methods Ang Ⅱ was injected into the abdominal cavity of Sprague-Dawley(SD) rats together with subcutaneous injection of CCl2.Rats were killed after 14 and 28d.Blood serum and liver specimen were collected.The extent of fibrosis in the stained liver tissue sections was determined with the KS 400 Image Analysis System.Results Rats receiving Ang Ⅱ and CCl4 for 28d showed extensive liver fibrosis.Along with the increase of hepatic fibrosis,the serum concentration of Ang Ⅱ went up gradually.Conclusions A combination of AngⅡ and CCl4 would accelerate the process of hepatic fibrosis.AogⅡ probably took part in the occurrence of heparic fibrosis.     

山楂总黄酮对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究

目的:观察山楂总黄酮对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:用CCl4复制大鼠中毒性肝纤维化模型,观察山楂总黄酮对大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb),肝组织病理学及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的影响;免疫组化方法测定肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果:与模型组相比,山楂总黄酮给药组血清学指标ALT、AST浓度明显降低,Alb浓度升高,肝组织内SOD浓度升高,MDA、Hyp浓度降低,且肝组织中α-SMA和TGF-β1的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:山楂总黄酮对CCl4致大鼠肝纤维有较好的保护作用,其机制可能与减少自由基生成、减轻脂质过氧化及抑制α-SMA和TGF-β1的表达有关。     

大鼠肝纤维化组织中BMP-2的动态表达和意义

目的探讨大鼠肝纤维化组织中骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的表达趋势及意义。方法用皮下注射四氯化碳构建大鼠肝纤维化模型,造模后4周、8周、12周分别检测血清层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)的变化,采用HE及Masson染色光学显微镜下观察肝组织损伤情况,采用Real-Time PCR、免疫组织化学和Western印迹检测各组大鼠肝组织中BMP-2的表达。采用单因素方差分析进行多组均数间的比较。结果肝纤维化模型组血清LN、HA明显升高。在对照组和肝纤维化模型组中BMP-2 mRNA均有表达。模型组4周时BMP-2 mRNA表达与对照组无显著差异(P0.05),模型组8周、12周较对照组显著下降(P均0.05)。与模型组4周相比,模型组BMP-2 mRNA的表达在8周、12周显著下降(P均0.05),12周达最低。免疫组织化学证实,BMP-2在肝纤维化模型组较对照组大鼠肝组织中表达减少。在对照组和肝纤维化模型组中BMP-2蛋白均有表达。模型组4周时BMP-2蛋白表达与对照组无显著差异(P0.05),模型组8周、12周较对照组显著下降(P均0.05)。与模型组4周相比,模型组BMP-2蛋白的表达在8周、12周显著下降(P均0.05),12周达最低。结论 BMP-2在正常SD大鼠肝脏有表达,随着肝纤维化进展,表达减少,提示BMP-2参与肝纤维化的发生、发展过程。     

加味鳖甲煎丸对四氯化碳所致肝纤维化大鼠的治疗作用

目的观察加味鳖甲煎丸对四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化大鼠的治疗作用。方法选用Wistar大鼠由皮下注射40?l4溶液首次5 mL/kg,以后每周2次,每次3 mL/kg,连续注射6周,在病理检查证明造模大鼠肝组织出现肝纤维化后,分为模型组、秋水仙碱对照组、肝脾康对照组和加味鳖甲煎丸大、中、小剂量组。连续给药8周后,观察加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血胆红素(TBIL)、白蛋白与球蛋白比值(A/G)、胶原Ⅳ(CⅣ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)含量。结果同模型组相比,加味鳖甲煎丸大、中剂量组可使CCl4造模大鼠血清AST、ALT、TBIL、CⅣ、LN、HA明显降低。结论加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠有较好治疗作用。     

软肝冲剂对四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型的影响

目的 观察软肝冲剂对四氯化碳性肝纤维化小鼠模型的治疗作用.方法 取50只雄性SPF级C57B/L小鼠,随机分为空白对照组、模型组和软肝冲剂治疗组.给予空白对照组100％花生油1mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20％四氯化碳的花生油1 mL/kg腹腔注射,2次/周,共10周;软肝冲剂3个治疗组第3周起给予软肝冲剂高、中、低7.5、5.0、3.5 g/(kg·d)剂量灌胃至第10周.在实验结束后,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)的含量;计算肝脏指数;使用Masson和HE染色观察肝脏的病理组织学改变.结果 软肝冲剂组血清中的HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的含量均低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);中剂量组和高剂量组肝脏指数与模型组相比具有统计学意义(P＜0.05);病理学检查发现软肝冲剂中、高剂量组小鼠肝脏的炎性浸润和脂肪空泡消失,Masson染色显示在汇管区无纤维素沉积.结论 软肝冲剂可以降低四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型中血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的水平,对肝脏具有保护作用.     

复合因素法致大鼠肝纤维化模型的建立

目的 探讨一种新的制备肝纤维化动物模型的方法,为下一步研究肝纤维化发生机制、治疗方案提供稳定、可靠的动物模型.方法 将80只雄性Wistar大鼠随机分成两组,对照组腹腔内注射橄榄油2 mL/kg,2次/周,并给予普通饮水及饲料.模型组采用腹腔注射猪血清+四氯化碳(CCl4)+高脂低蛋白饲料(10％猪油、2％胆固醇)+普通饲料+乙醇进行诱导.共8周,实验结束进行肝功能生化指标测定及病理学观察并加以评估.结果 模型组70只,造模结束时死亡10只,死亡率14.3％.血清ALT、AST、ALP、GGT和Hyp与正常对照组有显著性差异(P＜0.01),病理切片均可看到明显的肝纤维化形成,造模成功60只,成模率85.7％.对照组10只全存活.结论 该方法可成功建立肝纤维化模型,为实验研究应用.