培养大鼠下丘脑神经元生长规律及免疫细胞化学研究

目的：探讨体外培养胎鼠下丘脑CRH神经元的形态、生长变化规律及CRH的表达变化。方法：取17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元，镜下连续观察神经元胞体直径、突起长度、数目等变化规律，应用免疫组织化学染色方法观察CRH神经元的生长变化规律。结果：培养下丘脑CRH神经元3-6d生长速度最快；7-10d神经元细胞数量、胞体直径、突起长度和CRH染色强度均达高峰；12d以后部分神经元出现退形性改变。结论：培养下丘脑CRH神经元7-10d迅速生长趋于成熟，是神经元机能测试的最佳时期。     

大鼠脊髓神经元原代细胞的分散培养

目的　建立一种简单、易行、满足基本科研需要的脊髓神经元原代细胞分散培养法。方法　取Wistar大鼠胎鼠或新生鼠的脊髓 ,以胰蛋白酶消化和机械吹打相结合 ,将组织分散成细胞悬液 ,培养于含10 %胎牛血清和阿糖胞苷 (抑制胶质细胞的增殖 )DMEM培养基中 ,观察脊髓神经元细胞生长状况。结果　3～ 6h细胞开始贴壁 ,胞体周围渐有突起 ;2～ 3d胞体明显增大 ,突起生长旺盛 ,连接呈网络 ;10d时细胞形态最为丰满 ;3周后细胞开始退化 ,胞内出现空泡。结论　培养的脊髓神经元形态发育符合正常规律变化 ,适用于形态学、生化、遗传、药理等学科研究     

体外下丘脑神经细胞培养技术探讨

目的探讨体外下丘脑神经细胞培养的技术。方法选用生后1～3d的SD大鼠,取下丘脑组织进行单细胞原代培养。结果培养1d,神经元胞体小,圆形或梭形,无突起或突起极短;培养3d时,胞体明显增大,突起长度增加;到培养7d,神经元的胞体截面积和突起长度均达到最高峰,分别为161.63±21.17μm2和103.51±21.33μm;到14d时,神经元的胞体截面积和突起长度基本维持在7d时的水平。结论培养前7d是下丘脑神经元体外生长成熟的关键时期,这种良好的发育状态可维持到14d。体外下丘脑神经细胞培养技术的关键在于准确的取材部位,良好的单细胞悬液的制备,尤其是贴壁物的选择。     

低浓度补体C3对大脑皮层神经元生物活性及突起生长的影响

目的探讨补体C3对大脑皮层神经元生物活性和突起生长的影响及可能机制。方法在原代培养的孕16 d大鼠胚胎皮层神经元中分别加入不同浓度的外源性C3蛋白、神经生长因子和C3a受体拮抗剂SB290157。WST-8法测定神经元活性(细胞存活率)。选用MAP2与β-tubulin免疫荧光细胞化学双标染色,荧光显微镜下观察并计算神经元纯度;应用神经元形态分析软件采集神经元树突、轴突长度及胞体面积等数据,分析不同浓度补体C3及C3a受体拮抗剂对突起生长的影响。以不含其他试剂的神经元细胞及其培养液作为正常对照组。结果皮层神经元存活率检测显示,高浓度(10~100μg/mL)C3组明显低于正常对照组(P<0.05),而低浓度(0.01~1μg/mL)C3组与对照组无明显差异。1μg/mL和5μg/mL C3均促进皮层神经元突起生长,尤其是轴突的生长,其树突和轴突长度分别增长20%~39%和40%~61%,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05和P<0.01);而加入C3a受体拮抗剂后,皮层神经元树突和轴突长度与对照组比较无明显差异。结论低浓度补体C3对皮层神经元轴突和树突生长有明显促进作用,而该作用可能由C3活性片段C3a受体介导。     

低浓度补体C3对大脑皮层神经元生物活性及突起生长的影响

目的 探讨补体C3对大脑皮层神经元生物活性和突起生长的影响及可能机制. 方法 在原代培养的孕16 d大鼠胚胎皮层神经元中分别加入不同浓度的外源性C3蛋白、神经生长因子和C3a受体拮抗剂SB290157.WST-8 法测定神经元活性(细胞存活率).选用MAP2与β-tubulin免疫荧光细胞化学双标染色,荧光显微镜下观察并计算神经元纯度;应用神经元形态分析软件采集神经元树突、轴突长度及胞体面积等数据,分析不同浓度补体C3及C3a受体拮抗剂对突起生长的影响.以不含其他试剂的神经元细胞及其培养液作为正常对照组. 结果 皮层神经元存活率检测显示,高浓度 (10～100 μg/mL) C3组明显低于正常对照组(P<0.05),而低浓度(0.01～1 μg/mL)C3组与对照组无明显差异. 1 μg/mL 和5 μg/mL C3均促进皮层神经元突起生长,尤其是轴突的生长,其树突和轴突长度分别增长20% ～39%和40% ～61%,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05和P<0.01);而加入C3a受体拮抗剂后,皮层神经元树突和轴突长度与对照组比较无明显差异. 结论 低浓度补体C3对皮层神经元轴突和树突生长有明显促进作用,而该作用可能由C3活性片段C3a受体介导.     

人胚大脑皮层神经元细胞体外培养方法的建立

目的 建立人胚大脑皮层神经元的培养体系,研究神经元细胞的生长发育过程。方法 取妊娠30余周合法流产死亡4h以内的胎儿之大脑皮层额部组织,用胰蛋白酶消化为单细胞悬液。以2×10~6/ml密度接种于96孔培养板,24h后加入DNA抑制剂阿糖胞苷,培养1～12d,用相差显微镜观察神经元生长情况。并以尼氏体染色鉴定神经元,以台盼蓝拒染法细胞计数估算细胞的存活率。结果 神经细胞生长良好,胞体折光性强,神经突起明显,细胞形态清晰。第5天形成较稠密的网络联系;细胞存活率逐步下降,第3至第5天显著下降。由92.3％降至76.9％,以后趋于稳定。第7天为74.26％。尼氏小体染色第7天阳性率为88.25％。结论 体外培养3～5d的神经细胞属发育期;第5天细胞稳定生长;第6天神经细胞基本发育成熟。     

人体海马CA3区锥体神经元发育的研究

目的 探究人体海马CA3区神经元锥体细胞发育的过程.方法 取26周、35周、38周引产胎儿和8岁死亡儿童各1例,采用Golgi染色及微镜技术,进行神经元锥体细胞胞体形态学观察,并计算胞体的长度和面积.结果 26周、35周、38周、8岁海马CA3区神经元锥体细胞胞体长度分别为（76.4±3.1）μm、（90.9±13.8）μm、（96.0±16.9）μm、（107.0±9.9）μm;胞体面积分别为（363.8±15.8）μm2、（474.3±115.5）μm2、（449.5±116.8）μm2、（656.8±125.7）μm2.26周胞体长度和面积与35周、38周、8岁相比差异明显（P〈0.05）;35周胞体长度和面积与38周相比差异不明显（P〉0.05）,与8岁相比差异明显（P〈0.05）;38周胞体长度和面积与8岁相比差异明显（P〈0.05）.26W、35W、38W锥体细胞呈锥体形,细胞长度逐渐增长,面积逐渐增大,顶树突从无到有,基树突逐渐增粗增长,树突分支表面的小棘从无到有;8Y锥体细胞呈锥体形,细胞长度趋于稳定,面积稍微增大,顶树突增长增粗,基树突增粗增长,小棘增多.结论 人体在发育过程中,锥体细胞长度呈逐渐增长趋势,增长逐渐变慢并趋于稳定,面积呈逐渐增大趋势,增大逐渐变慢并趋于稳定,锥体细胞形态学上呈生长性改变.     

HIVgp120对胎鼠背根神经节神经元突起生长的影响

探讨人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）gp120对体外培养的背根神经节神经元胞体和突起生长的影响。方法：分散培养的胎鼠背根神经节神经元用不同浓度的HIV gp120 (125、250、500?pmol/L和1?nmol/L) 处理,对分散培养的背根神经节神经元用MAP2免疫荧光标记后,用共聚焦激光扫描显微镜观察神经元胞体和突起的改变。结果：应用gp120后7?d,神经元突起的数目减少,长度变短,而神经元的胞体则没有明显变化。结论：HIV gp120可直接影响分散培养的背根神经节神经元突起的生长。     

吡咯喹啉醌对培养的鼠海马神经元的促生长作用

目的:探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对培养海马神经元的促生长作用。方法:原代培养新生大鼠海马神经元,观察PQQ对海马神经元胞体、突起生长和存活率的影响,测定MTT代谢率和脂褐素。结果:PQQ处理后,海马神经元突起的长度和胞体的长径显著大于对照组,细胞的存活率增加、存活的时间延长,尼氏小体的光密度值和MTT代谢率显著高于对照组,脂褐素的含量降低。结论:PQQ能促进海马神经元的生长,增加其存活率、延长存活时间。     

GB对胚鼠脊髓运动神经元存活与生长的影响

目的探讨银杏内酯B（ginkgolide B,GB）对体外培养的胚鼠脊髓运动神经元生长发育及细胞活性的影响。方法取胚胎大鼠脊髓腹侧组织进行原代培养,从细胞形态学、MTT法、mAb SMI-32免疫组化染色观察GB和NGF对大鼠脊髓运动神经元生长发育的影响。结果 GB及NGF能够促进体外培养胚胎大鼠脊髓运动神经元的存活,促进胞体及突起的生长。结论 GB能促进培养大鼠脊髓运动神经元存活、分化和生长。