自噬基因Beclin1在卵巢癌中的研究进展

妇科恶性肿瘤中卵巢癌的发病率排名第三,但是死亡率排名第一。自噬是指细胞在缺乏营养和能量等刺激时受损的生物大分子和细胞器被溶酶体包裹降解的过程,自噬参与了细胞的生理和病理过程,近来研究表明自噬对肿瘤的生物学有着复杂且重要的作用。Beclin1是自噬的正向调控基因,Beclinl与肿瘤之间的关系正如自噬与肿瘤之间的关系。自噬基因Beclin1对卵巢癌的发生、发展、治疗和预后有何影响,本文就此作一综述。     

自噬基因Beclin1与恶性肿瘤的相关性研究进展

<正>自噬是亚细胞水平上细胞发生自我吞噬的过程,是双层膜结构的溶酶体与自噬囊泡融合成自噬溶酶体,降解泡内细胞质、器,释放氨基酸及游离脂肪酸,实现细胞自身代谢和细胞器更新,维持机体内环境稳定状态的过程,当细胞受到外界多种刺激(如缺乏营养、缺乏氧气、辐射、药品等)时均可诱发细胞自噬.自噬活性的改变及自噬信号通路和转运途径的负向调控与多种肿瘤的发生、发展密切相关,自噬基因的异常表达可启动或抑制某些肿瘤的形成[1],而Bec-     

自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达及其临床意义

目的探讨自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及与肿瘤发生发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变（CIN,Ⅱ～Ⅲ级）和20例正常宫颈组织中自噬基因Beclin 1的蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中Beclin 1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43．2％（35／81）、34．6％（28／81）、22．2％（18／81）,与正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变组相比,Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达显著下调（P=0．011）。宫颈鳞癌中Beclin 1的表达在不同FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型间的差异无统计学意义。但在有无盆腔淋巴结转移、不同肿瘤分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论自噬基因Beckn 1在宫颈鳞癌中蛋白表达下调,并与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移和肿瘤分化程度有关。     

自噬基因Beclin1与肿瘤的研究进展

Beclin1基因也称BECN1基因,是酵母ATG6的同系物,Beclin1基因是细胞执行自体吞噬的必需基因,且和肿瘤的发生、发展密切相关。Beclin1通过对细胞自噬的调节,在肿瘤的病理生理过程中起重要作用。本文对Beclin1与肿瘤的关系,特别是Beclin1与妇科肿瘤的相关研究进行总结、综述。     

自噬基因Beclin1与妇科肿瘤的研究进展

随着肿瘤基因治疗研究的进展,自噬性细胞死亡受到广大学者的关注。许多研究发现抗肿瘤药物不仅可以通过促使肿瘤细胞凋亡来达到其治疗肿瘤的目的,还可以诱导肿瘤细胞自噬性死亡。操纵自噬已成为肿瘤治疗的新前景。Beclin1是至今唯一发现的哺乳动物自噬基因,它不仅参与自噬体的形成,还可通过调节自噬活性对肿瘤的发生、发展发挥重要作用。     

自噬基因Beclin 1与肿瘤关系的研究进展

Beclin 1是第一个被克隆的自噬相关基因,在肿瘤发生、发展中扮演重要角色.Beclin 1不仅促进真核细胞自噬,同时也参与细胞凋亡调节.研究表明,Beclin 1可抑制肿瘤的发生和发展,但也有研究表明,Beclin 1可以通过诱导适当的自噬使肿瘤细胞得以存活.笔者就Beclin 1及其在肿瘤发生、发展中的作用作一综述.     

自噬基因Beclin1启动子细胞自噬模型的建立

【目的】构建自噬基因Beclin1启动子报告基因细胞自噬模型,为筛选出以Beclin1为靶标的中药提供新的细胞模型。【方法】采用瞬时转染双荧光素酶报告基因测定法,确定最佳转染浓度、时间等条件,及Beclin1基因启动子转录活性细胞自噬模型的建立和验证,观察血清饥饿、过氧化氢氧化损伤及自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素对Beclin1基因启动子转录活性PC12细胞自噬模型的影响。【结果】血清饥饿诱导12 h,Beclin1基因启动子转录活性是体积分数10%血清组的1.8倍,而血清饥饿诱导18、24 h与诱导12 h比较其转录活性无明显变化;300μmol/L过氧化氢诱导9 h,Beclin1基因启动子转录活性是0μmol/L过氧化氢组的1.3倍;雷帕霉素在浓度0.1、1 nmol/L可上调Beclin1基因启动子转录活性,并呈浓度依赖性,而5 nmol/L及更高浓度的雷帕霉素可下调Beclin1基因启动子转录活性。【结论】成功建立用Beclin1基因启动子报告基因检测Beclin1基因启动子转录活性特异性的细胞发生自噬模型,血清饥饿、过氧化氢、自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素可诱导Beclin1基因启动子的转录活性。     

TGF-β1通过促进自噬相关基因Beclin 1表达抑制肝癌细胞增殖

目的：探讨TGF-β1对人肝癌细胞增殖的影响及其与Beclin 1表达的关系.方法：常规培养人肝细胞株L-02和人肝癌细胞株Bel7402,MTT法检测TGF-β1对Bel7402细胞增殖的影响,RT-PCR和Western-blot检测TGF-β1对Bel7402细胞Beclin 1表达的作用.结果：TGF-β1明显抑制了Bel7402细胞的增殖,该作用可被TGF-β1受体阻断剂LY364947解除.Bel7402细胞Beclin 1表达低于L-02细胞,给予TGF-β1后,Bel7402细胞Beclin 1表达明显增加,该作用可被LY364947抑制.结论：TGF-β1抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与促进Beclin 1表达有关.     

Beclin 1调控心肌自噬与心血管疾病关系的研究进展

Beclin 1基因是调控自噬的关键蛋白之一,与相关蛋白结合形成复合体诱导自噬,并调控自噬水平。在应激刺激下,Beclin 1可以调节心肌细胞自噬活性,对心肌细胞起到保护或者损害的作用,与多种心血管疾病有着密切关系。通过探讨Beclin 1调控心肌自噬对心血管疾病的影响,以期为研究心血管疾病发生机制和临床治疗提供新的思路和理论依据。     

TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响

目的 构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构 RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE 表达对 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计针对 TACE 基因的 4 个 shRNA 序列,构建真核表达载体 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.通过酶切和测序等方法进行鉴定.转染 HeLa 细胞后,用 Reahime PCR 的方法检测其对 HeLa 细胞 TACE 基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的 sTNF-α,间接反映干扰 TACE 的效果;用 MTT 法检测细胞增殖活性;用 DNA ladder 和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建和筛选出了针对 TACE 基因的 3 个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了 HeLa 细胞 TACE 基因的表达.ELISA 检测结果与 Reahime PCR实验结果相符.同时发现干扰 TACE 基因后,HeLa 细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05).实验组转染 shRNA1～3 后 72 h 可见特征性的基因组 DNA ladder 条带.结论 所构建的TACE shR-NA 真核表达载体能显著抑制 TACE 的表达.干扰 TACE 基因的表达可有效抑制 HeLa 细胞的增殖并诱导其凋亡.     

上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的 研究自噬基因Beclin 1及其调控相关信号传导途径磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)与上皮性卵巢癌发生发展之间的关系.方法 用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin 1、Class Ⅰ PI3K (p110α)、Class Ⅲ PI3K(hvps34)及其下游的磷酸化PKB(p-PKB)的表达水平进行检测.结果 Beclin 1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高,在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降,在上皮性卵巢癌中的表达最低(P＜0.05);p110α、p-PKB在交界性卵巢肿瘤组织中开始升高,在上皮性卵巢癌中的表达高于其它3组(P＜0.05).卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢肿瘤组织中Beclin 1的表达分别高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者(P＜0.05),而p110α及p-PKB的表达则分别降低(P＜0.05).结论 自噬基因Beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达下调,对自噬起调控作用的PI3K/PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、p-PKB存在表达异常,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关.     

Beclin1与肿瘤关系的研究进展

Beclin1是酵母自噬基因Atg6/Vps30的同系物,也是哺乳动物参与自噬的特异性基因,与肿瘤的发生发展密切相关。本文通过介绍Beclin1的基本结构、相关作用蛋白及其相关自噬机制,总结了Beclin1与自噬、凋亡及其肿瘤的关系,并探讨其在肿瘤治疗领域中的潜能。     

大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1在大鼠急性肾损伤伤后肾组织中的表达情况,并探讨其意义。方法选用24只雄性大鼠sD大鼠,体重250±30g,按随机数字表法分为两组,假手术组（Sham组）和缺血-再灌注组（I／R组）;各组于再灌注后12、24、48h3个相应时间点收获肾脏标本。HE染色观察肾脏病理变化,免疫组化法测定自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况,透射电镜观察。肾脏组织自噬现象。结果与假手术组比较,大鼠急性肾损伤48h,肾小管细胞Beclin-1蛋白的表达最强（P〈0．05）,再灌注损伤后48h,自噬体数量显著增多,细胞内出现染色质块状边集,核形态不规则的明显凋亡现象。结论大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达上调,说明大鼠肾急性。肾损伤后肾脏组组织自噬活性上调。     

人信号传导及转录激活因子shRNA载体的构建与鉴定

目的：构建针对人信号传导及转录激活因子1（STAT1）基因的shRNA表达载体,检测其对STAT1基因的沉默效果。方法设计针对STAT1的shRNA序列,克隆到pGPU6质粒载体,并进行测序、转染和鉴定。结果 DNA测序显示成功构建了4个shRNA表达载体。shRNA能有效抑制STAT1基因在人宫颈癌细胞株TZM- bl细胞中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人STAT1基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo- shRNA STAT1。     

自噬基因Beclin 1在SKOV3细胞中的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达后自噬相关信号调控通路PI3K/PKB途径中ClassⅠPI3K（p110α）、p-PKB和ClassⅢPI3K（hvps34）的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬活性的影响.方法将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞;分别用荧光定量RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclin1、p110α、hvps34和p-PKB的表达;在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象,用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况.结果 pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞Beclin1表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞;PcDNA3.1/Beclin1转染后hvps34表达上调,而p110α、p-PKB的表达下调.PcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成.在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加.流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组.Beclin 1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%.结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使ClassⅢPI3K（hvps34）表达上调,ClassⅠPI3K（p110α）及其下游的p-PKB表达下调,诱导肿瘤细胞自噬活性增加,抑制SKOV3在体外的增殖.     

沉默Beclin1基因对β-榄香烯抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖与诱导自噬的影响

目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。     

针对PKM2多位点RNAi质粒载体的构建和筛选

目的：构建针对M2型丙酮酸激酶（PKM2）基因3个可干扰序列设计小发夹RNA（small hairpin RNA,shRNA）载体,为下一步探索Ad-PKM2介导PKM2 RNAi对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法：根据RNAi设计软件设计并合成3对shRNA模板序列,依次将它们克隆至pGenesil载体中构建重组质粒,通过MTT检测筛选出对乳腺癌细胞株MCF-7增殖效应影响最强的RNAi序列。结果：酶切鉴定和测序结果证实RNAi载体构建成功,均能高效感染MCF-7并抑制MCF-7细胞的增殖,pGenesil-PKM2-（1＋2＋3）的抑制能力最强。结论：针对PKM2多靶点RNAi载体成功构建,为下一步研究PKM2被沉默后细胞生物学行为的变化打下基础。