热应激诱导肝硬化大鼠细胞内外HSP72表达及其对TNF-α分泌的影响

目的 探讨肝硬化大鼠热应激后肝组织细胞内外热休克蛋白72(HSP72)的表达及对致炎细胞因子TNF-α分泌的影响.方法 CCl4诱导的肝硬化SD大鼠及正常饮食的SD大鼠均随机分为热应激组和对照组.ELISA检测并比较各组大鼠血浆内毒素、HSP72、TNF-α的含量,RT-PCR检测肝组织HSP72 mRNA表达,评价HSP72表达对TNF-α含量的影响.结果 各组大鼠腹腔注入LPS后均检测到较高含量的血浆内毒素及TNF-α,尤其肝硬化组升高更为明显(均P<0.01),但热应激组较相应组大鼠血浆TNF-α含量显著降低,而血浆内毒素含量变化不大.热应激后各组大鼠血浆及肝组织HSP72表达均增高,尤其在腹腔注入LPS后升高更为明显(均P<0.01),但肝硬化热应激组却显著低于普通饮食热应激组(均P<0.01).热应激组大鼠血浆TNF-α含量显著低于相应非热应激大鼠组(均P<0.01).结论 热应激处理可能促进肝硬化内毒素血症大鼠肝组织及血浆HSP72表达,而抑制TNF-α分泌.     

内毒素血症在急性胰腺炎肺损伤中的作用机制

目的:探讨内毒素血症在急性坏死性胰腺炎并发肺损伤过程中的地位及作用机制。材料和方法:将大鼠分三组,水肿性胰腺炎组即制备急性水肿性胰腺炎模型;水肿性胰腺炎 LPS 组即诱导水肿性胰腺炎后再以 LPS 行腹腔注射来模拟肠源性内毒素血症;LPS 组动物单纯接受 LPS 处理。在预定时点测定动物血浆 TNF-α含量,并以免疫组化技术检测肺组织中 TNF-α的表达。结果:正常动物以 LPS 处理后肺内出现 TNF-α的明显表达,血中 TNF-α含量显著增加,伴有轻度肺损害的表现。水肿性胰腺炎组动物肺组织中也有一定程度 TNF-α的表达,如果再合并内毒素血症,则 TNF-α的生成大大增加,同时出现严重的肺损伤。结论:急性胰腺炎时内毒素血症可以通过诱导肺内 TNF-α等炎症性细胞因子的过度表达而导致肺损伤。研究还提示内毒素血症可能在启动 SIRS/MODS 及胰腺炎重症化进程中发挥重要作用。     

异丙酚对内毒素血症大鼠肺中TNF-α作用影响的研究

目的研究异丙酚对内毒素血症大鼠TNF-α作用的影响.方法 72只Waster雄性大鼠分为3组:对照组(C组),内毒素组(L组)和异丙酚 内毒素组(P组).L组在腹腔内注入内毒素10mg·kg-1;P组在皮下缓慢注入异丙酚20mg·kg-1·h-1后再注入内毒素10mg·kg-1;C组腹腔内注入等量生理盐水.分别在注射后30、90、180、360min时处死动物,C组在不同时间点留取3ml静脉血后,于360min处死留取肺组织.测定血清和肺组织TNF-α、肺组织TNF-αmRNA表达、TNF-α免疫反应物质.结果 L组注射内毒素后30min血清和肺组织中TNF-α浓度升高,90min达到高峰后逐渐下降,360min后仍高于正常水平.P组各时点血清和肺组织中TNF-α浓度明显低于L组(P＜0.001).L组注射内毒素后30min肺组织TNF-α mRNA表达上升并达到高峰,后缓慢下降,360min仍高于正常水平.P组各时点肺组织中TNF-αmRNA的表达明显低于L组(P＜0.001).结论异丙酚可显著抑制内毒素血症时TNF-α的合成、分泌,是其抗内毒素血症作用的机制之一.     

大鼠烧伤感染模型肺组织热应激蛋白70的表达及意义

目的:了解实验大鼠热应激蛋白70(Heatstressproteins,HSP70)的表达与烧伤脓毒症的关系,探讨其作用机制。方法:将36只雄性Wistar大鼠随机数字表法分成6组,每组6只。其中4组以92℃水,18s烫伤(烫伤面积20%),腹腔注射乳酸林格氏液休克复苏,48h后尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液0.5mL(菌量1.5×109CFU/mL)制成大鼠烧伤感染模型,分别对成模后0,4,24,48h时相点进行检测;另以正常组及烧伤48h组作为对照。以免疫组化法及WesternBlot检测各组肺组织HSP70的表达,同时以偶氮显色法检测各组血浆内毒素水平,并对大鼠肺组织进行大体及镜下观察。结果:Wistar大鼠在尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液后,其血浆内毒素水平迅速上升。与正常对照组相比,烧伤感染组大鼠的血浆内毒素水平明显升高(t=2.2281,P<0.05)。正常大鼠肺组织HSP70表达较弱,表达部位在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质。在烧伤感染条件下,大鼠肺组织HSP70表达逐渐增强,至成模后24h,HSP70表达累积量达到最高峰,并呈现较明显的核表达。成模后48h,HSP70表达逐渐减弱,核表达逐渐消失,主要在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质表达。结论:HSP70与烧伤感染后的应激反应有密切关系,其表达规律与热应激反应相似。在烧伤感染的早期(24h内),热应激蛋白表达水平与血浆内     

川芎嗪抗大鼠内毒素休克性肝损伤作用机理的研究

目的：探讨川芎嗪抗大鼠内毒素休克性肝损伤的作用机理。方法：将健康成年wistar大鼠60只随机分为正常对照组、内毒素休克组、内毒素 川芎嗪预处理组，以内毒素注射后2h及内毒素休克组大鼠临终时为时点采集肝脏，采用western斑点印迹法及ELISA双抗体夹心法检测肝组织中HSP70及TNF-α含量。结果：内毒素休克组大鼠较对照组肝组织HSP70及TNF—α含量显著升高，与川芎嗪预处理组大鼠相比，后者肝HSP70含量明显增加，TNF-α含量显著减少，动物存活时间延长，存活率显著提高；相关分析表明肝HSP70与TNF-α含量呈显著负相关。结论：川芎嗪能显著提高内毒素休克大鼠肝脏HSP70含量，抑制肝TNF—α释放，并减轻内毒素诱导的肝损伤。     

热休克蛋白72和Toll样受体4在肝肾综合征大鼠肾组织中的表达及作用研究

目的探讨肾组织热休克蛋白72（HSP72）和Toll样受体4（TLR4）的表达及其在肝肾综合征发生中的作用。方法采用胆总管结扎（BDL）法诱导肝硬化致肝肾综合征大鼠模型（BDL组），术后1、2、4和6周各选6只大鼠从股静脉取血及肝、肾组织标本。检测血浆丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBil）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆HSP72、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。将肝、肾组织称重，并制备标本；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）分别检测肾组织HSP72和TLR4的mRNA及蛋白表达。同时以假手术（Sham）组为对照。结果与Sham组比较，BDL组各时间点ALT和TBil均明显升高（P均〈0．05），4周和6周BUN和Cr也明显升高（P均〈0．05）；血浆HSP72含量均显著减少，尤以4周和6周时最为明显；而TNF-α含量各时间点却显著增多（P均〈0．01）。BDL组各时间点肾组织HSP72 mRNA及其蛋白表达均显著低于Sham组（P均〈0．01），而TLR4 mRNA及其蛋白表达量却显著高于Sham组（P均〈0．01）。结论肾组织HSP72表达减少可能有助于TLR4炎性信号通路激活，并可能与肝硬化并发的肝肾综合征发生相关。     

炎症细胞因子及肝ICAM-1在内毒素所致肝脏损伤中的作用

目的探讨炎症细胞因子、肝细胞间黏附分子(ICAM-1)在内毒素急性肝损伤发病中的作用机制.方法将Wistar大鼠随机分成2组:①假手术组(S);②内毒素组(LPS),测定各组大鼠血浆TNF-α、IL-6水平,肝ICAM-1免疫组织化学染色及图像分析,肝组织病理观察.结果LPS组血浆TNF-α,IL-6水平和肝血管内皮细胞ICAM-1表达明显高于S组.病理损害较S组严重.结论TNF-α、IL-6及肝ICAM-1在内毒素急性肝损伤发病机制中起重要作用.     

大鼠烧伤感染模型肺组织热应激蛋白70的表达及意义

目的：了解实验大鼠热应激蛋白70（Heat stress proteins,HSP70)的表达与烧伤脓毒症的关系，探讨其作用机制。方法：将36只雄性Wistar大鼠随机数字表法分成6组，每组6只。其中4组以92℃水，18s烫伤(烫伤面积20％)，腹腔注射乳酸林格氏液休克复苏，48h后尾静脉注射绿脓杆菌：PA103悬液0．5mL(菌量1．5&;#215;10^9CFU／mL)制成大鼠烧伤感染模型，分别对成模后0，4,24，48h时相点进行检测；另以正常组及烧伤48h组作为对照。以免疫组化法及Western Blot检测各组肺组织HSP70的表达，同时以偶氮显色法检测各组血浆内毒素水平，并对大鼠肺组织进行大体及镜下观察。结果：Wistar大鼠在尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液后，其血浆内毒素水平迅速上升。与正常对照组相比，烧伤感染组大鼠的血浆内毒素水平明显升高(t=2．2281，P&;lt;0．05)。正常大鼠肺组织HSP70表达较弱，表达部位在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质。在烧伤感染条件下。大鼠肺组织HSP70表达逐渐增强，至成模后24h，HSP70表达累积量达到最高峰，并呈现较明显的核表达。成模后48h，HSP70表达逐渐减弱，核表达逐渐消失，主要在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质表达。结论：HSP70与烧伤感染后的应激反应有密切关系，其表达规律与热应激反应相似。在烧伤感染的早期(24h内)，热应激蛋白表达水平与血浆内毒素水平有一定的相关性。     

脾切除对内毒素诱生肝和肺组织肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的:观察脾切除大鼠受内毒素攻击后,组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及基因表达的变化规律,探索脾切除对内毒素诱生TNF-α的影响.方法:Wistar大鼠随机分为无脾组(n=36)和有脾组(n=36),动物静脉注射大肠杆菌脂多糖0.1 mg/kg制作内毒素血症模型.采用酶联免疫吸附法测定肺、肝组织TNF-α含量,并应用逆转录聚合酶链(PCR)技术检测组织TNF-α mRNA表达改变.结果:内毒素注射后0.5小时肝、肺组织TNF-α水平开始升高,1.5小时无脾组显著高于有脾组(P<0.01 和P<0.05).肝、肺组织的TNF-α mRNA表达与TNF-α的水平呈正相关,无脾动物肺组织TNF-α mRNA明显高于有脾动物(P<0.05).结论:脾切除动物受内毒素攻击时,其TNF-α的合成与释放明显高于有脾动物.     

内毒素血症时循环肾素-血管紧张素系统改变的实验研究

目的研究大鼠内毒素血症时循环肾素-血管紧张素系统（RAS）的变化，探讨内毒素血症的病理机制。方法90只雄性Wistar大鼠，随机分为正常对照组（n=10）和模型组（n=80），模型组叉分为注射脂多糖（LPS）后2、4、8、12、24、48、72h及7d8个时间点。每个时间点10只。分别于腹腔注射LPS后相应时间点处死动物，取心脏血，测定血浆内毒素、肾素活性（PRA）、血管紧张素Ⅱ（AⅡ）以及血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）的变化，并与正常对照组比较。结果①模型组血浆内毒素和血清TNF-α、IL-10水平均在腹腔注射LPS后2h达高峰，分别在注射LPS后7d、8h和8h降至正常水平。②模型组血浆PRA和血清AⅡ、ACE水平分别在腹腔注射LPS后2、8h和8h达高峰，分别于注射LPS后12、72和24h降至正常水平。结论内毒素血症时，机体产生一系列炎症反应和抗炎反应，释放大量细胞因子和炎症介质，同时循环RAS激活，引起血管收缩，导致微循环障碍．可进一步加重组织细胞缺血、缺氧。研究内毒素血症时RAS改变对阐明内毒素血症的病理机制具有一定价值。