12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达

目的 研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2) 表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系.方法 胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24 h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24 h加入干预药物.P21...     

AA861对人胃癌细胞凋亡及5-脂氧合酶mRNA表达的影响

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)选择性抑制剂AA861对胃癌AGS细胞株凋亡及其5-LOX mRNA表达的影响。方法体外培养人胃癌AGS细胞,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(25,50,100μmol/L)组AA861不同作用时间(24,48,72 h)后AGS细胞的存活率。TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。透射电子显微镜技术检测细胞的凋亡形态。RT-PCR检测AGS细胞5-LOX mRNA表达及AA861对其5-LOX mRNA表达的影响。结果AA861以时间剂量依赖的方式抑制AGS细胞的生长,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05,25μmol/L作用24 h除外),不同药物浓度作用后72 h细胞存活率最高为59.9%(25μmol/L组),最低为36.2%(100μmol/L组);TUNEL染色法显示50,100μmol/L作用48 h后细胞凋亡率为(24.6±3.3)%和(51.2±1.8)%,均高于对照组(P<0.01);透射电镜观察到典型的细胞凋亡形态。AGS细胞存在5-LOX mRNA的表达,AA861作用前后细胞5-LOX mRNA表达无改变。结论AA861能抑制AGS细胞株的生长,亦能诱导其凋亡,但不影响其5-LOX mR-NA的表达。     

汉黄芩素对多发性骨髓瘤细胞周期及P-Wee1和P-Akt蛋白表达的影响

目的探讨汉黄芩素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用及其可能的机制。方法以不同浓度的汉黄芩素(5～100μg/ml)作用于RPMI8226细胞24h,使用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞的增殖活性和细胞周期的变化;运用Western-blot法检测汉黄芩素作用前后细胞内P-Wee1、P-Akt蛋白表达的变化。结果汉黄芩素对RPMI8226细胞具有增殖抑制作用,并有剂量依赖性,IC50为43.71μg/ml;汉黄芩素浓度为50μg/ml时,用药组的G2/M%为(25.4333±2.35433)%,明显高于溶剂对照组的(6.8333±1.52753)%;Western-blot检测结果显示,用药组汉黄芩素浓度≥50μg/ml时,与对照组相比,P-Wee1、P-Akt蛋白表达明显减少。结论汉黄芩素能明显抑制RPMI8226细胞的增殖,可能是通过Akt/Wee1途径使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,从而发挥增殖抑制作用。     

蛙皮素对胃癌细胞BGC-823的生长调控作用

目的:观察蛙皮素(BBS)对人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用,测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量、蛋白激酶C(PKC)活性及PKC亚型的表达,探讨受体后信息传导途径。方法:BGC-823细胞在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、5%CO2条件下培养,分别加入不同浓度的BBS,应用MTT法观察细胞的增殖程度;应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量;应用[γ-32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性;应用Westernblot方法分析PKC亚型α、β1、β2及ε的表达。结果:BBS能促进BGC-823细胞的生长,且与剂量呈正相关(r=0.747,P<0.05);BBS能促进细胞内cAMP的产生及PKC活性的增加,PKCα表达明显增加,而β1、β2及ε则无明显表达。结论:BBS对胃癌细胞BGC-823的生长、细胞内cAMP产生及PKC活性增加有重要作用。     

蛋白激酶C在高葡萄糖诱导肾小球系膜细胞核转位信号中的作用

目的探讨肾小球系膜细胞中高葡萄糖对c-fos、c-Jun核转位及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响是否为蛋白激酶C(PKC)活化所介导.方法原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(5.5mmol/L D-葡萄糖),高葡萄糖组(25mmol/L D-葡萄糖)和d-α-生育酚预处理的高葡萄糖组.观察干预后24、48、72h原位PKC活性、c-fos、c-Jun核蛋白水平及细胞核MAPK活性.结果高葡萄糖负荷肾小球系膜细胞24h,原位PKC活性、细胞核c-fos、c-Jun蛋白水平及MAPK活性均与正常对照组无显著性差异(P>0.05),而48h后,原位PKC活性、细胞核MAPK活性及c-Jun核蛋白水平均较正常对照组显著升高,但c-fos核蛋白含量在72h后降至正常水平.d-α-生育酚预处理可阻止高葡萄糖诱导的PKC激活,细胞核c-fos、c-Jun核蛋白高表达及胞核MAPK活化.结论高葡萄糖可诱导肾小球细膜c-fos、c-Jun核转位和细胞核MAPK活化,此可能为PKC活化所介导,d-α-生育酚可通过抑制PKC激活而阻止高葡萄糖对PKC下游核转位信号的影响.     

黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

目的:探讨黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法:收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24 h后,用雷公藤甲素损伤大鼠卵巢颗粒细胞;干预组添加终浓度分别为50、100、200μmol/L的黄芩素,对照组添加相同体积的二甲基亚砜(DMSO)溶液,继续培养24 h(或以上)。采用MTT法测定卵巢颗粒细胞活力,流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡,Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白的表达情况;测定各组卵巢颗粒细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,评价抗氧化能力。结果:雷公藤甲素可显著降低大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导细胞凋亡,并使SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量增加;雷公藤甲素处理细胞的同时添加黄芩素干预后,卵巢颗粒细胞相对活力增加,细胞凋亡减弱,胞内SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低。Western blot结果显示,经过雷公藤甲素处理,卵巢颗粒细胞中促凋亡蛋白Bax表达量显著上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低;黄芩素干预后可以显著下调Bax表达量,上调Bcl-2表达量。结论:黄芩素可明显改变卵巢颗粒细胞的抗凋亡及抗氧化能力,对雷公藤甲素诱导的细胞凋亡起保护作用。     

美乐托宁对ox-LDL诱导的人脐静脉血内皮祖细胞增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨美乐托宁(melatonin,Mel)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响.方法:密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7 d后,贴壁细胞分成7组:对照组以RPMI1640培养液培养;ox-LDL各浓度组(共3组)分别用含5,10,20 mg/L ox-LDL的RPMI 1640培养液孵育;Mel各浓度组(共3组)分别先用含0.5,1.0,2.0 mmol/L Mel的RPMI 1640培养液培养24h,然后移去含Mel的RPMI 1640培养液,加入含10 mg/L ox-LDL的RPMI 1640培养液孵育.采用MTT法检测EPC增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;提取细胞RNA,采用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测Bcl-2 mRNA表达;采用免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白表达水平.结果:ox-LDL呈浓度依赖性抑制EPC增殖,诱导EPC凋亡;在加ox-LDL(10 mg/L)前加Mel干预,EPC增殖能力较ox-LDL组明显增强,细胞凋亡率明显降低;RT-PCR和免疫细胞化学法检测显示,ox-LDL组EPC的Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显低于对照组,Mel组明显高于ox-LDL组(P＜0.01).结论:ox-LDL呈浓度依赖性诱导EPC凋亡、抑制EPC增殖,Mel能抑制ox-LDL的上述作用,其机制与上调Bcl-2表达有关.     

生长抑素对人胃癌细胞BGC-823生长的调控作用

目的观察生长抑素对人体分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用，测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量及蛋白激酶c（PKC）活性，探讨受体后信息传导途径。方法BGC-823细胞在合10％小牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5％CO2条件下培养，分别加入不同浓度的生长抑素，应用MTT法观察细胞的增殖程度。应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量，应用[γ-^32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性。结果生长抑素能抑制BGC-823细胞的生长，且与剂量呈正相关。生长抑素能抑制细胞PKC活性，而对细胞内cAMP生成无明显影响。结论1、生长抑素能抑制胃癌细胞BGC-823的生长。2、生长抑素可降低PKC活性，提示其受体后信息传递途径可能涉及DG-PKC系统。     

登革病毒感染对人血管内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的:研究登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响.方法:原代分离、纯化、培养人HUVEC细胞,用生长良好的2～3代细胞进行实验.分别用病毒感染复数(MOI)为1、2、4、8、16的DV2病毒液感染HUVEC,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,应用细胞计数试剂-8(CCK-8)法测定DV2感染前和感染后6、12、24、48、72和96 h的细胞活性.另以MOI=2的DV2病毒液感染细胞,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,于感染后6、12、24、48、72、96 h分别收集病毒感染的HUVEC,采用流式细胞术测定细胞表面VCAM-1表达水平;采用RT-PCR法检测细胞中VCAM-1 mRNA转录水平.结果:当病毒MOI=2时对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染可以促进HUVECs中VCAM-1 mRNA的转录,96 h内均有增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).其中,正常状态下HUVEC基本无VCAM-1 mRNA转录,感染12 h达到最高峰,12～48 h表达量显著高于其他时间(P<0.05).DV2 感染HUVEC后, VCAM-1蛋白表达在12～72 h显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:DV2感染上调HUVEC的VCAM-1 mRNA转录和蛋白表达.这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一.     

血清饥饿诱导胃癌SGC-7901细胞内质网应激介导上皮间质转化的发生

目的探讨血清饥饿诱导的胃癌SGC-7901细胞发生内质网应激(ERS)能否介导上皮间质转化(EMT)。方法无胎牛血清的RPMI 1640培养基培养胃癌SGC-7901细胞0、3、6、12、24 h,RT-PCR、Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达;取GRP78高表达时间点诱导,RT-PCR、Western blot法同时检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达;细胞划痕试验观察饥饿诱导SGC-7901细胞的侵袭能力。结果无胎牛血清的RPMI 1640培养基培养6 h的SGC-7901细胞高表达GRP78(P<0.05);与此同时,饥饿组E-cadherin表达较对照组下降(P<0.05)而N-cadherin表达高于对照组(P<0.05)。划痕试验可见饥饿组细胞较对照组划痕宽度愈合速度快。结论饥饿诱导的ERS可介导胃癌细胞发生EMT,进而促进胃癌侵袭转移。     

12-脂肪氧化酶抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的: 探讨12-脂肪氧化酶(12-LOX)抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其对survivin基因表达的影响。 方法: 对人肝癌细胞株HepG2进行细胞培养，取指数生长期细胞设对照组、12-LOX抑制剂组（baicalein 20、40和80 μmol•L^-1组），加试剂后继续培养72 h。透射电镜观察抑制剂组和对照组细胞形态。RT-PCR法分别检测实验组和对照组肝癌细胞12-LOX mRNA的表达情况。MTT 法检测细胞增殖情况。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。RT-PCR法检测survivinmRNA的表达。结果: 人肝癌细胞株HepG2中存在12-LOX mRNA的明显表达，baicalein干预后，12-LOXmRNA表达量明显减弱。透射电镜下发现，对照组细胞胞核和细胞器亚微结构清晰，核膜完整；而经baicalein处理后，凋亡细胞增多，而且同一电镜切片中可以观察到不同时期的凋亡形态学改变，并可见坏死细胞及细胞碎片。MTT显示大致呈时间-剂量依赖性抑制细胞增殖，细胞存活率随着baicalein给药后时间的延长和给药浓度的增加而逐渐下降(P<0.05)；baicalein 干预后HepG2细胞提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳，可见梯形条带，而对照组未出现梯形条带。12-LOX抑制剂baicalein可降低HepG2细胞中survivin表达，并呈浓度-时间依赖性。结论： 12-LOX抑制剂能诱导人肝癌细胞HepG2的细胞凋亡，其诱导细胞凋亡的机制可能与下调抗凋亡基因survivin的表达有关。     

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的 探讨奥曲肽（Octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用。方法 采用MTT比色分析法分别测定OCT对生长于无血清培养基及含10％胎牛血清（FBS）培养基中MKN45细胞的调控作用。结果 OCT10^-2,10^-3,10^-4g/L对培养于无血清培养基中的MKN45的生长均有抑制作用，以10^-3g/L浓度的抑制作用最显著，为10．4％；而OCT10^-2,10^-3,10^-4,10^-5,10^-6g/L对生长于含10％FBS培养基中的MKN45均未显示出抑制作用。结论 OCT可抑制无血清培养基中的MKN45的生长。胎牛血清中可能含有可快速降解OCT的肽酶，使得OCT未显示出对生长于含10％FBS培养基中的MKN45的抑制作用。     

Effects of Leptin on Expression of Acyl-coenzymeA：Cholesterol Acyltransferases-1 in Cultured Human Monocyte-macrophages

Ithasbeenshownthatmonocytemacrophagesplayacrucialroleinthedevelopmentofatherosclerosis(AS).Thepresenceoflipidladenfoamcellsisoneofthepathologicalhallmarksofatherosclerosis.Itiswellknownthatmonocytemacrophageisasignificantsourceoffoamcellsinatherosclerotic…     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

小牛血清浓度对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性及端粒酶活性抑制剂实验结果影响

目的　了解小牛血清 (FBS)浓度胃癌SGC - 790 1细胞端粒酶活性及端粒酶抑制剂实验结论影响。方法　取用不同浓度新生小牛血清培养的SGC - 790 1细胞和收集高浓度 (40×IC50 )顺铂分别作用于含 1 0 %、2 0 %新生小牛血清培养 4h、2 8hSGC - 790 1细胞 ,用TRAP—ELISA法测定收集细胞端粒酶活性。结果　含不同小牛血清浓度培养液培养SGC - 790 1细胞端粒酶活性不同 ,高浓度顺铂能抑制不同浓度小牛血清培养的SGC - 790 1细胞端粒酶活性。结论　小牛血清浓度对端粒酶活性有影响 ,端粒酶活性随小牛血清浓度增加而增加 ,但不影响端粒酶抑制剂实验结论     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

Effect of Calmodulin and Voltage-dependent Ca~(2+) Channel on the Proliferation of Heptoma Cells Induced by Epidermal Growth Factor

Epidermal growth factor(EGF) has been impli-cated as a hepatotrophic factor during liver regenera-tion.EGF plays a role in the proliferation of hep-atoma cells.In general,EGF induces tumor cells di-vision and proliferation through a series of signaltransduction by binding with EGF receptor(EGFR)and activate its thyrosine protein kinase and therebyinducing phosphoration of itself and its protein sub-strate[1] .This postreceptorsingnal transduction isas-sociated with phosphoylinositolpathw…     

幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用

目的：探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达改变在H. pylori致胃癌中的作用。方法：扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H. pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用real-time PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型CagA+H. pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H. pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 mRNA和蛋白的表达。结果：C/EBPα和Cx43 mRNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 mRNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变：r=0.679;胃癌：r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的 C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论：H. pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。     

大蒜油对胃癌细胞cyclin E表达的抑制作用

目的 研究大蒜油对胃癌细胞cyclin E表达的抑制作用,探讨大蒜油抗肿瘤作用机制.方法 (1)胃腺癌SGC7901细胞在体外常规培养,用免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测细胞转化生长因子α(TGFα)及其受体即表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况.(2)胃腺癌SGC7901细胞先用无血清培养48 h,然后用2.5%低浓度血清培养.在加入TGFα或大蒜油处理,或同时加入TGFα和大蒜油处理后,用免疫荧光染色、FCM检测细胞cyclin E表达的变化.结果 (1)胃癌细胞常规培养48 h后,TGFα和EGFR表达的阳性率分别为46.80%和57.78%.(2)加入30μg/L TGFα作用5 h,cyclin E表达的阳性率增加了7.06%(P＜0.001);加入10%大蒜油作用5 h,cyclin E表达下降了11.75%(P＜0.001);同时加入上述浓度的TGFα和大蒜油作用5 h,与单加TGFα处理比较,cyclin E表达下降了17.11%(P＜0.01),下降程度大于单加大蒜油引起的下降程度.结论 (1)胃腺癌SGC7901细胞表达TGFα和EGFR,具有TGFα自分泌、旁分泌促增殖环路.(2)大蒜油不仅抑制常规培养的胃癌细胞cyclin E表达,而且抑制TGFα刺激的cyclinE表达.提示大蒜油可通过抑制胃癌细胞的TGFα自分泌、旁分泌促增殖环路,发挥抗肿瘤增殖作用.