病毒胸苷激酶基因治疗人胃癌的实验研究

为观察单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）基因治疗系统对胃癌细胞的杀伤作用，将ＨＳＶ－ＴＫｃＤＮＡ定向克隆入逆转录病毒载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中，用ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ法将该ＨＳＶ－ＴＫ基因转染胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１，测定阳性转染细胞（ＳＧＣ－７９０１／ＴＫ）在体内外对ＧＣＶ的敏感性。结果示ＧＣＶ在体外对ＳＧＣ－７９０１／ＴＫ细胞有明显的杀伤作用，其作用呈现剂量和时间依赖性特点，且同时表现出对周围亲代ＳＧＣ－７９０１细胞的杀伤效应（旁观者效应）。体内实验表明ＧＣＶ可抑制ＨＳＶ－ＴＫ阳性胃癌细胞的生长，使已形成的肿瘤逐渐消失。提示逆转录病毒载体介导的ＨＳＶ－ＴＫ基因转移胃癌细胞，配合以ＧＣＶ治疗，是胃癌基因治疗的又一途径。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因转染人肺腺癌细胞A549的体内外实验研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因是一个药敏基因，转导该基因的细胞对非毒性抗病毒药更昔洛韦（ＧＣＶ）或阿昔洛韦（ＡＣＶ）敏感，能被其杀灭。通过探讨该基因转染肺癌细胞后对ＧＣＶ或ＡＣＶ的敏感性，为其进入临床治疗肺癌积累实验资料。本文用电穿孔法将含胸苷激酶（ＴＫ）基因的逆转录病毒载体导入人肺腺癌细胞Ａ５４９，在体内外观察转基因细胞对ＧＣＶ的敏感性。材料与方法合ＴＫ基因的逆转录病毒表达载体ＰＬＸＳＮ－ＴＫ参照文献［１］构建，Ａ５４９细胞购自上海细胞所。新霉素（Ｇ４１８）、四甲基偶氮唑盐（Ｍ…     

老年非杓型高血压病患者内皮素和降钙素基因相关肽含量变化及氨氯地平对其影响

目的探讨老年非杓型高血压病（ＥＨ）患者内皮素（ＥＴ）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）含量变化及氨氯地平对其影响。方法观察氨氯地平治疗老年非杓型ＥＨ患者疗效及其治疗前后ＥＴ和ＣＧＲＰ含量变化。结果老年非杓型ＥＨ患者血浆ＥＴ水平明显高于老年杓型ＥＨ患者,而ＣＧＲＰ则明显降低;氨氯地平使老年非杓型ＥＨ患者白昼及夜间血压下降,治疗后老年非杓型ＥＨ患者血浆ＥＴ水平降低,而ＣＧＲＰ明显升高。结论ＥＴ及ＣＧＲＰ参与了老年非杓型ＥＨ的病理过程,氨氯地平是一种治疗老年非杓型ＥＨ患者有效药物,能纠正老年非杓型ＥＨ患者ＥＴ与ＣＧＲＰ之间的失衡。     

共刺激PBLs作用肝癌细胞TCR Vβ基因表达与PTK活性

目的探讨在Ｔ细胞活化信号传递中特异性识别和杀伤肝癌抗原的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族的表达特征,及与蛋白质酪氨酸激酶（ＰＴＫ）活性的关系．方法用单克隆抗体ＣＤ２８＋Ｂ７１（ＣＤ８０）共刺激正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）,用ＲＴＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因表达特征及ＰＴＫ含量．结果ＴＣＲＶβ７基因在体外选择性扩增,ｄ４表达水平最高,为２４％,对照组为６％,相应地ＰＴＫ的含量也较高,为５８％,对照组为１１％．结论Ｖβ７基因特异性识别肝癌抗原,并介导ＰＴＫ信号转导途径的激活     

老年非杓型高血压病患者内皮素和降钙素基因相关肽含量变化及 …

目的 探讨老年非杓型高血压病（ＥＨ）患者内皮素（ＥＴ）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）含量变化及氨氯地平对其影响。方法 观察氨氯地平治疗老年非杓型ＥＨ患者疗效及其治疗前后ＥＴ和ＣＧＲＰ含量变化。结果 老年非杓型ＥＨ患者血浆ＥＴ水平明显高于老年杓型ＥＨ患者,而ＣＧＲＰ则明显降低;氨氯地平使老年非杓型ＥＨ患者白昼及夜间血压下降,治疗后老年非杓型ＥＨ患者血浆ＥＴ水平降低,而ＣＧＲＰ明显升高。结论 ＥＴ及Ｃ     

逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疮疹病毒－胸苷激酶（herpes simplex virus type Ⅰthymidine kinase gene,ＨＳＶ－ＴＫ）基因治疗实验性人胰腺癌细胞系８９８８的价值。方法 ＨＳＶ－ＴＫ被定向克隆入逆转录病毒载体pＭＮＤＭ的ＤＶ４０下游。重组逆转录病毒包装细胞ＰＡ３１７细胞,产生的重组病毒将ＨＳＶ－ＴＫ转入人胰腺癌细胞系８９８８细胞内。结果 Ｓorthern blot试验及药敏试验均证实ＨＳＶ－ＴＫ基因已整合至细     

老年急性脑梗塞患者血脂及血液流变学变化分析

目的研究老年急性脑梗塞患者血脂及血液流变学变化特点，并分析二者的相关性。方法７６例老年急性脑梗塞患者，测定全血粘度（ＢＶ）、血浆粘度（ＰＶ）、血小板聚集率（ＰＡｇｔ）、凝血酶时间（ＴＴ）、凝血酶原时间（ＰＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）、脂蛋白（ａ）［ＬＰ（ａ）］、载脂蛋白（Ａｐｏ）Ａ１、Ｂ、Ｅ。结果ＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＬＰ（ａ）、ＡｐｏＡ、ＡｐｏＢ各项在急性脑梗塞组与对照组之间比较均有显著性差异，ＢＶ、ＰＶ、ＰＡｇｔ均较对照组明显升高。ＢＶ及ＰＡｇｔ分别与ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ呈显著正相关，与ＨＤＬ呈显著负相关。结论血脂异常、高凝与高粘度血症构成了老年脑梗塞发病的重要环节，血脂的变化与血液流变学及凝血的改变密切相关     

氟中毒患者体内微量元素,抗氧化物质,脂类及其相互关系

山东梁山县水源型氟中毒病区，选氟斑牙患４０例，氟骨症患３７例，以两组年龄，性别与患对应的非病区健康农民为对照，检测体内Ｆ、Ｓｅ，Ｚｎ，Ｃｕ等元素，ＧＳＨ－Ｐｘ，ＳＯＤ。ＶＥ等抗氧化物质中Ｌｐｏ以及血脂，脂蛋白，载脂蛋白。结果氟中毒患体Ｆ，Ｚｎ，Ｚｎ／Ｃｕ升高，Ｓｅ降低，ＧＳＨ－Ｐｘ，ＳＯＤ，ＶＥ，ＧＳＨ－Ｐｘ／Ｌｐｏ，ＳＯＤ／Ｌｐｏ降低，Ｌｐｏ升高；以及Ｔｅ，ＴＧ，ＬＤＬ－Ｃ，ａｐｏ－Ｂ１     

丙型肝炎病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及初步纯化

ＨＣＶＥ２抗体在慢性ＨＣＶ感染中有较高的检出率（８０％～９７％）,与病毒血症密切相关,抗体滴度与病毒复制、ＨＣＶＲＮＡ的滴度相关。本研究在大肠杆菌中高效表达了ＨＣＶＥＺ蛋白,并进行了蛋白的初步纯化。用分子克隆技术,将ＨＣＶＥ２基因连接到非融合蛋白的原核表达载体ＰＫＫ２２３－３上,并转化大肠杆菌,经扩大培养,提取质粒进行酶切鉴定而获得含有Ｅ２基因的阳性克隆（ｐＫＫＥ２）。挑取Ｅ２阳性克隆单个苗落接种于１ｍｌ培养基中,３７℃振摇培养,细菌生长至对数生长期时,加入ＩＰＴＧ诱导Ｅ２蛋白表达５小时。离心去…     

银杏叶抗氧化和抗脂质过氧化损伤效应的探讨

目的探讨银杏叶抗氧化和抗脂质过氧化损伤的效应。方法检测７８例心绞痛患者经银杏叶制剂天保宁治疗前后的血浆维生素Ｃ（Ｐ－ＶＣ）、维生素Ｅ（Ｐ－ＶＥ）、β－胡萝卜素（Ｐ－β－ＣＡＲ）、过氧化脂质（Ｐ－ＬＰＯ）和红细胞超氧化物歧化酶（Ｅ－ＳＯＤ）、过氧化氢酶（Ｅ－ＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（Ｅ－ＧＳＨ－ＰＸ）、过氧化脂质（Ｅ－ＬＰＯ）值，在Ｃｏｍｐａｑ５８６微机上用ＳＰＳＳ／ＰＣ＋统计软件包分析处理。结果与治疗前比较，治疗后的Ｐ－ＶＣ、Ｐ－ＶＥ、Ｐ－β－ＣＡＲ、Ｅ－ＳＯＤ、Ｅ－ＣＡＴ、Ｅ－ＧＳＨ－ＰＸ平均值皆显著升高（Ｐ＜０．０１），Ｐ－ＬＰＯ、Ｅ－ＬＰＯ平均值皆显著降低（Ｐ＜０．０１）；且均与对照组无显著差异（Ｐ＞０．０５）。结论心绞痛患者体内病理性氧化反应和脂质过氧化反应在治疗后明显减缓，银杏叶制剂具有较强的抗氧化损伤和抗脂质过氧化损伤的作用     

小儿病毒性心肌炎的氧自由基变化及其相关因素

对６１例病毒性心肌炎（ＶＭＣ）患儿检测了ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＭＤＡ。发现ＶＭＣ患儿发病１周内ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ下降,ＭＤＡ升高;经大剂量维生素Ｃ治疗后,ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＭＤＡ于４～６周恢复正常。ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ与ＣＫ－ＭＢ呈负相关;与ＥＦ、ＦＳ呈正相关;ＭＤＡ与ＣＫ－ＭＢ呈正相关,与ＧＳＨ－ＰＸ、ＳＯＤ呈负相关。ＭＤＡ升高与否和心电图ＳＴ－Ｔ改变有关,ＧＳＨ－ＰＸ、ＳＯＤ降低与否和心     

甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）和极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｉｏｎ，ＶＬＤＬ）对大鼠肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌａｔｅｃｅｌ，ＨＳＣ）增殖的影响。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流，Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠ＨＳＣ，并以ＭＴＴ比色法观察ＴＧ和ＶＬＤＬ对ＨＳＣ增殖效应。结果ＴＧ和ＶＬＤＬ可影响ＨＳＣ的增殖，ＴＧ和ＶＬＤＬ浓度分别在１２５ｍｇ／Ｌ和（２５～１００）ｍｇ／Ｌ时对ＨＳＣ增殖有促进作用（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。结论体外细胞培养表明，ＴＧ和ＶＬＤＬ可促进ＨＳＣ增殖，其与脂肪肝肝纤维化的发生可能有关。     

血管紧张素原M235T基因多态性对血压影响的研究

目的：研究血管紧张素原基因（ＡＧＴ）第二外显子Ｍ２３５Ｔ等位基因的多态性与高血压之间的关系。方法： 应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性酶切方法对１０５例健康体检者与１０２例原发性高血压（ＥＨ）患者进行基因突变的检测。结果：（１）ＥＨ患者Ｔ２３５ 等位基因频率（０．４４５）高于对照组（０．３２３）,Ｐ＜ ０．０５。在男性ＥＨ患者与男性对照组中差别更为明显（Ｐ＜ ０．０１）;（２）在有家族史的ＥＨ 患者中,Ｍ２３５Ｔ 突变基因型（ＴＴ型）频率高于正常对照组（４２．１％ ＶＳ１８．８％ ,Ｐ＜０．０５）。结论：（１）ＡＧＴ基因的突变与ＥＨ的发病具有相关性。对男性ＥＨ影响可能更大;（２）在有家族史的高血压患者中, ＡＧＴ２３５的ＴＴ基因型与ＥＨ有关     

38例高血压病患者血脂与胰岛素抵抗

对３８例高血压病（ＥＨ）患者及２４例正常人空腹血清胰岛素（Ｉｎｓ）、Ｃ肽（ＣＰ）、血糖（ＳＧ）、甘油三酯（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）及载脂蛋白（Ａｐｏ）含量进行测定，并推算胰岛素敏感指数（ＩＳＩ）。结果ＥＨ组Ｉｎｓ、ＣＰ升高，但ＩＳＩ显著降低，表明ＥＨ患者存在胰岛素抵抗（ＩＲ）。同时伴有ＴＧ、ＴＣ、ＡｐｏＢ１００、脂蛋白（ａ）［ＬＰ（ａ）］升高，ＨＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＡＩ降低。相关分析表明，ＥＨ患者Ｉｎｓ与ＴＧ、ＡｐｏＢ１００、ＬＰ（ａ）呈显著正相关，与ＨＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＡＩ呈显著负相关。ＩＳＩ与ＴＧ、ＡｐｏＢ１００呈显著负相关，提示ＥＨ患者ＩＲ可能是影响脂代谢的重要因素之一。     

HLA部分不相合异基因外周血干细胞移植造血重建

目的：了解ＨＬＡ部分不相合异基因外周血干细胞移植（ＡＬＬｏ－ＰＢＳＣＴ）后造血功能重建情况,及在发生严重移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）时对造血功能的影响。方法：对患者移植后的血象、骨髓象,生化指标进行动态观察并分析结果。结果：移植后,＋ １３ ｄ 白细胞达２．２×１０９／Ｌ;＋ ２０ ｄ 骨髓增生活跃;＋ ４６ ｄ ＡＢＯ 血型、ＭＮ 血型、ＨＬＡ表型、ＨＬＡ ＤＮＡ分型均转为供型者,显示移植物植入成功。＋ １０ ｄ 开始出现ＧＶＨＤ征象,＋ ２９ ｄ 达ＧＶＨＤⅢ度,经用马抗人胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）、ＣＤ３ 单抗、ＣＤ２５单抗后,症状消失。同时造血功能明显受抑。结论：①ＡＬＬｏ－ＰＢＳＣＴ造血重建过程中,应用Ｇ－ＣＳＦ可促使移植干细胞加快分化、增殖。②发生严重ＧＶＨＤ后,用ＡＴＧ等药物抑制Ｔ细胞,同时减少Ｔ细胞分泌ＧＭ－ＣＳＦ等相关细胞因子,致造血功能受抑制。     

老年矽肺与一氧化氮及氧化和抗氧化的关系

目的探讨老年矽肺与一氧化氮（ＮＯ）及氧化和抗氧化的关系。方法检测８５例矽肺患者和８０例对照者的血浆一氧化氮（ＰＮＯ）、维生素Ｃ（ＰＶＣ）、维生素Ｅ（ＰＶＥ）、β胡萝卜素（ＰβＣＡＲ）及红细胞超氧化物歧化酶（ＥＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＥＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＥＧＳＨＰＸ）值。结果与对照组比较,患者组ＰＶＣ、ＰＶＥ、ＰβＣＡＲ、ＥＳＯＤ、ＥＣＡＴ、ＥＧＳＨＰＸ均值显著降低、ＰＮＯ均值显著升高（Ｐ＜００１）;直线回归和相关分析表明上述各检测值与患者病程均有相关,逐步回归表明患者病情、肺功能状态与ＰＮＯ、ＰＶＥ、ＥＳＯＤ值相关最密切。结论老年矽肺患者ＮＯ代谢异常,氧化抗氧化平衡严重失调。     

逆转录病毒介导的HSV-tk/GCV对肝癌细胞的影响

目的观察单纯疮疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）自杀基因治疗系统在体内外对人肝癌的杀伤效应。方法构建携带ＨＳＶ－ｔｋ基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染人肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,筛选稳定表达ｔｋ的细胞克隆ＨＣＣ９２０４／ｔｋ,并测定其在体外对ＧＣＶ的敏感性;ＨＣＣ９２０４／ｔｋ细胞在裸鼠皮下成瘤,用ＧＣＶ治疗并观察疗效。结果ＧＣＶ在体外对ＨＣＣ９２０４／ｔｋ细胞有明显的杀伤作用和旁杀伤效应,裸鼠体内ｅｘｖｉｖｏ实验得到相似结果,在体内外对未转染细胞则无明显毒性．结论在ｉｎｖｉｔｒｏ水平（指完全体外）和ｅｘｖｉｖｏ水平（指一部分体外一部分体内）,表达ＨＳＶ－ｔｋ基因的肿瘤细胞均可被ＧＣＶ有效杀伤,逆转录病毒介导的ＨＳＶ—ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因治疗系统有可能成为肝癌的有效治疗方法。     

胺碘酮:我们从多项临床试验中取得什么教益?

心肌梗死后用胺碘酮的临床试验有ＥＭＩＡＴ和ＣＡＭＩＡＴ。两者均反映胺碘酮减少心律失常但不降低总死亡率。ＣＨＦ/ＳＴＡＴ中 ,心衰病人用胺碘酮对生存率的影响为中性 ,在ＣＥ ＳＩＥＡ中 ,其改善生存率。ＭＡＤＩＴ研究反映非持续性室性心动过速 (ＶＴ)病人 ,用埋藏式心脏转复除颤器 (ＩＣＤ)与抗心律失常药物 (大部分服胺碘酮 )比较 ,能改善生存率。ＣＡＳＣＡＤＥ试验显示 ,持续性ＶＴ/ＶＦ病人服胺碘酮减少心律失常复发率优于由系统Ｈｏｌｔｅｒ或电生理研究指导的其他药物治疗。ＡＶＩＤ、ＣＩＤＳ、ＣＡＳＨ等几项临床试验显示Ｉ…     

肺癌的基因治疗

尽管肺癌治疗已经取得了很大进步 ,但在许多国家 ,它仍然是一个重要的死亡原因。因此 ,近年来已花费了很多人力物力探讨新的治疗方法 ,并研究是否可将基因治疗应用于肺癌。肺癌相关的基因治疗策略主要可分为 4个方面 ,即引入自杀基因 ,替代缺陷的抑癌基因 ,灭活癌基因和免疫治疗。一、引入自杀基因自杀基因是一类编码药物酶的基因 ,其产物酶可将毒性反应小的药物前体转化为毒性大的 ,可产生抗肿瘤作用的代谢产物。临床试验中最广泛应用的基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶 (ＨＳＶＴＫ)。将这一基因引入肿瘤细胞内后 ,再给患者注射药物环核苷丙氧…     

冠心病患者内皮细胞损伤后的功能变化及卡托普利的干预作用

本文通过对４８例冠心病（ＣＨＤ）患者外周血循环内皮细胞（ＣＥＣ）、内皮素（ＥＴ）、血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）和前列环素（ＰＧＩ２）代谢产物６－酮类固醇－前列腺素Ｆ１ａ（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）的测定，以了解ＣＨＤ患者血管内皮细胞（ＶＥＣ）的损伤情况及功能变化，并与正常人及卡托普利（Ｃａｐ）治疗前后进行对比。结果显示：ＣＨＤ患者血浆ＣＥＣ、ＥＴ、ＡＣＥ明显高于正常；６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ则明显低于正常，且与病情严重程度相一致。ＣＥＣ与ＥＴ、ＡＣＥ呈显著正相关；与６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ呈显著负相关。通过Ｃａｐ治疗后上述指标明显改善，治疗前后及与对照组比较有非常显著意义（Ｐ＜０．０１），提示Ｃａｐ对ＣＨＤ患者的ＶＥＣ损伤有较好的保护和治疗作用。