罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响

目的 观察罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭性的影响。方法 将体外培养的MDA-MB-231细胞分为实验组和对照组。实验组细胞用不同浓度罗勒多糖（100、300μg/mL）处理,对照组不加任何刺激因子。Transwell小室检测细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的表达。结果 ①罗勒多糖可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭力（P<0.01）;②罗勒多糖抑制MT1-MMP分子的mRNA表达（P<0.05）及下调其蛋白表达水平。③罗勒多糖对MMP-2及MMP-9分子的mRNA表达无影响。结论 罗勒多糖可通过下调MT1-MMP的表达抑制MDA-MB-231细胞的侵袭。     

槲皮素体外抑制乳腺癌细胞侵袭转移及相关机制

目的 探讨槲皮素对高转移性人乳腺癌细胞MDA-MB-435S侵袭能力的影响及其相关机制.方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S以12.5、25、50、100和200μM终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞生长与增殖的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化;RT-PCR法及Western blot法分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 经槲皮素处理后,人乳腺癌细胞MDAMB-435S体外增殖及侵袭能力均明显下降,MMP-9 mRNA和蛋白表达亦明显下调,且均与药物剂量呈正相关.结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的侵袭力,其机制可能与下调该细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达有关.     

转染CTGF基因对乳腺癌细胞MMP－2及TIMP－2表达的影响

目的: 通过研究结缔组织生长因子（CTGF）基因对人乳腺癌MCF-7细胞株基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响,深入探讨CTGF在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法: 采用脂质体介导法,将CTGF基因瞬时转染体外培养的人MCF-7细胞,并用免疫荧光、RT-PCR和蛋白质印迹法检测其转染成功与否;再采用蛋白质印迹法检测转基因MCF-7 MMP-2及TIMP-2表达改变。结果: 与对照组相比,转染CTGF基因的MCF-7,其CTGF mRNA和蛋白表达均显著增高,MMP-2蛋白表达水平显著增高,而TIMP-2蛋白表达水平显著降低。 结论: CTGF可能通过增加乳腺癌细胞MMP-2表达及抑制TIMP-2的生成而起到促进乳腺癌侵袭和转移的作用。     

BRG1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制探讨

目的探讨沉默BRG1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法体外化学合成BRG1小干扰RNA（siRNA）和Control siRNA（si—Ctr1）,脂质体介导转染乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞,Transwell迁移实验和侵袭实验观察沉默BRG1基因对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）变化,Westernblot检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2）及MMP-2蛋白表达。结果转染BRG1 siRNA可以有效减少乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞BRG1的表达,细胞迁移和侵袭能力下降。BRG1沉默后TIMP-2表达升高,MMP-2表达下降且酶活性降低。结论BRG1沉默后通过上调TIMP-2抑制MMP-2的表达,破坏TIMP-2／MMP-2平衡,最终抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。     

Cullin1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的研究Cullin1(Cul1)基因对乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响,并探讨其具体分子作用机制.方法体外化学合成Cul1 siRNA和Control siRNA(si-Ctrl)序列,转染乳腺癌MDA-MB-231和BT-549细胞,细胞迁移和侵袭实验观察抑制Cul1的表达对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;明胶酶谱实验检测Cul1对2种乳腺癌细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;Western blot实验观察Cul1对2种乳腺癌细胞中金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)及MMPs蛋白表达的影响.结果抑制Cul1的表达可以明显降低2种乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;Cul1的表达降低可以抑制2种乳腺癌细胞分泌MMP-2;抑制Cul1的表达可以通过上调TIMP-2的蛋白表达而抑制MMP-2的蛋白表达.结论抑制Cul1的表达可以通过上调TIMP-2的表达从而抑制MMP-2的表达,打破了TIMP-2/MMP-2的平衡,最终抑制了乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

上调SHI-1细胞金属蛋白酶组织抑制剂-2的表达对细胞侵袭力的影响

目的研究上调SHI-1细胞金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2的表达对SHI-1细胞侵袭力的影响。方法实时定量PCR检测SHI-1细胞的TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2的mRNA表达,Western blot检测蛋白表达。构建TIMP-2逆转录病毒载体,转染SHI-1细胞,有限稀释法挑选出单克隆细胞S1、S2、S3。跨膜侵袭实验观察细胞侵袭力。建立裸鼠白血病模型,留取各脏器病理切片,观察人白血病细胞在各脏器中的浸润;RT-PCR检测裸鼠各脏器中人白血病细胞MLL/AF6融合基因表达。结果 SHI-1细胞TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2的mRNA表达和蛋白表达以及它的体外侵袭率均高于其他细胞株（均P〈0.05）。单克隆细胞S1、S2、S3体外侵袭率增加了1.5~2.5倍（P〈0.05）。S1、S2和S3组裸鼠较SHI-1组发病时间提前、生存期缩短（P〈0.05）。各组裸鼠多脏器病理切片均出现明显的白血病细胞浸润。各组裸鼠体内多脏器均扩增出MLL/AF6融合基因,且S1、S2和S3组裸鼠脏器累及多于SHI-1组（P〈0.05）。结论 SHI-1细胞在mRNA和蛋白水平高表达MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2;上调TIMP-2增强了SHI-1细胞体内外的侵袭力。     

MMP-2、MMP-9在高、低转移潜能乳腺癌细胞中的表达变化

目的 筛选高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotainese,MMP-2)、MMP-9在高、低转移潜能乳腺癌细胞的表达差异及其意义.方法 利用人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s细胞在Transwell小室上连续穿透人工基质膜获得高、低转移潜能乳腺癌细胞株.用细胞侵...     

MMPs及TIMP在垂体腺瘤中的表达及与侵袭性关系

目的：探讨基质金属蛋白酶（MMPs）中MMP-2,MMP-9及MMP-2的抑制物TIMP-2在垂体腺瘤中的表达及其与垂体腺瘤侵袭性的关系。方法：应用免疫组化和逆转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）检测侵袭性腺瘤组（n=20）和非侵袭性腺瘤组（n=10）的组织标本中的MMP-2,MMP-9与TIMP-2在蛋白质和mRNA水平上的表达,分析三者与垂体腺瘤侵袭性的关系。结果：侵袭性垂体腺瘤组的MMP-9 蛋白和mRNA表达均较非侵袭性腺瘤组增高（均P<0.01）,而TIMP-2 蛋白和mRNA表达则下降（分别P<0.01和P<0.05）。侵袭性腺瘤组中MMP-2与TIMP-2的mRNA表达水平成负相关（r=-0.471,P<0.05）。结论：垂体腺瘤侵袭性与MMP-2,9表达增高及TIMP-2表达降低有关。临床上可将检测MMP-9或TIMP-2作为垂体腺瘤侵袭性的评估指标。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对洋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕，早孕蜕膜细胞的方法制备DCM，然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞，用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2，MMP-9，基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1），尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA)mRNA均有表达；而TIMP-2，纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1)mRNA未见表达，早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2，MMP-9，uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕，晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2，MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡，而影响滋养细胞的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMPs/TIMPs表达的影响

目的研究蜕膜细胞条件培养液(decidual conditioned media,DCM)中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达的影响。方法原代培养早孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM及分别加入TNF-α及EGF抗体的DCM处理COC1,利用RT-PCR法对COC1侵袭基因MMPs/TTMPs的表达进行分析。结果COC1表达MMP-2,TIMP-2,而不表达MMP-9,TIMP-1。早孕EGF-Ab组与对照组(DCM组)比较,前者可以使COC1的MMP-2 mRNA表达降低,且差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组可以降低MMP-2 mRNA的表达,但与对照组比较差异无显著性(P=0.280)。与DCM组比较,EGF-Ab组可以使COC1的TIMP-2 mRNA表达增加,两者差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组有增加TIMP-2 mRNA表达,但差异无显著性(P>0.05)。结论早孕DCM中TNF-α可能抑制COC1侵袭力。早孕DCM中EGF可能促进COC1侵袭力。     

LKB1基因与乳腺癌细胞侵袭性相关因子的研究

目的观察LKB1基因对乳腺癌细胞的侵袭性影响及机制。方法筛选LKB1基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株,同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和明胶．酶谱法观察基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和促进微血管生成的因子VEGF、bFGF的基因表达情况,并应用Western印迹对其蛋白定量分析。应用Tramswell试验对其进行膜穿透能力检测。结果LKB1基因转染的乳腺癌细胞的mRNA和蛋白水平上MMP-2、MMP-9和VEGF、bFGF基因表达的相对吸光度（A）值皆低于未转染细胞和空质粒细胞,且LKB1基因高表达细胞株较低表达细胞株更低。同时发现Tramswell试验中LKB1转染的细胞侵袭能力下降（18．1％±1．0％、22．4％±1．8％vs47．6％±1．3％、45．6％±1.2％,均P〈0．01）。结论LKB1基因作为一种抑癌基因对乳腺癌细胞的侵袭性可能起重要作用。     

MMP-2和TIMP-2在甲状腺乳头状癌中的表达及与转移的关系

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-2和金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-2在甲状腺乳头状癌中的表达及其与甲状腺乳头状癌侵袭与转移的关系.方法应用原位杂交技术检测95例甲状腺乳头状癌及59例癌旁组织中MMP-2 mRNA,TIMP-2mRNA的表达水平.用免疫组化S-P法检测上述组织中MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白的表达.结果MMP-2mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为74.7%和77.9%,而在癌旁组织中的阳性率分别为10.2%和25.4%,两者差异有显著性(P＜0.01,P＜0.01).TIMP-2 mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为58.9%和64.29%,而在癌旁组织中的阳性率分别为20.3%和16.9%,两者差异有显著性(P＜001,P＜0.01).结论基质金属蛋白酶MMP-2mRNA和蛋白、TIMP-2mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中呈高表达,MMP-2mRNA和蛋白的表达随甲状腺癌侵袭程度升高、转移而升高,而TIMP-2 mRNA和蛋白的表达随甲状腺癌侵袭程度升高、转移而降低,提示MMP-2和TIMP-2表达失衡与甲状腺乳头状癌侵袭与转移有密切关系.     

Functional expression of voltage-gated sodium channels Nav1.5 in human breast caner cell line MDA-MB-231

Voltage-gated sodium channels （VGSCs） are known to be involved in the initiation and progression of many malignancies, and the different subtypes of VGSCs play important roles in the metastasis cascade of many tumors. This study investigated the functional expression of Nav1.5 and its effect on invasion behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231. The mRNA and protein expression of Nav1.5 was detected by real time PCR, Western Blot and immunofluorescence. The effects of Nav1.5 on cell proliferation, migration and invasion were respectively assessed by MTT and Transwell. The effects of Nav1.5 on the secretion of matrix metalloproteases （MMPs） by MDA-MB-231 were analyzed by RT-PCR. The over-expressed Nav 1.5 was present on the membrane of MDA-MB-231 cells. The invasion ability in vitro and the MMP-9 mRNA expression were respectively decreased to （47.82±0.53）% and （43.97±0.64）% （P〈0.05） respectively in MDA-MB-23 t cells treated with VGSCs specific inhibitor tetrodotoxin （TTX） by blocking Navl.5 activity. It was concluded that Navl.5 functional expression potentiated the invasive behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231 by increasing the secretion of MMP-9.     

基质金属蛋白酶-2及其组织抑制剂和微血管密度在子宫内膜癌中的表达

目的：通过研究基质金属蛋白酶-2（ MMP-2）及其抑制剂（TIMP-2）和微血管密度（MCV）在子宫内膜癌组织中的表达,探讨其与间质微血管密度及与子宫内膜癌浸润、转移的关系。方法：采用SP法检测8例正常子宫内膜和33例子宫内膜癌患者MMP-2、TIMP-2及MVD。结果：MMP-2、TIMP-2及MVD在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中均有表达,且在子宫内膜癌中的表达明显高于正常子宫内膜（P<0.05）,G₁、G₂、G₃不同病理分级表 达差异无显著性（P>0.05）;MMP-2表达随手术病理分期的升高而增强（P<0.05）;TIMP-2在子宫内膜癌中的表达随着肌层浸润程度的增加而表达增强;MVD的表达随着肌层浸润程度的增加表达明显增强（P<0.05）。淋巴结有转移者和无转移者各因子的表 达差异无显著性。结论：MMP-2/TIMP-2之间的动态平衡失调促进了子宫内膜癌的侵袭和转移;肿瘤微血管形成的强度与肿瘤侵袭能力有关,提示血管生成是子宫内膜癌发生浸润、转移的重要条件。     

PDTC联合紫杉醇降低MDA-MB-231细胞增殖侵袭能力

目的探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合紫杉醇(Paclitaxel)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖侵袭能力的影响。方法MTT及FCM法测定细胞增殖和周期变化,RT-PCR检测细胞NF-κB p65 mRNA的变化,Western blot检测细胞NF-κB p65、MMP-9及TIMP-1蛋白表达变化,侵袭、迁移和黏附实验测定细胞侵袭转移能力的改变。结果PDTC联合紫杉醇能明显抑制肿瘤细胞生长(P<0.05),细胞周期阻滞在G1/G0期,并可抵消紫杉醇对NF-κB的激活,使NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05)。PDTC降低MDA-MB-231细胞的侵袭转移能力,与紫杉醇联合应用后作用增强(P<0.01)。结论PDTC联合紫杉醇能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭转移能力,其机制可能与PDTC抑制NF-κB的表达相关。     

Functional Expression of Voltage-Gated Sodium Channels Navl.5 in Human Breast Caner Cell Line MDA-MB-231

Voltage-gated sodium channels (VGSCs) are known to be involved in the initiation and progression of many malignancies,and the different subtypes of VGSCs play important roles in the metastasis cascade of many tumors.This study investigated the functional expression of Nav 1.5 and its effect on invasion behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231.The mRNA and pro-tein expression of Navl.5 was detected by real time PCR,Western Blot and immunofluorescence.The effects of Navl.5 on cell proliferation,migration and invasion were respectively assessed by MTT and Transwell.The effects of Nav1.5 on the secretion of matrix metalloproteases (MMPs) by MDA-MB-231 were analyzed by RT-PCR.The over-expressed Navl.5 was present on the membrane of MDA-MB-231 cells.The invasion ability in vitro and the MMP-9 mRNA expression were respec-tively decreased to (47.82±0.53)% and (43.97±0.64)% (P<0.05) respectively in MDA-MB-231 cells treated with VGSCs specific inhibitor tetrodotoxin (TTX) by blocking Navl.5 activity.It was con-eluded that Nav1.5 functional expression potentiated the invasive behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231 by increasing the secretion of MMP-9.     

ERα基因启动子甲基化状态对乳腺癌细胞系MTA1 mRNA和蛋白表达水平的影响

目的: 探讨乳腺癌细胞系中雌激素受体α(ERα)启动子甲基化状态的改变对其MTA1 mRNA和蛋白表达水平的影响,阐明ERα启动子去甲基化对MTA1基因表达的作用。方法: 用去甲基化药物5-Aza-dC处理ERα启动子高甲基化状态的MDA-MB-435s和低甲基化状态的MDA-MB-231乳腺癌细胞系为5-Aza-dC处理组,同时设 2种细胞系的未处理组为对照组。甲基化特异性PCR(MSP)法检测各组细胞ERα启动子甲基化状态。Western blotting法检测各组细胞MTA1蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组细胞MTA1 mRNA表达水平。结果: 5-Aza-dC逆转了MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系ERα启动子甲基化状态; MDA-MB-435s乳腺癌细胞系中,与对照组比较,5-Aza-dC处理组MTA1 mRNA及蛋白表达水平均下调(P<0.05);MDA-MB-231乳腺癌细胞系中,与对照组比较,5-Aza-dC处理组MTA1 mRNA及蛋白表达水平亦均下调(P<0.05)。结论: 改变MDA-MB-435s和MDA-MB-231乳腺癌细胞系ERα基因启动子甲基化状态后,MTA1 mRNA和蛋白表达均下降,提示ERα启动子去甲基化后可以下调MTA1基因的表达,二者之间存在调控关系。     

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭力的影响

目的 研究重组质粒shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭潜力的影响. 方法通过构建重组质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,运用RT-PCR,Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达;建立体外侵袭模型,测定人乳腺癌细胞株穿透Matrigel的潜力.结果 质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05);3株人乳腺癌细胞穿透Matrigel的能力明显降低(P<0.05).结论 shRNA-CXCR4后能明显降低人乳腺癌细胞的侵袭潜力.     

白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.