干细胞相关基因Oct-4在人肿瘤细胞系中的表达及其意义

目的 探讨干细胞相关基因Oct-4在多种人肿瘤细胞系中的表达.方法 体外培养人胰腺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞系,应用RT-PCR和Western blot法分别检测Oct-4 mRNA和蛋白在各种人肿瘤细胞系中的表达.结果 Oct-4 mRNA和蛋白在胰腺癌细胞系SW1990、PANC1、BxPC3、PC3,宫颈癌细胞系HELA,肝癌细胞系HepG2,乳腺癌细胞系MCF-7和结肠癌细胞系CaCo2中均有表达.结论 干细胞相关基因Oct-4在肿瘤细胞中的表达,一方面说明恶性肿瘤与干细胞具有密切的关系,另一方面也说明Oct-4基因在这些肿瘤的发生中起到重要作用.     

核不均一核糖核蛋白AB的两个剪切体在胰腺肿瘤中的表达差异分析

采用RT-PCR法检测RNA结合蛋白核不均一核糖核蛋白(HNRNP)AB的两个剪接体HNRNPAB1和HNRNPAB2在15株恶性肿瘤细胞系、1株正常胰腺导管上皮细胞系、4株胰腺癌细胞系及17例胰腺肿瘤组织中的表达。结果显示胰腺癌细胞系以HNRNPAB2表达为主,而肝癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌、视网膜恶性肿瘤、乳腺癌细胞...     

胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达

目的分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况。方法应用RT-PCR检测Oct-4mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Westernblot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素(FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率。结果4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4mRNA和Oct-4蛋白。88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4mRNA和Oct-4蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关。Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%。结论Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞。     

胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达

目的 分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况.方法 应用RT-PCR检测Oct-4 mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Western blot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素 (FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率.结果 4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白.88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关.Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%.结论 Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞.     

干细胞相关基因在肝癌细胞系中的表达

目的 了解Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b等干细胞相关基因在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中的表达情况,并比较不同细胞系中各基因量的差异和对全反式维甲酸(tRA)的反应.方法 逆转录聚合酶链反应测定4株人肝癌细胞系中Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b mRNA的表达,实时荧光定量PCR比较不同细胞中各基因量的差异以及对tRA的反应.单因素方差分析比较各基因在不同细胞系中的表达差异.结果 干细胞相关基因Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin和Wnt5b在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中有不同程度的表达(P<0.05);人肝癌细胞系HepG2和正常人肝脏细胞系L02对tRA的反应也存在明显差异(P<0.05).结论 干细胞相关基因在人肝癌细胞系中不同程度的表达,不同肝癌细胞系中这些基因表达有一定的差异,可能与其生物学特性不同有关,人肝癌细胞系HepG2中Oct4和Sox2的表达调控不同于胚胎干细胞.在肝癌细胞中可能存在着Oct4对于Wnt/β-catenin信号转导通路的调节作用.     

放化疗抵抗的胰腺癌细胞中干细胞标志物的表达

目的 观察放化疗抵抗的胰腺癌细胞的Bcl-2、survivin及干细胞标志物Oct-4、ABCG2蛋白表达的变化,探讨这部分肿瘤细胞耐受放化疗的原因.方法 采用同步放化疗干预人胰腺癌细胞系SW1990、BxPC3、pc3、jr305,获得放化疗抵抗的胰腺癌细胞,以不行放化疗处理的细胞作为对照.采用Western blotting检测它们的Bcl-2、survivin、Oct-4和ABCG2蛋白的表达变化.结果 放化疗抵抗的SW1990、BxPC3、pc3、jt305胰腺癌细胞Bcl-2蛋白表达量分别为0.7955±0.0326、0.5718±0.0212、0.6137±0.0382和0.8733±0.0461;survivin蛋白表达量分别为0.8207±0.0490、0.6973±0.021 1、0.7967±0.0346和0.8013±0.0398;Oct-4蛋白表达量分别为0.8728±0.0177、0.7861±0.0139、0.4794±0.0932和0.4216±0.1043;ABCG2蛋白表达量分别为0.7810±0.1370、0.4957±0.1126、0.6102±0.1358和0.4670±0.1274.对照组相应细胞系的4种蛋白表达量分别为0.4723±0.018、0.2954±0.0103、0.3587±0.0201和0.2718±0.0136;0.4717±0.0274、0.3587±0.0113、0.3891±0.0147和0.3326±0.0124;0.6053±0.0142、0.4236±0.0086、0.2385±0.0671和0.1985±0.0582;0.3156±0.0582、0.2360±0.0423、0.2813±0.0512和0.1808±0.0370.放化疗后胰腺癌细胞的4种蛋白表达量均显著增加(P＜0.05).结论 放化疗抵抗的胰腺癌细胞中可能富含肿瘤干细胞.     

胰腺癌细胞中血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达

目的　近年来的研究显示 ,血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1)具有促肿瘤细胞生长和促进肿瘤血管生成作用 ,运用其拮抗剂则具有抑制肿瘤生长作用。对胰腺癌细胞中AT1mRNA和蛋白的表达进行探讨。方法　应用SW 1990、PaTu8988s和PANC 1胰腺癌细胞系。RT PCR方法检测胰腺癌细胞系中AT1mRNA的表达 ;分别用免疫细胞化学染色与SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测胰腺癌细胞系中蛋白的表达。结果　在 3个胰腺癌细胞系中均有AT1mRNA的表达 ;AT1蛋白表达位于细胞膜和细胞质内 ;蛋白电泳也证实 3个人胰腺癌细胞系中均有相对分子质量为 4 4× 10 3 的AT1蛋白的表达。结论　AT1在胰腺癌细胞生长中似乎发挥重要作用 ,抑制AT1可能是一种有用的治疗策略。     

基于生物信息学分析PDE2A基因在消化系统肿瘤预后及免疫浸润的临床意义

背景 消化系统肿瘤是最常见的恶性肿瘤之一,然而其预后仍不好.探索潜在生物标志物是肿瘤研究的重要方向.我们拟利用生物信息学方法探索消化系统的潜在标志物.目的 探究在消化系统肿瘤中PDE2A表达与免疫浸润相关性,探索PDE2A在消化系统肿瘤中的预后价值.方法 通过HPA、TIMER和UALCAN数据库分析PDE2A在不同消化系统肿瘤中的mRNA及蛋白表达,利用GEPIA数据库探索PDE2A在不同消化系统肿瘤患者预后的影响.通过TIMER数据库探索PDE2A表达与不同消化系统肿瘤免疫浸润相关性.利用cB ioP ortal数据库分析PDE2A在不同消化系统肿瘤的遗传突变信息.通过STRING数据库探索PDE2A的潜在蛋白相互作用网络.结果 PDE2A基因mRNA和蛋白在肝癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌和食管癌组织中表达低于正常癌旁组织.PDE2A高表达的肝癌和胰腺癌患者较PDE2A低表达的患者预后良好. PDE2A表达与肝癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌和食管癌不同免疫细胞如CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B细胞、巨噬细胞和中性粒细胞呈正相关或负相关. PDE2A基因在胃癌、胰腺癌、结肠癌及食管癌中存在错义突变等遗传改变.结论 PDE2A表达与消化系统肿瘤免疫浸润有关. PDE2A高表达的肝癌和胰腺癌患者预后良好. PDE2A基因可能为潜在的消化系统肿瘤免疫治疗靶点和预后标志物.     

ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性

目的观察ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性。方法使用肝癌细胞系MHCC97-H、 MHCC97-L、HepG2及正常人肝细胞HL-7702为研究对象,分别采用RT-PCR、Western印迹方法检测ku80 mRNA及蛋白水平;体外划痕实验、Transwell侵袭实验观察4株细胞迁移、侵袭能力;免疫荧光检测ku80亚细胞定位;线性相关分析ku80及其mRNA与肝癌细胞系迁移、侵袭能力的相关性。结果 ku80 mRNA及蛋白在4株细胞系中均有表达,且在3株肝癌细胞中的表达明显高于正常肝细胞系HL-7702(均P0.05),其中MHCC97-H细胞表达水平最高(P0.01);体外划痕实验、Transwell侵袭实验显示3株肝癌细胞系的迁移、侵袭能力明显高于HL-7702细胞系(均PO.05),其中MHCC97-H的迁移侵袭能力最强(P0.01)。ku80蛋白定位于细胞核。线性相关性分析显示ku80蛋白及mRNA的表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。结论 ku80蛋白主要在细胞核表达,其表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。     

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA在消化系肿瘤中的表达

目的 探讨消化系统恶性肿瘤组织中生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的相关性.方法 收集消化系肿瘤标本共66例,均经手术及病理证实.男性44例,女性22例,PCR扩增SSTR2、SSTR5 mRNA,并进行琼脂糖凝胶电泳,测其OD值并进行分析.结果 不同肿瘤SSTR2 mRNA 的表达频率不同,肝癌组织明显高于胃癌、结肠癌和胰腺癌(P＜0.05), 胃癌、结肠癌和胰腺癌之间表达无明显差异.肝癌癌组织与癌旁组织之间表达水平无明显差异,但与正常组织表达水平有显著差异(P＜0.05);胃癌、结肠癌和胰腺癌癌组织与癌旁组织、正常组织之间表达无显著性差异(P＞0.05).SSTR5 mRNA的表达频率和表达水平在消化系肿瘤中差异不显著(P＞0.05).结论 (1)胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌组织中有SSTR2、5亚型表达,以SSTR2亚型为主.(2)SSTR2亚型在胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌的表达频率及表达水平不同.在肝癌中呈高表达,在胃癌、结肠癌及胰腺癌中表达水平较低.(3)SSTR2、5亚型的表达频率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移密切相关,结肠癌与肿瘤分期有密切关系.(4)SSTR2亚型鉴定对胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌是否适合生长抑素治疗具有一定指导意义.     

胰腺癌细胞株HOXA7基因表达及其启动子区甲基化状态

目的 检测HOXA7 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7 mRNA表达和甲基化状态的变化.结果 胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7 mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7 mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低(P值均＜0.01).经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7 mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7 mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论 胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC 1和SW1990细胞两者无明显相关性.     

Jagged1基因沉默对人胰腺癌细胞SW1990和PANC1血管相关因子分泌及迁移能力的影响

目的 以RNA干扰技术靶向沉默人胰腺癌细胞株Jagged1基因,观察细胞VEGF、Angiopoietin2、bFGF、MMP9的分泌及细胞迁移能力的变化.方法 应用靶向Jagged1的siRNA、对照siRNA(c-siRNA)转染人胰腺癌细胞株SW1990和PANC1,实时PCR法和蛋白质印迹法检测细胞Jagged1 mRNA和蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF、angiopoietin2、bFGF、MMP9的分泌量,Transwell小室观察细胞的迁移能力.结果 SW1990和PANC1细胞均高表达Jagged1基因.15 nmol/L Jagged1 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,SW1990、PANC1细胞的Jagged1 mRNA表达被抑制,分别为c-siRNA组的(59.62 ±2.75)％和(76.96 ±6.16)％,Jagged1蛋白表达几乎完全被抑制.SW1990、PANC1细胞的VEGF分泌量均较c-siRNA组显著减少[(867.93±58.69) pg/ml比(1516.24±37.58)pg/ml,(951.13±120.49) pg/ml比(1413.68±33.56) pg/ml,P＜0.05],但angiopoietin2、bFGF、MMP9蛋白分泌无明显变化.另外,Jagged1 siRNA转染后,SW1990细胞VEGF mRNA表达水平为c-siRNA组的(52.26 ±4.85)％ (P＜ 0.05);PANCI细胞为c-siRNA组的(59.75±4.91)％(P＜0.05).转染后的SW1990和PANC1细胞的穿膜细胞数分别为(65.25±5.56)、(57.50±8.58)个,较c-siRNA组的( 122.25±11.09)、(112.00±12.52)个显著减少(P＜0.05).结论 人胰腺癌细胞高表达Jagged1,沉默Jagged1基因可明显抑制人胰腺癌细胞VEGF的产生和分泌,并且可降低癌细胞的体外迁移能力.     

胰腺癌伴神经浸润动物模型的建立

目的 建立胰腺癌伴神经浸润的动物模型.方法 32只裸鼠分为4组,每组8只.将人胰腺癌细胞SW1990、CAPAN-2、PANC1分别注射于裸鼠的坐骨神经周围,以不做任何处理的裸鼠作为对照组.观察术后裸鼠体质量变化、成瘤情况、成瘤时间、造模成功率等指标.结果 对照组裸鼠体质量增加,各癌细胞注射组裸鼠成瘤后体质量明显下降,甚至呈现恶液质,成瘤侧肢体活动受限.CAPAN-2注射组及SW1990注射组的8只裸鼠最终均成瘤,PANC1注射组只有5只成瘤.以肿瘤最长径长至约0.8 cm为时间截点,CAPAN-2注射组、PANC1注射组、SW1990注射组裸鼠的成瘤时间分别为（49.8±5.0）、（56.6±2.4）、（25.4±3.0）d.SW1990注射组成瘤时间最短,PANC1注射组成瘤时间最长,3组间成瘤时间的差异具有统计学意义（F=73.51,P＜0.01）.CAPAN-2注射组、PANC1注射组、SW1990注射组裸鼠神经浸润造模成功率分别为87.5％ （7/8）、20.0％（1/5）、50.0％ （4/8）.结论 成功建立了胰腺癌伴神经浸润动物模型,但不同的胰腺癌细胞系建立的动物模型具有不同的特点.     

胰腺癌细胞株原钙黏附蛋白8基因的甲基化状态

目的 分析原钙黏附蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因在胰腺癌细胞株的甲基化状态.方法 抽提6株胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990和2例正常胰腺组织的总RNA,以甲基化特异性PCR(MSP)法检测PCDH8甲基化情况.应用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理6株胰腺癌细胞株,采用实时定量PCR法检测处理前后细胞的PCDH8 mRNA表达.结果 2例正常胰腺组织PCDH8基因未发生甲基化,PANC1、BxPC3、CFPAC胰腺癌细胞株PCDH8基因部分甲基化,而PaTu8988、ASPC1、SW1990细胞完全甲基化.PCDH8mRNA在PANC1、SW1990、PaTu8988胰腺癌细胞株中有表达,表达的相对值(RQ)分别为1.576±0.648、0.013±0.008、0.002±0.001;BxPC3、CFPAC、ASPC1细胞株无PCDH8 mRNA表达.5-Aza-dC处理后,胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990均有PCDH8 mRNA表达,表达量较处理前明显升高,相对表达量分别为7.463±2.628、10.696±1.539、7.852±2.762、421.815±1.493、118.595±4.089、6.690±1.884.结论 PCDH8基因启动子高甲基化是导致该基因在胰腺癌细胞株表达下降的主要原因之一.     

12-脂氧合酶在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测胰腺癌组织和胰腺癌细胞株SW1990和PANC1的12-脂氧合酶(12-lipooxygenase,12-LOX)表达,探讨其与胰腺癌临床病理参数的关系.方法 分别应用免疫组化染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测胰腺癌组织、癌旁正常胰腺组织及胰腺癌细胞株SW1990和PANC1中12-LOX mRNA和蛋白的表达.分析胰腺癌组织12-LOX表达与临床病理参数的相关性.结果 30例胰腺癌组织12-LOX表达阴性8例,弱阳性7例,强阳性15例,总阳性率为73.3％.SW1990和PANC1细胞均表达12-LOX.阳性表达的胰腺癌组织及两株胰腺癌细胞株均表达12-LOX mRNA,而癌旁正常胰腺组织不表达12-LOX mRNA及蛋白.胰腺癌组织12-LOX强阳性表达与肿瘤TNM分期、肿瘤病理分级和淋巴结转移相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别无关.结论 12-LOX在胰腺癌中表达上调,与胰腺癌的恶性生物学行为有关.     

The differential processing of proenkephalin A in mouse and human breast tumour cell lines.

We have carried out an investigation into the processing of the enkephalin-like immunoreactivity reported in breast tissue using two human breast tumour cell lines and a mouse tumour cell line. A 46 kDa form of proenkephalin (PE) has been observed in the cell lysates of two human breast tumour cell lines (MCF-7, ZR-75-1) and the mouse androgen-responsive Shionogi breast carcinoma cell line (SC115). PE processing in the cell lysates of these cells was assessed by a specific met-enkephalin RIA. The basal levels of processed PE in the MCF-7, ZR-75-1 and SC115 cell lysates were 30, 30 and 76% respectively. The processing enzymes PC1 and PC2, which have been implicated in the differential processing of PE, were detected by immunoblot analysis in these cells. PC1 was found within the cell extracts of all three cell lines. PC2 was only observed in the SC115 cell line, which may account for the higher percentage of processed PE measured. The cDNA of PC2 has been transfected into ZR-75-1 cells and this was accompanied by an increase in the level of processed PE from 30 to 76%. These breast tumour cell lines may provide a useful insight into the function of enkephalin-containing peptides in breast cancer.     

Insulin-like growth factor binding protein 2 is a marker for antiestrogen resistant human breast cancer cell lines but is not a major growth regulator.

Antiestrogens target the estrogen receptor and counteract the growth stimulatory action of estrogen on human breast cancer. However, acquired resistance to antiestrogens is a major clinical problem in endocrine treatment of breast cancer patients. To mimic acquired resistance, we have used a model system with the antiestrogen sensitive human breast cancer cell line MCF-7 and several antiestrogen resistant cell lines derived from the parental MCF-7 cell line. This model system was used to study the expression and possible involvement in resistant cell growth of insulin-like growth factor binding protein 2 (IGFBP-2). By an oligonucleotide based microarray, we compared the expression of mRNAs encoding insulin-like growth factor binding protein 1,2,3,4,5 and 6 (IGFBP-1 to -6) in the parental MCF-7 cell line to three human breast cancer cell lines, resistant to the antiestrogen ICI 182,780 (Faslodex/Fulvestrant). Only IGFBP-2 mRNA was overexpressed in all three resistant cell lines. Thus, we compared the IGFBP-2 protein expression in MCF-7 cells to nine antiestrogen resistant breast cancer cell lines, resistant to either ICI 182,780 or tamoxifen or RU 58,668 and found that IGFBP-2 was overexpressed in all nine resistant cell lines. Three of the resistant cell lines, resistant to different antiestrogens, were selected for further studies and IGFBP-2 overexpression was demonstrated at the mRNA level as well as the intra- and extracellular protein level. The objective of this study was to examine if IGFBP-2 is involved in growth of antiestrogen resistant human breast cancer cells. Therefore, IGFBP-2 expression was inhibited by antisense oligonucletides and siRNA. Specific inhibition of IGFBP-2 protein expression was achieved in MCF-7 and the three selected antiestrogen resistant cell lines, but no effect on resistant cell growth was observed. Thus, we were able to establish IGFBP-2 as a marker for antiestrogen resistant breast cancer cell lines, although IGFBP-2 was not a major contributor to the resistant cell growth.     

热休克蛋白27高表达与肝细胞癌耐药相关

目的应用蛋白质组学技术从蛋白质水平寻找肝癌耐药相关的蛋白质分子。方法以长春新碱（VCR）诱导HepG2细胞建立的耐药肝癌细胞HepG2／VCR为研究对象,用二维电泳技术分离两种细胞的总蛋白,对差异表达的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾串联质谱进行分析鉴定。再用反义核酸抑制该差异蛋白质表达以研究其与耐药的关系。结果鉴定出一个在肝癌耐药细胞株HepG2／VCR中高丰度表达的蛋白质为热休克蛋白27（HSP27）,反义核酸抑制HSP27的表达后增强了HepG2／VCR对VCR的化疗敏感性（P〈0．05）。结论HSP27可能是与肝癌细胞株HepG2／VCR耐药密切相关的蛋白质。