马钱子中生物碱成分及其分离纯化工艺研究进展

马钱子,又称为番木鳖,是马钱科马钱属植物马钱子（StrychnosnU2d—vomicaL．）或云南马钱（Strych．nospierrianaA．W．Hill）的干燥成熟种子,有通经活络、散结消肿的功效。马钱子的有效成分主要为士的宁（strychnine）,其次是马钱子碱（brucine）,二者占马钱子总生物碱的80％左右,药理活性显著。     

马钱子总生物碱的含量测定

目的建立马钱子总生物碱的含量测定方法并用于提取工艺的评价。方法采用酸性染料比色法测定总生物碱含量:以马钱子碱和士的宁为对照品,溴麝香草酚蓝为酸性染料,在pH7.2缓冲溶液条件下,用氯仿萃取。结果马钱子碱在0.0412～0.206mg/mL范围内,士的宁在0.0428～0.214mg/mL范围内浓度与吸光度值呈良好的线性关系。马钱子碱的平均回收率为(101.8±4.6)%(n=5);士的宁的平均回收率为(103.3±2.7)%(n=5)。结论所建立的总生物碱测定方法简便、准确、稳定,可以满足马钱子总生物碱提取工艺考察的需要。     

马钱子总生物碱隐形脂质体的制备及急性毒性研究

目的:制备马钱子总生物碱隐形脂质体并与普通脂质体比较急性毒性.方法:采用酸性染料法测定马钱子总生物碱的含量.采用氨性氯仿法从制马钱子中提取了马钱子总生物碱并测定了纯度.以士的宁为模型药物,考察马钱子总生物碱隐形脂质体的制备工艺.采用硫酸铵梯度法制备了马钱子总生物碱隐形脂质体及普通脂质体,比较了两者的包封率、粒径等药剂学性质以及急性毒性.结果:采用优化后的处方与工艺,士的宁隐形脂质体的包封率为90.64%,产率为98.82%,并应用于马钱子总生物碱隐形脂质体的制备.马钱子总生物碱隐形脂质体和普通脂质体的包封率分别为80.97%和73.01%,粒径分别为106.5 nm和163.4nm.马钱子总生物碱溶液、普通脂质体及隐形脂质体的LD50分别为1.85、2.56和3.42 mg/kg.结论:士的宁隐形脂质体的制备工艺可用于马钱子总生物碱隐形脂质体制备.与普通脂质体相比,隐形脂质体作为马钱子总生物碱的载体性质更加理想.     

马钱子生物碱单体化合物的体外抗肿瘤活性

目的:研究马钱子生物碱单体对人结肠癌细胞HT-29活性的影响.方法:采用MTT法检测马钱子碱、伪马钱子碱、异马钱子碱、伪士的宁、16-甲氧基原士的宁5种化合物对HT-29细胞的抑制能力,并计算IC50.结果:5种生物碱单体化合物对人结肠癌细胞HT-29均表现出不同浓度的生长抑制作用,随着浓度的升高,抑制率呈增长的趋势....     

纯化马钱子总生物碱HPLC定量及指纹图谱研究

摘要：目的：建立纯化马钱子总生物碱HPLC指纹图谱,为其质量评价提供新方法。方法：采用HPLC测定纯化马钱子总生物碱中主要生物碱的含量和指纹图谱。含量测定的分析条件：SuperstarC18 (250 mm?.6 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相：乙腈(A)- 0.01mol/L1-庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调pH值2.8)(B)(24∶76);分析时间：20min;柱温：30℃;检测波长为264nm。指纹图谱的分析条件：SuperstarC18 (250 mm?.6 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相：乙腈(A)-水：三乙胺：乙酸(100:0.2:0.2)(B);洗脱条件为：0~21min：90%→84% (B),10%→16% (A),21~55min： 84%→60%(B),16%→40%(A),55~65min：90%(B),10%(A);分析时间：65min;柱温：30℃;检测波长：254nm。结果：经方法学考察,含量测定和指纹图谱分析各项参数均符合要求;10批纯化马钱子总生物碱样品的含量分析显示：马钱子碱含量在32. 3% ~ 37. 5% 之间; 士的宁含量在15. 0% ~18.4%之间;马钱子碱氮氧化物含量在0.19% ~ 0.23% 之间。各批次样品指纹图谱分析都显示10个共有峰,指纹图谱相似度均在97% 以上。结论：主要有效成分含量测定与指纹图谱相结合的分析方法能很好地反映纯化马钱子总生物碱整体质量,纯化马钱子总生物碱制备工艺稳定,方法重现性好,稳定可靠,是一种有效的质量分析与评价方法。     

苦参总生物碱提取纯化工艺研究

目的：研究苦参总碱的提取纯化工艺。方法：以总生物碱提取率为指标考察冷浸、渗漉、水煎煮三种提取工艺；以总生物碱及氧化苦参碱含量为指标，优选纯化工艺路线及阳离子树脂纯化工艺的技术参数，包括树脂用量，流速，解吸附方法等。结果：最佳提取工艺为：1％醋酸水溶液冷浸3次，以1／3（生药重）量的阳离子树脂纯化，5％氨水乙醇回流解吸附。提取物中苦参总生物碱含量可达95％以上，总生物碱的提取纯化转移率可达80％左右。结论：工艺简单，周期短，成本低，提取物中总碱转移率及纯度均高。     

大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱的工艺研究

目的 研究大孔树脂纯化马钱子总生物碱的工艺条件,为马钱子总生物碱的工业化生产提供实验依据.方法 以吸附量及解吸率为指标考察了AB-8,D101,HPD-500和LSA-10等4种型号的树脂,确定纯化马钱子总生物碱的最佳树脂.并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化马钱子总生物碱的最佳工艺条件.结果 AB-8型大孔吸附树脂对马钱子总生物碱具有较好的分离能力.通过大孔树脂分离纯化后,马钱子样品总生物碱的纯度可达70%,洗脱率可达到90%以上.结论 AB-8大孔吸附树脂综合性能较好,适合于马钱子总生物碱的分离纯化.     

黄连生物碱提取及纯化工艺研究

目的 研究黄连生物碱的最佳提取和纯化工艺.方法 以黄连总生物碱得率为指标,采用单因素试验与正交试验优选黄连总生物碱提取工艺,并采用单因素试验优选黄连总生物碱纯化工艺.结果 黄连总生物碱的最佳提取工艺为:黄连饮片加8倍量1.5％的硫酸溶液,煎煮3次,每次40 min;最佳纯化工艺为:黄连提取液用Ca(OH)2调节pH5 ～6,抽滤,滤液加热浓缩至浓度为每mL含0.24 g生药,抽滤,滤液加盐酸调节pH1.5～2,加5％氯化钠溶液使溶解,冰箱中静置过夜,抽滤,滤渣真空干燥(50℃),收集纯化物.结论 所建立的黄连总生物碱提取纯化工艺简单、稳定、可行.     

炮制对马钱子中生物碱的影响

应用薄层扫描法测定了按不同方法炮制的中药马钱子中士的宁、马钱子碱、异士的宁、异马钱子碱的含量,并就马钱子中生物碱的含量分布与其炮制方法之间的关系进行了研究。     

不同地区马钱子的生物碱含量测定

应用薄层扫描法测定云南马钱子、樟州马钱子、杭州马钱子中士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化合物、马钱子碱氮氧化合物的含量,以探讨马钱子中生物碱的含量与地区之间的关系。     

Box-Behnken响应面法优化马钱子提取工艺

目的采用Box-Behnken实验设计优选马钱子生物碱的提取工艺。方法采用HPLC法测定马钱子碱及士的宁含有量,以马钱子碱及士的宁提取率的总评综合效应为指标,通过Box-Behnken试验考察液料比、提取时间、乙醇体积分数对提取工艺的影响,对结果进行二项式方程拟合,利用响应面法优化提取工艺并进行预测分析。结果最佳提取工艺为液料比14∶1,提取时间2 h,乙醇体积分数55%。验证结果表明,预测值与验证值偏差较小(5%)。结论Box-Behnken响应面法用于优化马钱子的提取工艺是可行的,建立的数学模型和实验数据相符。     

马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的抗肿瘤作用研究

目的: 通过比较马钱子总生物碱溶液和3种不同磷脂组成的马钱子总生物碱脂质体对H22荷瘤小鼠的抑瘤率,评价马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的抗肿瘤作用。方法: 采用硫酸铵梯度法和隐形脂质体技术制备了3种不同磷脂组成的马钱子总生物碱脂质体。ICR小鼠接种H22肝癌瘤株造成移植性肝癌H22小鼠模型,测定马钱子总生物碱溶液、马钱子总生物碱大豆磷脂(SPC)脂质体、氢化大豆磷脂(HSPC)脂质体和复合磷脂脂质体各ip 1 mg ·kg^-1,连续10 d,观察对H22肝癌小鼠的抑瘤效果,比较给药后各组H22荷瘤小鼠的体重、免疫器官(脾和胸腺)指数和生命延长率。结果: 1 mg ·kg^-1剂量下的马钱子总生物碱溶液、SPC脂质体、HSPC脂质体和复合磷脂脂质体的抑瘤率分别为29.05%,29.29%,45.11%,37.23%;3种马钱子总生物碱脂质体未发现对免疫器官有明显的抑制作用;与对照组相比体重也无明显变化。结论: 复合磷脂脂质体是抗肿瘤中药有效部位马钱子总生物碱具有开发前景的新型载体。     

马钱子生物碱成分的研究

从马钱子的种子中分得13种生物碱,其中异马钱于碱、异马钱子碱N-氧化物、异士的宁N-氧化物为首次从该植物中鉴定。     

马钱子总生物碱脂质体的含量与包封率测定

目的 建立测定马钱子总生物碱脂质体含量和包封率的方法,用于处方与工艺评价.方法 采用氨性氯仿法提取马钱子总生物碱并分析其成分,采用硫酸铵梯度法制备马钱子总生物碱脂质体.以士的宁为对照品,采用紫外分光光度法,在254 nm测定用破膜剂溶解的马钱子总生物碱脂质体的吸光度确定其含量.采用葡聚糖凝胶柱分离脂质体和游离药物,分别测定含量后计算包封率.结果 马钱子总生物碱提取物平均得率为3.49%,在总生物碱提取物中士的宁和马钱子碱分别占46.76%和26.51%.士的宁标准曲线的范围是2.4～20 μg/mL,加样回收率在96.66～102.62%范围内.葡聚糖凝胶柱层析的回收率为100.85±0.79%(n=3).结论 所建立的方法简便快捷稳定,可以满足马钱子总生物碱脂质体质量控制的需要.     

益髓通经方中马钱子生物碱纯化工艺的研究

目的：优选大孔吸附树脂分离纯化益髓通经方中马钱子生物碱的工艺条件。方法：以马钱子碱和士的宁的含量为考核指标,通过对大孔吸附树脂的型号、吸附时间、吸附速度等因素的考察,确定益髓通经方中马钱子生物碱的最佳纯化工艺。结果：益髓通经方中马钱子生物碱的最佳纯化工艺为采用X-5型大孔吸附树脂,以1.0mL/min的速度上样4倍柱体积0.1g(生药)/mL的马钱子提取液,吸附时间为2小时,先用1倍柱体积的水洗脱杂质,再用6倍柱体积的50%乙醇以2.0mL/min的速度进行洗脱。结论：可以采用大孔吸附树脂纯化马钱子提取物中生物碱,该纯化工艺简单、经济。     

百部总生物碱提取纯化工艺研究

目的:研究用阳离子树脂富集纯化百部总生物碱的工艺条件。方法:以总生物碱的吸附量和解吸率为考察指标,采用UV分光光度法测定百部总生物碱的含量,对7种不同型号的阳离子树脂进行评价,并考察最佳工艺参数。结果:最佳提取工艺是:百部粉碎成粗粉,加入8倍量的90%乙醇,加热回流提取3次,每次1h。D004型阳离子交换树脂对百部总生物碱最大吸附量为0.5003mg/g,洗脱率68.45%,总生物碱转移率为58.70%,最终产品的生物碱纯度达到70%。结论:D004型树脂可用于纯化百部总生物碱,该方法简便可行。     

磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体体外抗肿瘤作用的影响

目的比较3种不同磷脂,其组成为大豆磷脂(SPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、复合磷脂(SPC∶HSPC为3∶1,摩尔比)马钱子总生物碱隐形脂质体的体外肝癌细胞SMM7721的摄取特性与抗肿瘤作用。方法硫酸铵梯度法制备马钱子总生物碱隐形脂质体并考察其基本药剂学性质,MTT法比较马钱子总生物碱溶液和3种不同磷脂组成隐形脂质体的抗肿瘤效果,流式细胞仪技术测定肝癌细胞对香豆素-6标记的3种不同磷脂组成隐形脂质体的摄取率。结果不同磷脂组成马钱子总生物碱隐形脂质体的体外抗肿瘤效果与SMMC-7721细胞摄取量均具有显著差异,马钱子总生物碱溶液、复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的IC50分为64.4、17.8、29.6、40.9μg/mL,肝癌细胞对香豆素-6标记的复合磷脂隐形脂质体、SPC隐形脂质体、HSPC隐形脂质体的转染率分别为92.1%、86.2%、18.6%。结论复合磷脂脂质体作为马钱子总生物碱的载体,能显著提高药物进入肝癌细胞的摄取量,增强体外抗肿瘤效果,为临床用药提供了理论依据。     

Box-Behnken法优选川乌、草乌、马钱子超声提取工艺

目的:优选川乌、草乌、马钱子超声提取工艺。方法:在单因素试验基础上,采用Box-Behnken法,以乌头碱、士的宁、马钱子碱提取量的综合评分为指标,以酸水浓度、加液量、提取时间为考察因素,优化提取工艺。结果:优化的提取工艺功率为600 W,1.4%的盐酸水为溶媒,12倍量的加液量提取2次,每次1.5 h。结论:该方法简便可靠,重复性好,可以有效提取川乌、草乌、马钱子的药效成分。     

益髓通经方中马钱子生物碱纯化工艺优选

目的:优选大孔吸附树脂纯化益髓通经方中马钱子生物碱的工艺条件。方法:以马钱子碱和士的宁的含量为指标,HPLC进行含量测定,通过静态吸附和解吸试验筛选大孔吸附树脂型号,采用单因素试验考察大孔树脂吸附和洗脱条件,确定益髓通经方中马钱子生物碱的纯化工艺。结果:最佳纯化工艺为采用X-5型大孔吸附树脂,上样液质量浓度0.1g.mL-1,上样速度1.0 mL.min-1,上样量4 BV,吸附时间2 h,加1 BV水洗除杂,用6 BV 50%乙醇以2.0 mL.min-1的速度进行洗脱。结论:采用大孔吸附树脂纯化马钱子提取物中生物碱是可行的,优选的纯化工艺简单、经济。