鼻咽癌患者外周血γδT细胞对鼻咽癌细胞的细胞毒活性测定

T细胞受体(T cell receptor，TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同，识别抗原的方式类似于免疫球蛋白，以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子，无需抗原呈递分子配合，直接识别广谱肿瘤抗原。我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)患者及6例健康人外周血的γδT细胞，经原代NPC细胞同步培养，得到高纯度的NPC细胞。流式细胞仪检测γδT细胞纯度，研究两种来源的γδT细胞对Daudi、CNE1、CNE2和新建的传代培养NPC细胞的细胞毒作用，探讨NPC患者外周血中γδT细胞的抗肿瘤作用。     

鼻咽癌可溶性抗原负载DC诱导CTL杀伤鼻咽癌细胞的体外研究

目的用负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的树突状细胞(dendritic cells, DC)诱导自身淋巴细胞,使之活化为鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL),观察其对鼻咽癌细胞的体外特异性杀伤作用. 方法用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康成人外周血单核细胞,使其分化为高纯度DC.用鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原负载成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征,MLR检测负载前后DC对同种异体T淋巴细胞增殖的能力.在白细胞介素-2(IL-2)的作用下,用负载鼻咽癌细胞可溶性抗原的DC诱导自身淋巴细胞成NPC特异性CTL,通过杀伤活性实验观察它对鼻咽癌细胞(CNE)的特异性杀伤效应. 结果人外周血单核细胞体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得具典型表型特征的成熟DC.负载CNE可溶性抗原对成熟DC表面共刺激分子及特异性表面标志无影响,仍有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,所诱导的CTL对鼻咽癌细胞(CNE)有明显的特异性杀伤作用.结论负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,对NPC的临床治疗有潜在的应用价值.     

鼻咽癌患者外周血淋巴细胞的金属元素与T细胞亚群的研究

目的 :探讨鼻咽癌患者外周血淋巴细胞金属元素和T细胞亚群含量的变化及其与机体免疫功能的关系。方法 :采用日本岛津AA 6 70型原子吸收光谱仪火焰法测定鼻咽癌组和正常对照组外周血淋巴细胞金属元素的含量 ,流式细胞仪测定T细胞亚群。结果 :鼻咽癌组淋巴细胞铜含量显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,锌含量低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;鼻咽癌组CD3 、CD4细胞和CD4/CD8比值明显低于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :鼻咽癌患者外周血淋巴细胞铜含量增高时 ,CD4细胞数量减少 ,表明CD4细胞的克隆发育功能受到影响 ,从而揭示鼻咽癌患者外周血淋巴细胞铜含量的变化与T细胞亚群变化的关系     

鼻咽癌患者外周血树突状细胞体外扩增及生物学特性的研究

目的：观察鼻咽癌（NPC）患者外周血单核细胞来源的树突状细胞（DC）的形态、表型和功能与健康者DC的差别。方法：从12例NPC患者（NPC组）和9例健康者（对照组）的外周血中分离和培养DC，观察DC的形态，用流式细胞仪检测DC的表型CD83、CD1a、CD86和HLA-DR，用4，二甲基噻唑2，5二苯基四唑溴化物（MTT）比色法检测DC诱导混合淋巴细胞反应（MLR）的能力。结果：对照组的DC形态较NPC组成熟，NPC组CD83、CD1a的表达率较对照组低，差异有统计学意义（均P〈0.05），但CD86、HLA-DR表达率2组差异无统计学意义（均P〉0.05）；NPC组CD83、CD1a、CD86和HLA-DR表达的平均荧光指数（MFI）均低于对照组，但差异无统计学意义（均P〉0.05）；对照组和NPC组外周血单核细胞均能诱导出DC，前者有较强的MLR诱导能力（P〈0.05），而后者能力低下（P〉0.05）。结论：NPC患者外周静脉血单核细胞来源的DC转化率较健康者低，且分化成熟能力也较低。     

喉癌患者外周血NK细胞杀伤活性及T淋巴细胞亚群的改变

目的 :探讨喉癌患者外周血NK细胞 (NKC)杀伤活性及T淋巴细胞亚群的改变 ,以评估患者的免疫机能 ,预测预后。方法 :采用乳酸脱氢酶 (LDH)释放法 ,测定NKC杀伤活性 ;应用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果 :喉癌组外周血NKC杀伤活性明显低于正常对照组及声带息肉组 (P <0 .0 5 ) ,病变程度越重 ,NKC杀伤活性越低。喉癌患者术后 3～ 6dNKC杀伤活性明显低于术前 (P <0 .0 5 ) ,7d后呈上升趋势。在NKC杀伤活性降低的同时 ,伴随CD3 、CD4及CD4/CD8比值下降 ,与正常对照组相比较 ,其差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :检测喉癌患者外周血NKC杀伤活性及T淋巴细胞亚群可客观反映机体免疫状态 ,具有重要临床意义     

鼻咽癌患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞分析

目的:探讨鼻咽癌患者外周血CD4 CD25h igh调节性T(Tr)细胞比例变化的特点及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测54例初治鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和15例健康者(对照组)外周血中CD3 、CD4 、CD8 及CD4 CD25h ighT细胞比例。结果:鼻咽癌患者CD4 T细胞比例、CD4 /CD8 比值均低于对照组(均P<0.05),但CD4 CD25h ighTr细胞比例明显高于对照组(P<0.01)。随疾病进展鼻咽癌患者外周血CD4 CD25h ighTr细胞比例升高[Ⅰ Ⅱ期为(2.28±1.07)%,Ⅲ期为(3.65±1.21)%,Ⅳ期为(4.72±0.87)%],Ⅰ Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较,均P<0.01;Ⅲ期与Ⅳ期比较,P<0.01。结论:CD4 CD25h ighTr细胞可能是鼻咽癌患者免疫抑制的重要原因之一,与鼻咽癌免疫逃逸有关。外周血CD4 CD25h ighTr细胞比例可能成为鼻咽癌一种新的预后判断指标,去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫,为肿瘤治疗提供一种新的方法。     

鼻咽脱落细胞的AgNOR定量观察对鼻咽癌的诊断意义

本文对临床诊断为鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）者２０８例分别行鼻咽脱落细胞、病理活检、组织印片及血清免疫酶测定ＶＣＡ－ＩｇＡ，结果发现活检（第１次）准确率为８５．７％，组织印片为８８．９％，涂片ＨＥ染色为６３．４％，涂片ＡｇＮＯＲ为９０．５％，ＶＣＡＩｇＡ为７８．６％。以脱落细胞涂片ＡｇＮＯＲ染色准确率最高。认为该方法简便，快速，不失为ＮＰＣ诊断的一种有意义的辅助     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

咽喉鳞状细胞癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性研究

目的:研究咽喉癌患者外周血T淋巴细胞亚群分布和NK细胞活性及其意义。方法:应用流式细胞仪检测123例咽喉癌患者及36例正常志愿者空腹外周静脉血淋巴细胞亚群和NK细胞活性。结果:咽喉癌患者外周血总T淋巴细胞百分比低于正常人(P<0.05),辅助T淋巴细胞百分比略低于正常人(P>0.05),抑制T淋巴细胞百分比高于正常人(P<0.01),辅助/抑制T淋巴细胞比值低于正常人(P<0.05)。外周血总B淋巴细胞咽喉癌患者略低于正常人(P>0.05),活化T细胞正常人略低于咽喉癌患者(P>0.05),NK细胞活性比较咽喉癌患者低于正常人(P<0.01)。Ⅰ～Ⅱ期外周血总T淋巴细胞略低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P>0.05),Ⅰ～Ⅱ期辅助T淋巴细胞含量略高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P>0.05),Ⅰ～Ⅱ期抑制T淋巴细胞比值低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.01),Ⅰ～Ⅱ期辅助/抑制T淋巴细胞比值高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.01)。Ⅰ～Ⅱ期外周血总B淋巴细胞相对值高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05),活化T细胞在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者变化不大(P>0.05);Ⅰ～Ⅱ期外周血NK细胞比值略高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P>0.05)。结论:咽喉癌患者存在免疫功能紊乱或低...     

环介导等温扩增快速检测EBV DNA对鼻咽癌诊断的意义

目的:建立环介导等温扩增技术快速检测EB病毒的方法,为鼻咽癌的早期诊断提供辅助手段.方法:利用煮沸法快速提取样品中病毒DNA,使用环介导等温扩增技术检测EB病毒特异基因片段,在等温条件下于1 h内完成检测过程.结果:环介导等温扩增技术在对33份临床标本的检测中显示了较高的特异性,较现有的PCR技术更加简便快速,能在等温条件下进行,不需复杂的仪器设备,检测成本大大降低.结论:本研究为鼻咽癌临床检测提供了一个快速简便的新辅助方法.     

应用OKT单克隆抗体测定喉癌患者外周血T细胞亚群的研究

应用OKT单克隆抗体借助间接免疫荧光法测定49例受检者外周血T细胞亚群,结果表明,喉癌组OKT_8~+细胞百分率显著升高,OKT_4~+/OKT_8~+比值显著低于正常组和良性病变组。并且,喉癌患者外周血中T细胞亚群的分布与临床分期有一定关系。提示喉癌患者总的细胞免疫功能处于抑制状态,晚期表现尤为显著。表明测定外周血T细胞亚群,对于了解喉癌患者的免疫状态、监测病情变化和估价预后有一定临床价值。     

抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响

目的探讨抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)肝肽和科脾肽对人鼻咽癌细胞株CNE体外增殖抑制作用及细胞周期的影响。方法将人鼻咽癌CNE细胞与不同浓度的ACBP进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的ACBP对CNE细胞的生长抑制率;光镜下观察形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期与凋亡率。结果质量浓度5．0-20．0μg／ml的ACBP均能抑制CNE细胞的生长,且随浓度及作用时间延长抑制率上升,20．0μg／ml ACBP作用72 h后,肝肽组的抑制率为63．0％,科脾肽组抑制率为46．7％。光镜下可观察到ACBP作用后的细胞凋亡现象。流式细胞仪结果显示:5．0μg/ml肝肽和科脾肽作用CNE细胞24 h的早期凋亡率较高,分别为(11．8±0．3)％和(8．1±0．2)％,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(t值分别为42．535和47．300, P值均为0．000);20．0μg／ml的肝肽和科脾肽作用CNE细胞,随作用时间延长S期细胞构成比有明显上升。结论肝肽和科脾肽对CNE细胞均有抑制增殖的作用,其抗鼻咽癌细胞增殖作用机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡,调控肿瘤细胞周期。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与鼻咽癌的关联性

目的探索杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性与鼻咽癌(NPC)发生的关联性。方法采用聚合酶链反应(PCR)/系列特异性引物(SSP)方法,对比43例广东籍汉族鼻咽癌患者和53例籍贯种族都匹配的正常对照KIR 基因位点的多态性。结果共检出目前已知的16个KIR基因,在检测的全部个体中,3DL3、3DL2及2DL4出现频率均为100%。广东籍鼻咽癌病例组中 2DL2、2DS1、2DS3、2DS4的基因频率比正常对照组显著升高（P值分别为0.035、0.002、0.007、0.001),而其他各KIR 基因频率差异无统计学意义。结论2DL2,2DS1、2DS3、2DS4基因频率升高可能与NPC发病相关。     

回输肿瘤浸润淋巴细胞对T细胞亚群的影响

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的抗瘤活性是淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）的50～100倍。为了探讨喉癌患者TIL细胞治疗前后的免疫功能状况,笔者对23例输注自身TIL细胞的喉癌患者进行回输前后的外周血T淋巴细胞亚群检测与比较,现报告如下。1对象和方法1．1研究对象23例喉癌患者均经手术与病理确诊为鳞癌（喉癌组）。其中男21例,女2例;年龄37～72岁,平均57．5岁。同时以健康体检人员20例作为对照组（正常组）,其中男15例,女5例;年龄30～70岁,平均55．0岁。1．2检测方法FACScalibur流式细胞仪（美国BD公司产）。RPMI1640液（为美…     

喉癌细胞诱导活性T淋巴细胞凋亡的机制探讨

目的:观察人喉癌Hep-2细胞Fas和FasL的表达,探讨Fas/FasL途径在人喉癌细胞免疫逃避中的作用.方法:应用RT-PCR、流式细胞仪检测Hep-2细胞表面Fas/FasL的mRNA及蛋白表达;Hep-2细胞与Jurkat细胞共培养,MTT比色法描绘Jurkat细胞生长曲线,应用流式细胞术及Hoechst染色荧光显微镜观察及检测Jurkat细胞凋亡.结果:流式细胞仪检测Hep-2细胞表面Fas及FasL表达的平均荧光强度分别为32/91±5.6和25.57±7.1.Hep-2细胞(密度为1×109/L)分别与Jurkat细胞(密度为1×108/L、5×108/L)共培养24 h,流式细胞仪检测Jurkat细胞凋亡率为(38.95±0.11)%和(13.28±0.14)%.而Jurkat细胞单独培养的凋亡率为(7.53±0.17)%.MTT比色法检测显示共培养后Jurkat细胞生长受到明显抑制;当共培养体系中加入FasL中和性抗体后,Jurkat细胞凋亡率显著下降(P<0.01).结论:人喉癌细胞株Hep-2表面表达的FasL通过诱导活化T淋巴细胞Jurkat细胞产生凋亡而使肿瘤细胞逃避宿主的免疫监视.     

鼻咽组织及脱落细胞中EB病毒对鼻咽癌诊断价值的对照研究

目的：探讨一种快速准确普查及诊断鼻咽癌（NPC）的方法。方法：应用聚合酶链反应（PCR）技术对临床怀疑NPC的144例患者的鼻咽组织和鼻咽脱落细胞中EB病毒（EBV）DNA进行检测,并与病理诊断对照。结果：PCR技术检测鼻咽组织中EBV DNA诊断NPC的敏感性和特异性分别为92．16％和80．95％;检测鼻咽脱落细胞中EBV DNA诊断NPC的敏感性和特异性分别为86．27％和71．43％,其差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论：检测鼻咽脱落细胞中EBV快速、简单,患者痛苦小,敏感性和特异性均较高,可用于NPC的诊断;对NPC的普查及流行病学调查尤其方便、实用,值得推广。对凡是EBV检测阳性的患者均应提高警惕,追踪观察。     

p53基因治疗对鼻咽癌患者局部免疫及疗效的影响

目的:探讨p53基因治疗对鼻咽癌原发灶局部免疫状态和肿瘤消退率的影响。方法:将63例经病理确诊的初治中、晚期鼻咽癌患者分为基因治疗组[32例,采用重组人p53腺病毒(rAd-p53)鼻咽部瘤体内注射及同步放、化疗]和常规治疗组(31例,采用同步放、化疗)。采用免疫组织化学方法检测治疗前、后肿瘤浸润淋巴细胞的T细胞受体CD3、CD4、CD8和B细胞受体CD20表达情况,了解局部免疫状态;用鼻内镜检查结合MRI或CT检查评价肿瘤大小的变化。结果:基因治疗组治疗后肿瘤组织中的CD3、CD4、CD8的表达比治疗前明显增加(均P<0.05),治疗前后CD20的表达差异无统计学意义(P>0.05);常规治疗组CD3、CD4、CD8和CD20的表达治疗前后均差异无统计学意义(均P>0.05)。治疗后3个月基因治疗组CR 20例,PR 10例,SD 1例,PD 1例;常规治疗组CR 11例,PR 12例,SD 5例,PD 3例,2组有效率(CR+PR)比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CD3、CD4的表达与肿瘤消退率(CR+PR)有关(均P<0.01),治疗后CD8的表达与CR率有关(P<0.05)。结论:p53基因治疗后鼻咽部肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞增殖以T细胞为主,局部细胞免疫状态提高与肿瘤消退率呈正相关。     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

miR-497在鼻咽癌组织中的表达及通过其靶基因对鼻咽癌细胞侵袭的影响

目的　探讨miR-497及其靶基因ANLN编码的Anillin蛋白在鼻咽癌发展中的作用。方法　采用qPCR和免疫组化方法分析鼻咽癌组织及正常鼻咽部组织中miR- 497和Anillin蛋白的表达情况;多因素Cox回归分析其与预后的关系;将ANLN-mRNA转染至鼻咽癌细胞,通过Transwell侵袭实验观察其对鼻咽癌细胞侵袭的影响。结果　miR-497在鼻咽癌组织中相对于正常鼻咽部组织低表达;ANLN及Anillin蛋白在鼻咽癌组织中高表达;多因素Cox回归分析显示miR-497表达可以作为患者预后的独立影响因素;ANLN-mRNA转染HONE1及HNE1细胞穿过小室的数值分别为162.89±12.32、139.76±7.85,对照组为68.37±9.83、82.32±5.96,差异均有统计学意义（P 均<0.05）。结论 miR-497在鼻咽癌组织中表达下降,具有抑癌基因作用;miR-497调控靶基因ANLN编码Anillin蛋白影响鼻咽癌增殖及侵袭。