雷公藤内酯醇对人黑素瘤M14细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对体外培养人黑素瘤M14细胞增殖与凋亡的影响。 方法 利用CCK8检测不同浓度和时间雷公藤内酯醇作用下,对黑素瘤M14细胞的增殖抑制作用;用10、20、30 nmol/L 3种浓度雷公藤内酯醇作用48 h后,以流式细胞仪检测细胞周期变化、Annexin-Ⅴ/PI法观察M14细胞凋亡的变化;用Hoechst33258染色法观察30 nmol/L雷公藤内酯醇作用48 h后细胞凋亡的形态变化。结果 细胞周期显示,雷公藤内酯醇处理过的M14细胞S期比例高于对照组, G2/M期比例低于对照组。空白对照组及10、20、30 nmol/L浓度雷公藤内酯醇处理的M14细胞凋亡率分别为（2.92 ± 0.17）%,（20.99 ± 0.40）%, （34.28 ± 2.04）% 和（63.38 ± 0.71）%,呈剂量依赖性诱导M14细胞凋亡,经30 nmol/L雷公藤内酯醇作用后,Hoechst33258染色示凋亡细胞形态改变。 结论 雷公藤内酯醇对黑素瘤M14细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法 CCK8法检测0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后A375细胞增殖水平。用0、1.25、2.5和5 mmol/L浓度丹皮酚作用24 h后,以Annexin-Ⅴ/PI法观察A375细胞凋亡的变化、分别测定caspase 3,caspase 8和caspase 9的活性,并以Western印迹检测p53,NF-κB及相关蛋白水平的变化。 结果 与空白对照组比较,0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后均对A375细胞的增殖有抑制作用,且与时间、浓度呈依赖性。1.25、2.5、5 mmol/L丹皮酚在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由对照组的（3.11 ± 0.53）%分别上升至（13.74 ± 1.73）%、（25.95 ± 0.57）%、（46.44 ± 0.81）%,各组与对照组间差异均有统计学意义（P < 0.05或 < 0.01）。2.5 mmol/L和5 mmol/L作用组的caspase 3,caspase 8,caspase 9活性升高,且与对照组间比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或< 0.01）。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,NF-κB、bcl-2、bcl-XL的蛋白水平随药物浓度增加而降低。 结论 丹皮酚对黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。可通过细胞内和细胞外两条途径发挥促凋亡作用,其机制可能与调节p53及NF-κB基因有关。     

蛇葡萄素通过核转录因子-κB通路调控黑色素瘤A375细胞周期和凋亡

目的 研究蛇葡萄素对A375黑色素瘤细胞增殖,细胞周期和凋亡作用,并探讨其潜在机制。方法 利用八肽胆囊收缩素(CCK-8)实验测定细胞活性;用Hoechst33258染色、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;相关蛋白的表达利用蛋白质印迹法(WB)检测。结果 经不同浓度蛇葡萄素(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)处理48 h后,人黑色素瘤A375细胞增殖明显减弱;蛇葡萄素能显著抑制黑色素瘤A375细胞核转录因子-κB(NF-κB)通路的活化;蛇葡萄素以浓度依赖的方式通过下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,下调Bax蛋白和Cleavedcaspase-3蛋白的表达,促进人黑素瘤A375细胞凋亡;Hoechst33258染色法显示蛇葡萄素诱导的A375细胞凋亡的形态学变化;蛇葡萄素能下调细胞周期调控蛋白Cyclin D1和CDK4的表达,将A375细胞周期阻滞于G₀/G₁期;但NF-κB通路活化剂佛波醇脂(PMA)处理A375细胞后抑制了蛇葡萄素对A375细胞NF-κB信号通路,细胞增殖与凋亡,细胞周期...     

白藜芦醇对恶性黑素瘤细胞株增殖的影响

目的 研究白藜芦醇对恶性黑素瘤体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制.方法 采用MTT法检测白藜芦醇对人恶性黑素瘤细胞系A375及小鼠恶性黑素瘤细胞系B16-F1增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对A375、B16-F1细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对A375、B16-F1细胞周期的影响;Western印迹法检测白藜芦醇对A375、B16-F1细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.结果 白藜芦醇对A375、B16-F1细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈量效及时效关系.25 μmol/L白藜芦醇作用24 h即可诱导A375细胞凋亡,其细胞凋亡率为16.7%±2.1%.100μmol/L白藜芦醇作用24 h时B16-F1细胞凋亡率可达39.6%±3.3%.100 μmol/L白藜芦醇作用12 h时A375细胞凋亡率为17.2%±1.7%,作用72 h时达52.3%±4.1%;相同浓度白藜芦醇作用12 h时B16-F1细胞凋亡率为18.4%±1.6%,作用72 h时达56.7%±4.5%.白藜芦醇处理组A375及B16-F1细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于G1期,此阻滞效应随白藜芦醇浓度的增加而增加,25 μmol/L、100μmol/L白藜芦醇作用24 h时,A375 G1期比例分别为40.51%±3.97%和55.64%±4.95%.B16-F1细胞分别为41.34%±3.12%和53.93%±5.12%.白藜芦醇明显下调A375及B16-F1细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,同时上调促凋亡蛋白Bax的表达水平.结论 白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制A375及B16-F1的增殖,其机制与调节Bel-2、Bax的表达有关.     

Celecoxib抑制人黑素瘤A375细胞增殖及对Cox-2/MMP-1蛋白表达的影响

目的研究Celecoxib(塞来考昔)对人黑素瘤A375细胞增殖抑制、凋亡诱导和周期阻滞作用及对A375细胞表达Cox-2和分泌型MMP-1蛋白的影响。方法MTT法测定Celecoxib对A375细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡及周期阻滞作用;细胞爬片SABC免疫细胞化学检测Celecoxib对A375细胞Cox-2蛋白表达的影响,ELISA法分析Celecoxib对A375细胞分泌型MMP-1蛋白表达的影响。结果80μmol/L的Celecoxib明显抑制人黑素瘤A375细胞增殖,并诱导凋亡(凋亡率35.91%)和G2/M期阻滞,减少A375细胞表达Cox-2蛋白和分泌型MMP-1蛋白。结论人黑素瘤A375细胞表达Cox-2蛋白和MMP-1蛋白,Celecoxib是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

麦冬皂苷B通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡

目的探讨麦冬皂苷B对人黑色素瘤(Melanoma)A375细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响以及相关机制。方法麦冬皂苷B处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;免疫印迹法检测麦冬皂苷B对A375细胞PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase3表达的影响。结果麦冬皂苷B能抑制A375细胞增殖活力及PI3K/Akt/mTOR通路的活化;麦冬皂苷B促进了A375细胞内Bax和Cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑色素瘤细胞发生凋亡;麦冬皂苷B阻滞了A375细胞细胞周期,G0/G1期细胞比例明显升高;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了麦冬皂苷B的上述作用。结论麦冬皂苷B能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。     

姜黄素对人黑素瘤A375细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究姜黄素抑制人黑素瘤A375细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 体外培养人黑素瘤A375细胞,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖抑制作用;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡.结果 姜黄素可使A375细胞体积缩小,细胞变圆;姜黄素对人A375细胞的生长增殖有明显的抑制作用,并且这种作用呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI双染法证实姜黄素可以诱导A375细胞发生凋亡.结论 姜黄素对人黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用.     

维A酸CD437和阿维A抑制人黑素瘤A375细胞的比较

目的探讨合成的维A酸CD437与阿维A对体外培养的人黑素瘤A375细胞的增殖抑制、凋亡诱导、周期阻滞作用及对Bax/bcl-2蛋白表达的影响。方法MTT法测定CD437及阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测两种药物诱导细胞凋亡及周期阻滞;细胞爬片SABC免疫细胞化学分析两种药物对细胞Bax/bcl-2蛋白表达的影响。结果干预24h后,10-5mol/L维A酸CD437和阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制率(PIR)和凋亡率分别为58.6%和43.25%,28.03%和17.13%(P<0.05),CD437促A375细胞G0/G1期阻滞,而阿维A无此作用;两药均上调A375细胞Bax蛋白表达和下调bcl-2蛋白表达,但CD437组与阿维A组差异无显著性。结论与阿维A相比较,CD437更有效抑制人黑素瘤A375细胞的增殖及更明显的凋亡诱导和G0/G1期阻滞作用;在辅助治疗黑素瘤方面,CD437比阿维A可能更具潜力。     

重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料（DCFH？DA）测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl？2、Bcl？2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK？q检验。结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制 A375 细胞的增殖（P 〈 0.01）;荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的 A375 细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7,P 〈 0.01）,G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81,P 〈 0.01）;细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P 〈 0.01）;细胞内ATP含量下降（P 〈 0.01）,培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升（P 〈 0.01）;细胞Bax、cleaved？caspase？3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl？2和PKM2蛋白表达下降（P 〈 0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。     

白花丹素对黑素瘤A375细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 评价白花丹素对黑素瘤细胞体外增殖及凋亡的影响.方法: 体外培养黑素瘤细胞A375细胞株,应用不同浓度的白花丹素进行处理,培养24 h后,MTT法测定对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot检测bcl-2的表达.结果: 浓度为1～13 μmol/L的白花丹素能显著抑制A375细胞株的增殖,且随浓度增加抑制作用递增;白花丹素作用24 h的半数抑制浓度约为10 μmol/L;当浓度为2.5 μmol/L、5.0 μmol/L和10.0 μmol/L作用24 h,细胞的凋亡率分别为8.52%±0.96%、14.83%±1.34%和19.56%±1.85%,与空白对照组(4.58%±0.46%)比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞内bcl-2蛋白表达量随药物浓度升高而递减,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论: 白花丹素体外能抑制黑素瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡及下调黑素瘤细胞bcl-2蛋白的表达.     

甲磺酸伊马替尼对人黑素瘤M14细胞系凋亡的影响

目的 探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养人黑素瘤M14细胞凋亡的影响。方法 Annexin-V/PI法和TUNEL法观察5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L三种浓度甲磺酸伊马替尼对M14细胞凋亡的诱导情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化,DAPI染色观察细胞凋亡形态变化,Western印迹分析检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果 三种浓度甲磺酸伊马替尼均能不同程度的诱导M14细胞凋亡,细胞周期显示S期细胞和凋亡细胞比例高于和对照组（P ＜ 0.05）,G2/M期细胞比例下降（P ＜ 0.01）。Annexin-V/PI法检测示甲磺酸伊马替尼组早期凋亡率（Q4%）的升高（P ＜ 0.01）。TUNEL法检测凋亡阳性细胞的数目高于对照组（P ＜ 0.01）。经20 μmol/L甲磺酸伊马替尼作用后DAPI染色示凋亡细胞形态改变,同时Western印迹分析示bcl-2表达上调和bax表达下调。结论 甲磺酸伊马替尼能影响细胞周期进程,诱导M14细胞凋亡,可能与活化线粒体凋亡途径有关。     

新型维A酸AHPN促人皮肤恶性黑素瘤A375细胞凋亡及机制研究

目的：探讨新合成维A酸AHPN对体外培养的皮肤恶性黑素瘤细胞系A375的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：噻唑蓝（MTT）法测定AHPN对A375细胞系的增殖抑制作用,光镜观察药物对细胞形态的影响,用流式细胞术研究药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。基因系统测定体外A375细胞中AHPN作用与核转录因子NF-κB活化关系。结果：维A酸AHPN可有效抑制A375细胞的生长,并具有剂量依赖性。AHPN可促进A375细胞的凋亡及G1期抑制;可增强A375细胞NF-κB活性。结论：AHPN可有效抑制A375细胞的增殖并诱导其凋亡。AHPN对A375细胞的促凋亡作用与NF-κB活化有关。     

重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究重楼提取物单体重楼皂苷Ⅱ在体外对A375人黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养A375人黑素瘤细胞株,采用MTT法检测重楼皂苷Ⅱ对细胞增殖的影响,计算IC50值;透射电镜观察细胞超微结构的变化;采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ干预后A375人黑素瘤细胞凋亡的情况。结果重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,24h的IC50值为12.04μmol/L。重楼皂苷Ⅱ对人A375细胞生长的抑制作用表现出时间和浓度依赖性。另外重楼皂苷Ⅱ引起A375黑素瘤细胞的凋亡率显著增加。结论重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤有潜在的抗癌作用,可能是通过诱导黑素瘤细胞凋亡而发挥作用。     

HINT1对人黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的 探讨HINTl基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 应用构建的peDNA.3.1/mye-His(-)A-HINTl真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINTI的A375细胞模型.用M1rr法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡.分光光度法检测Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9的相对活性.Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C及p53的表达.结果 与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P<0.05);Gl期细胞增多(73.17%±3.99%,F=25.65,P<0.05),S期细胞减少(16.75%±1.62%.F=75.48,P<0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57%±9.58%,F=11.71,P<0.01). TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12%±1%)显著增高(F=358.02,P<0.01);Caspase 9(0.45±0.03,F=135.62,P<0.01)和Caspase 3表达(0.46±0.04,F=90.28,P<0.01)升高.凋亡相关蛋白bax、细胞色素C及p53表达增加,bel-2表达降低.结论 高表达H1NT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G_1期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因.     

CHOP依赖内质网应激通路在雷公藤内酯醇诱导黑素瘤A375细胞凋亡中的作用机制

目的 探讨CHOP依赖的内质网应激通路在雷公藤内酯醇诱导黑素瘤A375细胞凋亡中的作用机制。方法 培养人黑素瘤A375细胞,用12.5、25、50、100、200 nmol/L雷公藤内酯醇处理,以不加雷公藤内酯醇处理的细胞作为阴性对照组。分别作用一定时间后,光镜观察A375细胞形态变化,CCK8法检测药物对细胞的增殖抑制作用,以双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜观察内质网形态变化,Western印迹检测细胞GRP78、p?PERK、PERK及CHOP蛋白的表达及GRP78 蛋白在药物作用下随时间变化的趋势,qPCR检测GRP78、PERK、CHOP mRNA相对表达量。结果 雷公藤内酯醇作用后,A375细胞变为细长梭形,胞质变少,细胞大小不一,形状不规则,出现较多突起。CCK8实验显示,不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24、48、72 h均对A375有抑制增殖作用,且与时间、浓度呈依赖关系（P < 0.05）,24、48、72 h时半数抑制浓度分别为308、83、55 nmol/L。12.5、25、50、100、200 nmol/L雷公藤内酯醇组细胞凋亡率分别为10.3% ± 0.1%、14.6% ± 0.8%、17.4% ± 0.7%、21.1% ± 1.0%、29.5% ± 1.1%,均高于阴性对照组（3.3% ± 0.4%）,差异均有统计学意义（P < 0.05）。200 nmol/L 雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后透射电镜观察到内质网形态呈现损伤性改变。不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后,GRP78、p?PERK、PERK、 CHOP蛋白表达逐渐增高（P < 0.05）,而GRP78蛋白表达量随药物作用时间的延长逐渐减少（P < 0.05）。qPCR结果示,不同浓度雷公藤内酯醇作用A375细胞24 h后,GRP78、PERK、CHOP mRNA相对表达量随着药物浓度的增加而增加,除12.5 nmol/L浓度组PERK mRNA外,各浓度雷公藤内酯醇组GRP78、PERK、CHOP mRNA与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论 雷公藤内酯醇能够诱导内质网发生应激,随着药物作用浓度的增加和时间的延长,A375细胞会启动CHOP依赖的内质网应激反应性凋亡途径。     

紫铆花素对人黑素瘤细胞A375生物活性及线粒体膜电位的影响

目的观察紫铆花素对人黑素瘤细胞A375细胞增殖、细胞周期、酪氨酸酶活性、黑素合成及线粒体膜电位的影响。方法用不同浓度紫铆花素处理人黑素瘤细胞A375 48h后,采用MTT法测定黑素细胞增殖率;流式细胞仪测定黑素细胞周期和线粒体膜电位变化;L-DOPA法测定黑素细胞酪氨酸酶活性及Na OH裂解法测定黑素含量变化。结果与对照组相比,0.1~5.0μg/m L浓度范围紫铆花素与人黑素瘤细胞A375共孵育48h后,能明显促进人黑素瘤细胞A375增殖,具有不同程度提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成及调节细胞周期和线粒体膜电位的作用。结论紫铆花素对体外培养的人黑素瘤细胞A375起促进细胞增殖、提高酪氨酸酶活性、增加黑素合成的作用,其作用可能与紫铆花素对细胞周期和线粒体膜电位的调节有关。     

芍药苷对人黑素瘤细胞株A375增殖凋亡的影响

目的:研究不同浓度芍药苷(PF)对人黑素瘤细胞A375增殖抑制及早期凋亡的影响.方法:将体外培养的人黑素瘤细胞株A375分为6组,5个实验组分别加入不同浓度PF(2、1、0.5、0.1、0.01 mg/mL),对照组不加PF.光镜下观察细胞密度及形态、MTT法测定细胞增殖抑制率,Amnexin V/PI染色法检测细胞早期凋亡率.结果:镜下观察可见随着PF浓度的增加,黑素瘤细胞株A375数量降低,贴壁能力渐差,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩.与对照组相比,不同浓度PF处理A375细胞24h、48h和72 h后,PF对细胞有浓度依赖性的增殖抑制作用(P＜0.05),但未见明显的时间依赖性(P＞0.05).不同浓度PF干预24h时A375细胞的早期凋亡率,对照组和各实验组差异无统计学意义(P＜0.05).结论:PF能抑制人黑素瘤细胞株A375的增殖,这种抑制作用呈浓度依赖性而非时间依赖性,但对A375细胞早期凋亡率无明显影响.     

姜黄素对人黑素瘤细胞株A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探讨姜黄素对恶性黑素瘤体外抗癌作用的分子机制。 方法 体外培养的人黑素瘤细胞株A375和C8161分为实验组和对照组。实验组经不同浓度姜黄素处理一定时间,对照组采用二甲基亚砜处理。采用噻唑蓝法检测姜黄素对A375和C8161细胞增殖的影响,体外侵袭实验检测姜黄素对A375和C8161细胞侵袭的影响,流式细胞仪检测姜黄素对A375和C8161细胞周期的影响,Western 印迹检测姜黄素对A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。 结果 噻唑蓝法显示,姜黄素分别在5 ~ 15 mg/L和5 ~ 10 mg/L浓度时,对A375和C8161细胞抑制作用呈量效关系;在0 ~ 48 h呈时效关系,与对照组相比差异有统计学意义（P < 0.001）。其24 h的IC50分别为10 mg/L和5 mg/L。体外侵袭试验显示,10 mg/L和5 mg/L姜黄素分别作用于A375和C8161细胞72 h,可明显抑制细胞侵袭（P < 0.001）。流式细胞仪检测显示,10 mg/L和5 mg/L姜黄素分别作用于A375和C8161细胞24 h,细胞周期阻滞于G2/M期; A375细胞G2/M期比例为35.00% ± 3.54%,与对照组120.80% ± 7.46%相比,差异有统计学意义（P < 0.001）;C8161细胞G2/M期比例为19.33% ± 4.04%,与对照组85.00% ± 9.53%相比,差异有统计学意义（P < 0.001）。Western印迹检测显示,分别经10 mg/L和5 mg/L姜黄素作用于后,A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平下降。结论 姜黄素抑制人黑素瘤细胞株A375和C8161增殖及侵袭机制可能与其诱导细胞周期阻滞及抑制AKT/mTOR信号通路活化有关。     

青海枸杞多糖对人黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响

目的观察青海枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对人黑素瘤(malignant melanoma,MM)A375细胞增殖与凋亡的影响。方法传统水提法制备枸杞多糖粉末,体外模型培养A375细胞,分别用0mg/m L(即对照组),5mg/m L,10mg/m L,15mg/m L浓度的枸杞多糖处理A375细胞后,倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测各组细胞的吸光度值、计算出相应的增殖抑制率,以及流式细胞仪检测Annexin V-PI染色后细胞凋亡率、Fluo4 AM检测细胞内钙离子浓度变化。结果与0mg/m L组比较,各给药组的A375细胞形态发生变化;增殖抑制率、凋亡率、细胞内钙离子浓度均随枸杞多糖浓度的增高逐渐增高,且与0mg/m L(即对照组)比较差异有统计学意义(P0.05)。结论枸杞多糖能够抑制人黑素瘤A375细胞的增殖,促进其凋亡。     

肿瘤相关巨噬细胞对皮肤恶性黑素瘤细胞A375生物学行为的影响

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 方法 取对数生长期人单核细胞株U937,采用佛波酯诱导48 h后,分为3组, Mφ组（继续用佛波酯诱导48 h）、M1组（用25 mg/L LPS诱导48 h）、M2组（用15 μg/L IL-4诱导48 h）。酶联免疫吸附试验检测各组巨噬细胞上清中IL-12p70和IL-10表达水平。建立巨噬细胞与恶性黑素瘤A375细胞体外共培养体系,分别设单独培养组、Mφ组（A375细胞和Mφ巨噬细胞共培养）、M1组（A375细胞和M1型巨噬细胞共培养）、M2组（A375细胞和M2型巨噬细胞共培养）,分别运用噻唑蓝法、Transwell小室法观察不同激活途径的巨噬细胞对A375细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为的影响。 结果 增殖实验显示,共培养48、72 h后Mφ巨噬细胞、M2型巨噬细胞显著促进A375细胞的增殖,M1型巨噬细胞抑制A375细胞的增殖,各处理组间两两比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）,共培养24 h后各组间两两比较A375细胞增殖率差异无统计学意义（P > 0.05）。侵袭实验显示M2组和Mφ组穿过Transwell膜的A375细胞数量（147.00 ± 7.92、113.22 ± 8.15）较单独培养组（84.11 ± 6.07）明显增加（P < 0.05）,M1组穿膜细胞（56.44 ± 7.55）明显减少（P < 0.05）。迁移实验显示M2组和Mφ组穿过Transwell膜的A375细胞数量（198.33 ± 8.22、156.00 ± 8.83）较单独培养组（123.89 ± 7.01）明显增加（均P < 0.05）,M1组穿膜细胞（97.11 ± 6.75）明显减少（P < 0.05）。 结论 IL-4激活的M2型巨噬细胞对A375细胞的增殖、侵袭和迁移可能起促进作用;脂多糖激活的M1型巨噬细胞对A375细胞的增殖、侵袭和迁移可能起抑制作用。佛波酯诱导的巨噬细胞更倾向于M2型巨噬细胞表型。