一氧化氮和白介素—10抑制核因子—kB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1h最显著(P＜0.01).结论LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

一氧化氮和白介素-10抑制核因子-κB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4 h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1 h最显著(P＜0.01).结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

白介素-10对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的 探讨白介素-10对内毒素(LPS)诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的调节,为临床运用白介素-10提供理论依据。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、IL-10＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h明显高于正常对照组;IL-10＋LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;白介素-10可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠肺组织Toll样受体4信号通路表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脓毒性大鼠肺损伤的保护机制.方法 选健康清洁级SD大鼠30只,随机(随机数字法)分为生理盐水对照组10只、脂多糖(LPS)组10只、脂多糖+乌司他丁(LPS+ UTI)组10只.注药24 h后取肺组织观察形态学改变,分别应用RT-PCR或Western blot 及ELISA方法测定肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB (NF-κB)及肿瘤坏死因子TNF-α mRNA及蛋白表达.结果 脂多糖导致大鼠肺组织损伤,乌司他丁可下调肺组织TLR4 mRNA (t=3.563,P=0.032)、TNF-α mRNA(t=5.147,P=0.028)及TLR4蛋白(t=2.692,P=0.041)、NF-κB蛋白(t=2.459,P=0.024)、TNF-α蛋白(t=3.336,P=0.037)表达,并减轻肺损伤.结论 乌司他丁对脂多糖致肺损伤具有一定保护作用,其机制之一可能与抑制TLR4-NF-κB信号途径转导有关.     

白介素10和一氧化氮对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的：探讨白介素-10和外源性一氧化氮(NO)对内毒素（LPS）诱导肺泡巨噬细胞(PAM)核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因表达的调节,为临床运用提供理论依据。方法：用支气管肺泡灌洗法收集PAM进行培养,分为正常对照组、LPS组、IL-10+LPS组和NO+LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果：LPS组NFκB活性和TNF-α含量在刺激后3小时显著高于正常对照组;IL-10+LPS组和NO+LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论：LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNFα基因表达增强;白介素-10和外源性NO可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

当归多糖减轻癫痫幼鼠海马组织炎症及凋亡的作用及机制

目的:研究当归多糖(APS)减轻癫痫幼鼠海马组织炎症及凋亡的作用及机制。方法:3周龄的雄性SD幼鼠随机分为对照组、模型组、模型+APS组、模型+APS+脂多糖(LPS)组。采用戊四氮点燃的方法建立癫痫模型,给予APS或APS+LPS腹腔注射干预;采用脑电图检测脑电频率及波幅,采用TUNEL染色检测海马组织细胞凋亡率,采用Elisa法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量,采用Western Blot检测cleaved caspase-3、bax、bcl-2、TLR4、NF-κB的表达水平。结果:与对照组比较,模型组脑电频率及海马组织中bcl-2的表达水平显著降低,脑电波幅、血清中TNF-α、IL-1β、HMGB-1的含量、海马组织的细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、HMGB-1的含量、cleaved caspase-3、bax、TLR4、NF-κB的表达水平显著增加;与模型组比较,模型+APS组脑电频率及海马组织中bcl-2的表达水平显著增加,脑电波幅、血清中TNF-α、IL-1β、HMGB-1的含量、海马组织的细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、HMGB-1的含量、cleaved caspase-3、bax、TLR4、NF-κB的表达水平显著降低;与模型+APS组比较,模型+APS+LPS组比较,脑电频率及海马组织中bcl-2的表达水平显著降低,脑电波幅、血清中TNF-α、IL-1β、HMGB-1含量、海马组织细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、HMGB-1含量、cleaved caspase-3、bax、TLR4、NF-κB的表达水平显著增加。结论:APS能减轻癫痫幼鼠海马组织的炎症及凋亡,作用可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264.7细胞TLR2表达的影响及机制

目的 观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(short hairpin RNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP/TLR4-siRNA,运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7.转染24 h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株.然后将细胞分为三组:空白组(Blank group),未转染细胞LPS刺激组(LPS group)和稳定转染细胞LPS刺激组(LPS-TLR4-siRNA group),采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达,同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化.结果 将pEGFP/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,增强型荧光蛋白的表达为(45.25±9.23)%.LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组(P＜0.05),同时NF-κB p65表达下调及分泌TNF-α的水平下降(P＜0.01).结论 针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW204.7细胞TLB2的表达.     

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用

目的 探讨NF-κB(核因子-κB)与PUMA(P53正向凋亡调节因子)表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的影响.方法 SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC(15 mg/kg),各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果 成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.     

氟伐他汀对人THP-1细胞TLR4及下游信号转导通路的影响

目的探讨氟伐他汀对脂多糖(LPS)刺激的人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)Toll样受体4(TLR4)及下游信号转导通路的干预作用。方法采用不同剂量的氟伐他汀、LPS处理THP-1细胞,MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量RTPCR(qRT-qPCR)检测细胞中TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,western blot检测TLR4及下游磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化核因子κB(NF-κB p65)蛋白的表达水平。ELISA法测定细胞培养上清中TNF-α蛋白的含量。结果氟伐他汀(10 mg/L)降低LPS刺激的THP-1细胞TLR4(蛋白质和mRNA)的表达(t分别为7.55、7.80,P均0.05),1、5、10mg/L氟伐他汀能显著抑制LPS刺激的下游分子ERK的磷酸化(q分别为11.78、18.15、18.88,P0.05);亦能抑制LPS刺激的NF-κB p65的磷酸化(q分别为5.13、6.87、11.68,P0.05)。同时,氟伐他汀(10 mg/L)能显著干预LPS刺激的细胞TNF-α(蛋白质和mRNA)的表达(q分别为4.23、3.01,P0.05)。结论氟伐他汀可通过干预LPS刺激的TLR4表达及下游分子ERK、NF-κB p65的磷酸化,抑制THP-1细胞TNF-α的表达,可能为氟伐他汀的抗炎机制之一。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

TNF-α诱导A549细胞中NF-κB与NOX2的相关性研究

目的:观察TNF-α刺激前后,NOX2基因在肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的表达情况;探讨NF-κB与NOX2基因的相关性。方法:预转染NF-κB siNRA,以TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞,采用RT-PCR及免疫印迹法分别检测NOX2mRNA及蛋白的表达水平。结果:以TNF-α刺激A549细胞可观察到NOX2mRNA及NOX2蛋白表达增加(P0.05);预转染NF-κB siRNA,NOX2mRNA及NOX2蛋白表达降低(P0.05)。结论:TNF-α可诱导NOX2基因在A549细胞表达上调,预先沉默NF-κB可下调上述表达趋势,提示NF-κB与NOX2基因表达存在相关性。     

脐血与成人外周血血浆对脂多糖诱导的血管内皮细胞TLR4／NF-κB表达的影响

目的:探讨脐血血浆与成人外周血血浆对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞TLR4/NF-κB表达的影响。方法:采集剖宫产分娩的足月健康孕妇脐血和健康成人外周血各20份,制备血浆。将体外培养的人脐静脉内皮细胞ECV304分为两组,(1)脐血组,加入1μg/mL的LPS和10%的脐血血浆;(2)成人外周血组,加入1μg/mL的LPS和10%的成人外周血血浆。逆转录-聚合酶链反应检测TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法检测TLR4、IκBα蛋白的表达。结果:脐血组TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达量显著低于成人外周血组(P<0.01),脐血组IκBα的蛋白表达量显著高于成人外周血组(P<0.01)。结论:脐血血浆抑制LPS诱导的内皮细胞TLR4/NF-κB活化,从而抑制其炎症反应。     

超短波调控NF-κB/TLR4信号通路抑制大鼠急性肺损伤炎症反应的研究

目的:观察超短波对大鼠急性肺损伤炎症反应的作用及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Toll样受体4(Tolllike receptors 4,TLR4)表达的影响。方法:将24只雄性SD大鼠随机分成3组:对照组,急性肺损伤组,超短波组,每组8只。气管内滴注脂多糖建立急性肺损伤模型。造模后的即刻、4h、8h分别给予干预组大鼠超短波治疗,电极板胸背对置,间距11cm,每次干预15min。采用HE染色观察肺组织病理学表现,肺损伤评分评估损伤程度,湿/干重比值(W/D)评估肺水肿,ELISA检测血清炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的水平,RTPCR及Western-blot分别检测NF-κB、TLR4 m RNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,HE染色见急性肺损伤组大鼠肺组织结构受损,肺损伤评分及肺组织湿/干重比值(W/D)增高(P0.01);血清炎症因子IL-6、TNF-α的水平上升(P0.01);NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量明显升高(P0.01)。与急性肺损伤组比较,超短波组大鼠肺组织结构受损程度明显减轻,肺损伤评分降低(P0.01);肺组织湿/干重比值(W/D)下降,但尚不具备显著性意义(P0.05);血清炎症因子IL-6、TNF-α水平下降(P0.05,P0.01);NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.01,P0.01)。结论:超短波通过抑制NF-κB/TLR4信号通路,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,抑制急性肺损伤炎症反应。     

乙酰化TLR4在GDM孕妇外周血单核细胞中的表达及意义

目的探讨乙酰化Toll样受体4(TLR4)在妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血单核细胞中的表达及意义。方法选取2017年1月至2017年10月在我院治疗的GDM孕妇67例(GDM组),同时选取健康孕妇67例作为对照组,采用Western blot法检测TLR4、乙酰化TLR4和NF-κB p65蛋白表达,微板法检测血清脂多糖(LPS)、ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-10(IL-10)。结果 GDM组和对照组TLR4蛋白相对表达差异比较无统计学意义(P0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达为(1.012±0.062),而对照组未检测到乙酰化TLR4表达,差异比较有统计学意义(P0.05);GDM组LPS、TNF-α、IL-1及IL-10分别为(0.95±0.11)IU/ml、(56.01±3.18)pg/ml、(76.82±3.05)pg/ml和(32.17±4.07)pg/ml,明显高于对照组(P0.05);GDM组NF-κB p65蛋白相对表达为(0.763±0.073),明显高于对照组(P0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达与LPS、TNF-α、IL-1、IL-10及NF-κB p65蛋白相对表达呈正相关(r=0.321、0.304、0.335、0.341和0.482,P0.05)。结论 GDM孕妇外周血单核细胞存在乙酰化TLR4,其与炎症因子水平有一定相关性,值得进一步研究。     

地塞米松对人外周血单核细胞核因子-κB活化和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DXM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人外周血单核细胞核因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)产生的影响。方法收集人外周血单核细胞接种于培养板后,分生理盐水对照组、LPS组、LPS DXM1μmol/L组、LPS DXM10μmol/L组。LPS诱导0、0.5、2、6、12、16h后留取细胞及细胞培养上清。采用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κBp65阳性表达率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果LPS诱导0.5h后NF-κB表达开始增加,2h达高峰。2h时TNF-α合成开始增加,6h达高峰。在2、6、12h时,LPS DXM1μmol/L组和10μmol/L组TNF-α含量均比LPS组各相应时间点低(P<0.05或0.01)。在0.5、2、6h时LPS DXM1μmol/L组NF-κB阳性表达率和在2、6h时LPS DXM10μmol/L组NF-κB阳性表达率均比LPS组低(P<0.05或0.01)。LPS DXM1μmol/L和10μmol/L组NF-κB阳性表达率和TNF-α含量在各时间点差异均无统计学意义。结论LPS在体外诱导人外周血单核细胞NF-κB的活化和TNF-α的产生;DXM通过抑制NF-κB的活化和TNF-α的释放而发挥抗炎作用,并且这种抑制效应可能不随剂量的增加而增强。     

急性百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核因子-κB表达的变化

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB (NF-κB) mRNA表达的变化,探讨TLR4-NF-κB通路在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分为2组:生理盐水(NS)对照组(6只,NS腹腔注射),PQ染毒组(24只,腹腔注射PQ溶液,20 mg/kg).PQ染毒组分别在染毒后6、24、48 h及72 h麻醉处死,NS对照组于处理后6h处死,进行肺组织HE染色,病理学观察,用实时定量PCR方法检测TLR4和NF-κB的mRNA表达情况,用ELISA方法测定肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清中IL-6含量.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与NS对照组相比PQ染毒组肺组织中TLR4和NF-κB mRNA的表达量、TNF-α、IL-6含量在各时间点均有不同程度升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TLR4和NF-κBmRNA表达量、TNF-α、IL-6含量明显上调,TLR4-NF-κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程.     

核因子-κB对胰腺AR42J细胞肿瘤坏死因子-α表达的调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胰腺腺泡AR42J细胞细胞因子表达的影响及其可能机制,进一步阐明急性胰腺炎的发病机制.方法 用不同质量浓度的LPS(0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L)刺激AR42J细胞18 h,同时用10mg/L的LPS刺激AR42J细胞不同时间(2,6,12,18,24h),RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)P65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化,放射免疫法(RIA)检测培养液上清TNF-α蛋白浓度的改变.对NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-α mRNA的表达进行相关和回归分析.结果 RT-PCR结果表明0.001 mg/L的LPS处理AR42J细胞时即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,且呈量效关系;用10 mg/L的IPS处理后,在2 h后即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,并且呈时效关系.RIA结果表明用0.01 mg/L的LPS处理AR42J细胞后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,且呈量效关系;用10mg/L的LPS处理后,在6 h后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,并且呈时效关系.TNF-α mRNA的表达与P65 mRNA的表达呈正相关.结论 LPS可以以时间剂量依赖方式地刺激AR42J细胞NF-κB(P65)和TNF-α的表达,NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-αmRNA的表达呈正相关.针对NF-κB靶点,抑制其活性,可为包括AP的治疗提供一条新的途径.     

血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的影响

目的 阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺泡巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液,分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞.予10-6M AngⅡ刺激15,30,60,120 min.另外,予AT-1受体阻断剂irbesartan(10-6M)预处理肺泡巨噬细胞60 min后再予10-6 M AngⅡ刺激60 min.设置对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NFκB的结合活性.免疫蛋白质印迹检测胞浆内IκBα的表达.RT-PCR检测TNF-α和ICAM-1的表达.应用SPSS 13.0软件进行One-Way ANOVA方差分析,多重比较采用LSD法.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15 min NF-xB结合活性增强,60 min达到峰值.AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-κB结合活性增强.与对照组(1.0)相比,AngⅡ处理组(0.29±0.11)ⅠκBα旺表达减弱,且差异具有统计学意义(P=0.013).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组ⅠκBα表达(0.83±0.12)则增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与对照组(0.42±0.099)相比,AngⅡ处理组TNF-α(1.13±0.17)表达增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.77±0.15)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.02).与对照组ICAM-1表达(0.16±0.050)相比,AngⅡ处理组(0.55±0.08)增强且差异具有统计学意义(P=0.003).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.32±0.07)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.001).结论 Ang Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB通路有正向调节作用.     

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的:通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法:构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS,1μg/mL)进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果:LPS刺激后,A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高(P0.05)。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P0.05);NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P0.05)。结论:A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体和核因子-κB表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体(EPCR)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:分别在12、24、48 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、western-blot技术测定正常对照组、LPS组培养的人脐静脉内皮细胞EPCR mRNA、蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,LPS(24、48 h)组EPCR mRNA,LPS(24 h)组EPCR蛋白含量均显著下降(均P<0.01),LPS(48 h)组EPCR蛋白含量亦显著下降(P<0.05);与LPS(24 h)组比较,LPS(12 h)组EPCR蛋白含量明显增高(P相似文献