芍药苷对人黑素细胞生物活性及迁移的影响

目的:确定芍药苷对人黑素细胞生物活性及迁移的影响。方法:体外培养人表皮黑素细胞,分别使用MTT法、L-DOPA法、NaOH法、Transwell小室法检测不同浓度的芍药苷对黑素细胞的增殖活性、酪氨酸酶活性、黑素合成以及黑素细胞迁移的影响。结果:芍药苷能显著促进黑素细胞增殖和上调酪氨酸酶活性,且10μ/mL是产生这两方面作用的最佳浓度;芍药苷也能促进黑素的合成,50μg/mL时作用最显著。芍药苷在20μg/mL时显著促进黑素细胞迁移。各组与空白对照组比较差异均有显著性(P0.05)。结论:芍药苷单体可能是白芍中促进黑素细胞迁移的主要活性成分。     

姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

迷迭香酸对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素生成的影响。方法取对数生长期的人表皮黑素细胞,分别加入不同浓度的迷迭香酸进行实验。MTT法测定体外培养的人黑素细胞活力,NaOH裂解法测定黑素含量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞活力无明显影响,而100μmol/L迷迭香酸抑制黑素细胞活力(P0.01);10～80μmol/L迷迭香酸呈浓度依赖性促进黑素细胞黑素合成;10～80μmol/L迷迭香酸对蘑菇酪氨酸酶活性无明显影响(P0.05);20～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用(P0.01)。结论迷迭香酸具有促进人表皮黑素细胞黑素生成的作用。     

阿魏酸对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨阿魏酸对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响.方法 以不同浓度的阿魏酸干预体外培养的正常人表皮黑素细胞,用MTS法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性.用NaOH裂解法检测培养72 h后黑素细胞的黑素合成.用多巴氧化反应法测定培养72 h后黑素细胞酪氨酸酶活性.用Western印迹法测定培养72 h黑素细胞c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸在作用24、48、72 h后,抑制黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（均P＜ 0.05）,其中1 mg/ml阿魏酸作用72 h抑制黑素细胞活性最高.0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸均能显著影响黑素合成和酪氨酸酶活性,并可降低黑素细胞中c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 阿魏酸可抑制培养的人表皮黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶活性,并可下调黑素细胞c-kit蛋白及ERK蛋白的表达.     

欧前胡素、异欧前胡素对人表皮黑素细胞生物活性及迁移的影响

目的探讨欧前胡素、异欧前胡素对黑素细胞生物活性及迁移的影响。方法体外培养人表皮黑素细胞。检测不同浓度的欧前胡素、异欧前胡素对黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响以及对黑素细胞迁移的影响。结果欧前胡素和异欧前胡素均能促进黑素细胞的增殖和上调酪氨酸酶活性。欧前胡素未显示出对黑素合成的促进作用,而异欧前胡素在20μg/m L浓度时显著促进黑素合成。欧前胡素未发现促进黑素细胞迁移的作用,而异欧前胡素组在20μg/m L浓度和50μg/m L浓度时显著促进黑素细胞的迁移。结论欧前胡素能促进黑素细胞的增殖,上调酪氨酸酶活性。异欧前胡素在正向调节黑素细胞生物活性三方面均有显著作用,并且能显著促进黑素细胞迁移。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

α-硫辛酸对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的　建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系 ,研究α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞的影响。方法　采用MTT法测定α 硫辛酸对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,NaOH裂解法测定黑素合成 ,并与茶多酚的结果进行比较。结果　α 硫辛酸对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低 ,酪氨酸酶活性减弱 ,黑素合成减少。结论　α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用 ,这为临床应用α 硫辛酸治疗色素性疾病提供了实验依据。     

吡美莫司对人黑素细胞黑素合成的影响

目的:评价吡美莫司在体外对人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响.方法:培养人原代表皮黑素细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠法测定黑素含量.结果:随着剂量的增高,1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司对黑素细胞的酪氨酸酶活性(分别为112.87%,117.29%,120.49%和123.97%)和黑素生成(分别为118.92%,122.55%,128.25%和134.48%)的促进作用逐渐增强,10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:吡美莫司对人表皮黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的促进作用.     

过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞的生物学作用.方法:分别以0.05、0.1、0.5、1 mmo1/L的H2O2作用于体外培养的黑素细胞24 h,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素合成;比色法测定丙二醛(MDA)含量.结果:正常人表皮黑素细胞经H202处理后,酪氨酸酶活性降低,黑素合成量减少,丙二醛含量增多,其中以0.5、1 mmol/L的H2O2作用明显,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:H2O2在-定浓度时可抑制正常人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性,减少黑素合成,并可致细胞过氧化损伤.提示H2O2在白癜风发病中可能起到一定作用.     

甲氧沙林对培养人表皮黑素细胞黑素合成的影响及信号转导的研究

目的：观察甲氧沙林(8-甲氧补骨脂素，8-MOP)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，并初步探讨8-MOP诱导表皮黑素细胞分化的信号转导途径。方法：采用4种浓度(10～500μmol／L）的8-MOP作用于体外培养的人表皮黑素细胞，观察不同浓度、不同时间8-MOP对黑素细胞的形态、增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响，并用放射免疫法测定8-MOP对细胞内环磷腺苷酸(cAMP)含量的影响。结果：100μmol／L 8-MOP作用黑素细胞120h能显著促进酪氨酸酶的活性，提高黑素细胞的黑素含量，8-MOP抑制黑素细胞增殖和提高细胞内cAMP的水平呈浓度依赖性。结论：8-MOP在体外能直接刺激表皮黑素细胞的黑素合成，上述变化可能通过cAMP依赖的蛋白激酶(PK)A信号通路发挥作用。     

川芎嗪对正常人黑素细胞黑素合成的抑制作用

目的　了解川芎嗪对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法　采用黑素细胞体外纯培养技术 ,在药物处理后的细胞中掺入3H TdR测定细胞增殖情况 ,用氧化DOPA反应测定酪氨酸酶活性 ,NaOH法测量黑素生成量。结果　随着药物浓度增加 ,黑素细胞增殖降低 ,但浓度过高 ( >5 0 0 μg/ml)则显示其毒性作用。细胞酪氨酸酶活性及黑素生成量同药物浓度成反比。结论　川芎嗪在较低的相对安全浓度下 ( 5 0～ 40 0 μg/ml)即可有效抑制黑素细胞增殖 ,降低酪氨酸酶活性 ,从而减少黑素合成。     

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的：评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用。方法：体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞。随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组（12．5μM,25μM和50μM）,作用48h,观察黑素细胞形态．检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响。结果：不同浓度（0、12．5μM、25μM和50μM）欧前胡素作用于黑素细胞48h后,细胞活力分别为100％、107．8％、87．5％和59．7％。低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度（50μM）对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性。欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低。结论：欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

人肝细胞生长因子对体外培养的黑素细胞生物学活性的影响

目的 探讨人肝细胞生长因子（rhHGF）对体外培养正常人黑素细胞生物学活性的影响。方法 分别用不同浓度的rhHGF（0.1，1，10，20，60，80，100 μg/L）作用于体外培养的正常人黑素细胞，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖及酪氨酸酶活性，用倒置显微镜对比观察不同时期rhHGF（60 μg/L）处理组黑素细胞形态的改变，并用流式细胞仪分析黑素细胞周期及凋亡情况。结果 0.1 ~ 100 μg/L rhHGF有促进黑素细胞增殖作用，在20，60，80 μg/L浓度时促增殖比较显著（P ＜ 0.01），rhHGF各浓度组均增加黑素细胞酪氨酸酶活性（P ＜ 0.01或P ＜ 0.05）；浓度为60 μg/L的rhHGF能使黑素细胞数目增多、胞体增大、树突增多，并有促进黑素细胞由G0/G1期进入S期及抑制细胞凋亡的作用。结论 rhHGF可增强体外培养的人黑素细胞的生物学活性。     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

宽谱中波紫外线对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路的作用研究

目的 探讨宽谱中波紫外线（BB-UVB）照射对黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响。 方法 分别用0、10、20、30、40、50、100、200、300 mJ/cm2 BB-UVB照射原代培养的黑素细胞,采用CCK8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。分别用0、30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,实时荧光定量PCR检测非经典Wnt通路相关基因mRNA的表达。100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,用Western 印迹检测作用前后非经典Wnt通路相关基因蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组相比,10 ~ 300 mJ/cm2 BB-UVB照射后,细胞增殖率均逐渐降低,BB-UVB剂量 > 100 mJ/cm2时细胞存活率 < 50%,同时,10 ~ 100 mJ/cm2 BB-UVB照射后酪氨酸酶活性逐渐增加,100 mJ/cm2 BB-UVB组黑素含量明显增加,差异有统计学意义（均P < 0.05）。30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1 mRNA的表达均较对照组逐渐减少,JNK、MITF、RAC1、TYR的表达均较对照组逐渐升高,而30、50 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量均较对照组降低,100 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量则明显升高（P < 0.05）。100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1蛋白的表达量较对照组降低,WNT5A、JNK、MITF、RAC1、TYR蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）。 结论 紫外线照射降低黑素细胞增殖率,提高黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量。WIF-1基因可能抑制黑素生成。WIF-1基因表达降低可能通过非经典通路Wnt蛋白的综合作用激活JNK/MITF/TYR通路,最终促进黑素合成。     

白细胞介素4对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定不同浓度IL-4对黑素细胞增殖的影响,氢氧压钠(NaOH)裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果 IL-4对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论 IL-4对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用IL-4治疗色素性疾病提供了实验依据。     

粒细胞集落刺激因子及其受体对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对人黑素细胞生物学作用的影响。方法 分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养健康人的黑素细胞,并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞仪检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞（HEL 92.1.7）中G-CSFR的表达率。Western印迹、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL 92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况;噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度rhG-CSF（200、400、600、800 μg/L）对黑素细胞增殖作用。多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。 结果 黑素细胞G-CSFR的表达率（76.81% ± 10.70%）较HEL92.1.7（2.53% ± 1.54%） 明显升高（P < 0.01）,略低于中性粒细胞（85.76% ± 15.71%,P < 0.05）;黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和mRNA,不同浓度rhG-CSF处理组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。黑素细胞G-CSFR蛋白和mRNA的表达水平明显高于HEL 92.1.7 （P < 0.01）,低于中性粒细胞（P < 0.05或P < 0.01）。rhG-CSF在200 ～ 800 μg/L时均有促黑素细胞增殖的能力,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05）;在200 ～ 600 μg/L范围内呈浓度依赖性（P < 0.01）,600 μg/L时的效应（164.04% ± 13.0%）与20 μg/L的TPA作用（165.62% ± 10.6%）相当（P > 0.05）;200 ～ 800 μg/L的rhG-CSF对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响与空白对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 人黑素细胞可表达G-CSFR;rhG-CSF具有促进黑素细胞增殖的作用,但对酪氨酸酶活性无影响。     

维A酸对A375细胞黑素合成及酪氨酸酶蛋白表达的影响

目的探讨维A酸对人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及蛋白表达的影响。方法将培养的A375细胞分为维A酸组、8-甲氧补骨脂素(8-MOP)组、氢醌组、阴性对照组(A375细胞只加入相应溶媒,不加入药物)分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性;培养24 h Western检测酪氨酸酶蛋白的变化。结果 A375细胞加入维A酸24 h、48 h、72 h后黑素含量及酪氨酸酶活性均较阴性对照组下降(P0.05)。阴性对照组A375细胞酪氨酸酶蛋白含量测定值为(0.89±0.085),维A酸组A375细胞酪氨酸酶蛋白含量为(0.56±0.044)(t=3.811,P0.05)。结论维A酸能抑制人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及蛋白表达。