共转染抑癌基因p16、p53对白血病细胞株HL-60及K562的抑制作用

人类髓系白血病细胞株ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2同时有ｐ16、ｐ5 3抑癌基因的缺失[1,2 ] 。已有研究将正常的ｐ5 3或ｐ16基因单独导入这两种细胞 ,可以不同程度地抑制肿瘤细胞的生长[1,2 ] 。如果同时将缺失的ｐ16、ｐ5 3两种基因导入ＨＬ 6 0及Ｋ5 6 2细胞中 ,可能有更好的抑制作用。材料和方法1　质粒与试剂　含野生型ｐ16ｃＤＮＡ的质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｐ16由ＧｏｒｄｏｎＰｅｔｅｒｓ教授 (ＩｍｐｅｒｉａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄ .Ｌｏｎｄｏｎ)惠赠 ,含野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ的质粒ｐＣ5 3 ＳＮ3及真核表达载体ｐＣＮｅ…     

急性白血病及骨髓增生异常综合征患者p15基因甲基化模式改变及其意义

ｐ15基因是位于染色体 9ｐ2 1的一个抑癌基因 ,其编码产物ｐ15蛋白可抑制细胞周期素依赖性激酶ＣＤＫ4 6 ,使Ｒｂ蛋白磷酸化受阻 ,从而阻止细胞由Ｇ1 期进入Ｓ期。ｐ15基因的失活可导致细胞增殖失控 ,与某些肿瘤的发生有关[1 ] 。但近年研究发现 ,在某些恶性血液病 ,如急性白血病 (ＡＬ)中 ,ｐ15基因失活的主要原因并非基因缺失或突变 ,而是启动子区的异常高甲基化[2 4] ;有显著白血病转化倾向的骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)中亦发现ｐ15基因甲基化异常[5,6] 。为探讨ｐ15基因甲基化异常与ＡＬ发病及ＭＤＳ向白血病转化的关系 ,我们采用甲…     

p16抑癌基因敲除小鼠髓系细胞增殖特性的研究

最近大量资料显示 ,周期蛋白依赖激酶抑制剂 (ＣＤＫＩ)家族成员之一Ｐ16蛋白竞争性地与周期蛋白依赖性激酶 4(ＣＤＫ4)结合 ,在细胞周期中起着重要的负调节作用[1 ] 。许多研究显示ｐ16外显子纯合缺失在慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)淋巴细胞急变患者中阳性率为 5 0 % [2 ] 。我们对ｐ16基因敲除(ｐ16 - - )小鼠骨髓细胞所建立的细胞系进行了细胞增殖特性的研究。现将结果报告如下。材料和方法1　ｐ16 - -小鼠　ｐ16 - -和野生型 (ＷＴ ,ｐ16 + +)小鼠由英国帝国理工大学动物研究中心提供。ｐ16 - -小鼠由Ｓｅｒ ｒａｎｏ实验室[3 ] 提供…     

肿瘤坏死因子及其受体基因多态性与系统性红斑狼疮

肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)是体内具有多种生物活性的细胞因子 ,并通过与其相应受体ＣＤ12 0ａ(ｐ5 5 )或ＣＤ12 0ｂ(ｐ75 )结合 ,发挥抗肿瘤、抗病毒感染的作用 ,诱发炎症反应以及刺激某些正常细胞的生长。ＴＮＦ基因与ＭＨＣ基因紧密连锁 ,编码ＴＮＦ的基因位于ＨＬＡ Ｂ以及ＨＬＡ Ｃ2位点之间的ＨＬＡ Ⅲ抗原基因簇内 ,包含若干多态性位点。根据其在染色体上的位置 ,及其在慢性炎症中的生物学效应 ,推测该基因可能与系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)发病机制及临床表现有关[1、2 ] 。近年来研究显示ＴＮＦ及其受体具有多态性 ,这种多态性的标志是Ｔ…     

多发性骨髓瘤患者的p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

ｐ16及ｐ15基因是细胞周期依赖激酶 (ＣＤＫ4/6 )的抑制因子 ,通过抑制ｐＲｂ(视网膜母细胞基因表达产物 )的磷酸化 ,阻滞细胞进入Ｓ期。若ｐ16及ｐ15基因发生纯合子缺失、甲基化或点突变 ,导致其功能失活 ,ＣＤＫ4/6与ｃｙｃｌｉｎＤ1结合 ,活化ｐＲｂ ,使细胞进入ＤＮＡ合成期 ,肿瘤细胞进行无序增殖 ,形成克隆性疾病。在多发性骨髓瘤 (ＭＭ)的基因学研究中发现ｐ15和ｐ16在其发生中起重要作用[1 3] 。为此 ,我们探讨了ｐ16及ｐ15基因在ＭＭ中失活的发生率及临床意义。材料和方法1　研究对象　初次诊断的ＭＭ患者 31例 ,所有患者的诊断均…     

CD3AK细胞对耐药白血病细胞的体外杀伤作用

肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中的重要进展之一 ,其中采用免疫效应细胞 ,如ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ、ＣＤ3 ＡＫ、ＣＩＫ、ＣＴＬ等进行的过继免疫治疗在某些肿瘤的治疗中取得了一定疗效。ＣＤ3 ＡＫ细胞是由抗ＣＤ3 单抗联合小剂量ＩＬ 2激活的Ｔ细胞 ,增殖能力和杀伤力较强。我们在实验中观察了ＣＤ3 ＡＫ细胞对耐药的白血病细胞株及慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)急变患者原代肿瘤细胞的体外杀伤作用。材料和方法1　材料　正常人外周血由健康男性提供 ;ＣＭＬ急变患者骨髓由附属医院血液科提供。Ｋ5 6 2、ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2 ＶＣＲ细胞系由上海血…     

突变特异性扩增系统方法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因C1024T及G392T

突变特异性扩增系统 (Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ ,ＡＲＭＳ)法是用来检测葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (Ｇ6ＰＤ)基因已知点突变的简便、快速、准确的方法[1 ,2 ] 。杜传书等发现的中国人中的 6种点突变中 ,占比例较高的Ｇ1388Ａ ( 2 7.8%)、Ｇ1376Ｔ( 2 5 .0 %) [3 ] 及Ａ95Ｇ[4] 的ＡＲＭＳ方法已经建立[1 ,2 ] ,而占比例较低的Ｃ10 2 4Ｔ( 5 .6 %)的ＡＲＭＳ方法还未建立 ,Ｇ392Ｔ( 8.3%)的ＡＲＭＳ方法虽已建立 ,但未经测序证实。我们建立了这两种方法 ,并经测序证实 ,现报道如下。病例和方法1　病…     

竞争性逆转录-聚合酶链反应和毛细管电泳定量检测慢性髓系白血病患者bcr/abl mRNA

ｂｃｒ ａｂｌ融合基因绝大部分融合方式为ｂ3ａ2或ｂ2ａ2型。我们根据竞争性逆转录 酶合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)的原理 ,设计和构建了该基因的竞争性参照物 ,并利用毛细管电泳技术对竞争性ＲＴ ＰＣＲ的产物进行分离分析 ,建立了对该基因精确的定量分析方法。材料和方法1　细胞标本　Ｋ5 6 2细胞系 (含ｂ3ａ2型融合基因 )和ＨＬ 6 0细胞系为本室冻存。含ｂ2ａ2型融合基因的白血病细胞采自1例住院慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)患者。ＲｉｂｏＭＡＸＴＭ 体外转录试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。毛细管电泳无胶筛分ＤＮＡ专用试剂盒购自中国科学…     

三种反义c-myc RNA对HL-60细胞分化的影响

ＨＬ 6 0是一种ｃ ｍｙｃ高表达的恶性肿瘤细胞。大量研究显示 ,当ＨＬ 6 0细胞被多种化学诱导剂诱导产生分化、凋亡及生长抑制时几乎都有ｃ ｍｙｃ表达的明显下降 ,甚至在自发产生分化的ＨＬ 6 0细胞中也有ｃ ｍｙｃ基因扩增消失的现象 ,提示ｃ ｍｙｃ表达与ＨＬ 6 0细胞分化之间有密切关系。我们将构建成功的三种反义ｃ ｍｙｃ逆转录病毒表达载体ａＭ1、ａＭ2和ａＭ3(分别载有ｃ ｍｙｃ的第 1,2和 3外显子反义片段 )导入ＨＬ 6 0细胞 ,并观察基因导入对靶细胞分化的影响。材料和方法1　材料　ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ、Ｇ418、硝基四氮…     

急性髓系白血病细胞粘附分子Mac-1、LFA-1、L-选择素的表达及其临床意义

有研究表明 ,急性髓系白血病 (ＡＭＬ)细胞表面有多种粘附分子表达的异常 ,早期造血前体细胞粘附分子ＣＤ49、ＣＤ5 6 、ＣＤ44 的改变 ,与白血病发生、发展有关[1 ] 。但晚期髓系造血细胞的粘附分子 β整合素巨噬细胞分子 1(Ｍａｃ 1)、淋巴细胞功能相关抗原 1(ＬＦＡ 1)及选择蛋白Ｌ 选择素 (Ｌ Ｓｅｌｅｃｔｉｎ)在ＡＭＬ细胞的表达情况报道较少。我们对 2 5例ＡＭＬ患者及2 0名正常人Ｍａｃ 1、ＬＦＡ 1、Ｌ 选择素表达进行检测 ,分析其表达特征及与临床及化疗的关系 ,现将结果报道如下。病例和方法1　病例选择　初诊ＡＭＬ 2 5例 ,年…     

HLA抗原与儿童急性白血病的相关性研究

ＨＬＡ多态性是人类遗传的一个重要标志。已经发现许多疾病与ＨＬＡ的特定型相关联。我们对儿童急性白血病ＨＬＡ抗原分型作了分析 ,现报告如下。对象和方法1　临床资料和标本来源1 .1　研究对象 :选择临床确诊的不同时期急性白血病患儿99例进行ＨＬＡ Ⅰ类抗原分型。按ＦＡＢ标准诊断[1]:急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 92例 (Ｌ11 9例、Ｌ2 56例、Ｌ31 7例 ) ,急性非淋巴细胞白血病 (ＡＮＬＬ) 7例 (Ｍ1和Ｍ2 各 1例 ,Ｍ32例 ,Ｍ5ａ3例 )。其中男 62例 ,女 3 7例。年龄分布 :0～ 3岁 2 2例 ,4～6岁 3 9例 ,>6岁 3 8例。同时期健康儿童 1 0 0…     

急性白血病患者和白血病细胞系的bcl-2及bax基因表达

为了进一步研究ｂｃｌ2和ｂａｘ基因在急性白血病(ＡＬ)发病和治疗中的作用,我们检测了ＡＬ患者36例和白血病细胞系6株的ｂｃｌ2基因表达,现报告如下。对象和方法1　病例资料　ＡＬ36例均为我科住院患者。男26例,女10例,均符合ＦＡＢ诊断标准并经免疫分型确诊,除2例外,其余34例检测时骨髓或外周血中原始和幼稚细胞数均>06。急性髓系白血病(ＡＭＬ)23例,急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)13例。初治22例,复发或难治14例。白血病细胞系ＨＬ60、Ｕ937、Ｒａｊｉ、ＫＧ1、ＣＥＭ和Ｋ562由军事医学科学院基础医学研究所提供。正常骨髓3份取自骨髓移植正…     

RT—PCR检测慢性粒细胞性白血病不同病期bcr—abl基因及临床意义

ｂｃｒ ａｂｌ基因是ｔ( 9;2 2 )染色体易位产物 ,见于 90 %以上慢性粒细胞性白血病 (ＣＭＬ)及 1 0 %～ 2 5 %的成人急性淋巴细胞性白血病 (以下称急淋 )。ｂｃｒ ａｂｌ基因重排是ＣＭＬ最重要的分子生物学特征。检测该基因对ＣＭＬ的诊断、鉴别诊断及预后判断具有重要意义。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测ＣＭＬ患者骨髓及 (或 )外周血ｂｃｒ ａｂｌ基因 ,为临床诊断、鉴别诊断、预后判断提供依据。1　材料与方法1 .1　病例　ＣＭＬ患者 2 6例 ,男 1 6例 ,女 1 0例 ,按文献 [1 ]标准诊断。其中慢性期 2 0例 ,急变期 6例…     

急性髓系白血病细胞p16基因结构及转录水平表达

目的：了解ｐ１６基因在急性髓系白血病（ＡＭＬ）发病中的意义。方法：用聚合酶链反应－单链ＤＮＡ构象多态性、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法分析１６例ＡＭＬ细胞ｐ１６基因结构及转录水平表达。结果：１６例均无ｐ１６基因的缺失、突变。初治和复发的１２例ＡＭＬ的ｐ１６ｍＲＮＡ表达水平明显低于４例长期缓解者及正常对照。１例ｐ５３基因突变ＡＭＬ的ｐ１６ｍＲＮＡ有明显升高。结论：ｐ１６基因在ＡＭＬ发病中可能不占重要地位，而在ＡＭＬ病态造血的维持中起一定作用，在ｐ５３突变时其表达反馈性升高，显示一种反馈环路失衡，提示在研究单个基因的基础上观察细胞周期检测点功能具有重要意义。     

DCC基因在白血病及骨髓增生异常综合征患者中的表达

ＤＣＣ基因位于人类染色体 1 8ｑ2 1 .3 ,在 88%结肠癌、直肠癌患者中 ,ＤＣＣ基因的表达明显减少或缺失。为了评价ＤＣＣ基因在白血病发病及骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)转化为白血病的作用 ,我们检测了 3 1例白血病患者和 8例ＭＤＳ患者的ＤＣＣ基因表达情况。病例和方法1　病例　所有病例均来自本院儿科、血液内科。白血病患者 3 1例 ,年龄为 6个月至 73岁 ,其中 6个月～ 1 4岁 1 0例 ,1 5～ 73岁 2 1例 ;急性髓系白血病 (ＡＭＬ) 1 4例 ,急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 1 0例 ,慢性髓细胞白血病 (ＣＭＬ) 7例。ＭＤＳ 8例 ,均按ＦＡＢ诊断…     

非骨髓清除性HLA半相合异基因外周血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病一例

我们用非骨髓清除性ＨＬＡ半相合异基因外周血干细胞移植治疗 1例慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ) ,报告如下。病例和方法1　病例　女 ,2 3岁 ,因腹胀、乏力 1年余入院。查体 :中度贫血貌 ,脾肋缘下甲乙线 2 0ｃｍ ,甲丙线 2 3ｃｍ ,质硬 ,缘钝 ,表面光滑 ,无触痛。血常规 :ＷＢＣ 196× 10 9/Ｌ ,原始粒细胞 0 .0 6 ,早幼粒细胞 0 .0 3,中性中幼粒细胞 0 .14,中性晚幼粒细胞0 2 2 ,中性杆状核细胞 0 .17,中性分叶核细胞 0 .2 6 ,嗜酸粒细胞 0 .0 5 ,嗜碱粒细胞 0 .0 3,Ｈｂ 79ｇ/Ｌ ,ＢＰＣ 2 6 9× 10 9/Ｌ。骨髓增生极度活跃 ,原始粒细胞 0 .…     

OKT3与骁悉联合治疗Ⅳ度移植物抗宿主病成功一例

患者 ,女 ,46岁 ,原发病为急性髓系白血病 (ＡＭＬ)Ｍ4 型 ,ＣＲ1持续 1年进行异基因外周血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＰＢＳＣＴ)。ＨＬＡ位点完全相合 ,刺激指数 (ＳＩ)为 0 .90 ,混合淋巴细胞培养 (ＭＬＣ) :Ｒ12 (患者刺激细胞与供者反应细胞 ) =0 .0 0 % ,Ｒ2 1(供者刺激细胞与患者反应细胞 ) =0 .78%。预防移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)用环孢菌素Ａ(ＣｓＡ) 10 0ｍｇ/ｄ 短程甲氨蝶呤(ＭＴＸ) ( 1天 15ｍｇ/ｍ2 , 3天、 6天均给予 10ｍｇ/ｍ2 )。移植后白细胞 >1.0× 10 9/Ｌ ,血小板 >5 0× 10 9/Ｌ的时间分别为 2 0天和 2 9天。 2 4天…     

粒细胞集落刺激因子受体在急性白血病中的表达及其临床意义

我们采用流式细胞技术 ,对急性白血病 (ＡＬ)患者骨髓单个核细胞表面粒细胞集落刺激因子受体 (Ｇ ＣＳＦＲ)的表达进行了检测 ,以探讨Ｇ ＣＳＦＲ在ＡＬ的表达规律及临床意义。对象和方法1　研究对象1.1　细胞系 :Ｕ937、Ｋ5 6 2、ＨＬ 6 0、ＮＢ4、Ｒａｊｉ细胞由本院中心实验室和山东省医学科学院基础免疫实验室提供。1.2　病例 :初治ＡＬ 4 9例 ,男 34例 ,女 15例 ,年龄 14～ 5 9岁 ,中位年龄 34.5岁 ,均为 1998年 7月～ 2 0 0 0年 10月山东省立医院及济南军区总医院血液科门诊和住院患者。所有病例均按文献 [1]标准确诊。按ＦＡＢ分型 ,…     

多表位BCR—ABL融合基因的合成,克隆及表达研究

慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的免疫治疗是清除白血病微小残留病并最终根治ＣＭＬ的方向之一，包含ＢＣＲ－ＡＢＬ融合区的多肽具有良好的免疫原性，在体内、外可诱发ＢＣＲ－ＡＢＬ特异的Ｔ细胞克隆。以ＢＣＲ－ＡＢＬ融合肽瘤苗激发特异性Ｔ细胞应答ＣＭＬ免疫治疗有希望成为根治ＣＭＬ残留白血病的有效手段。本实验通过基因工程技术，设计一个２８０ｂｐ的融合抗原基因片段，包含ＨＬＡ－Ａ２，ＨＬＡ－Ａ３，ＨＬＡ－ＤＲ１１等３     

外套细胞淋巴瘤细胞周期蛋白D1基因原位检测及病理形态学研究

外套细胞淋巴瘤 (ｍａｎｔｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ,ＭＣＬ)是一种具有特殊病理形态学、特异免疫表型及特征性分子遗传学改变[ｔ(11;14) ]的Ｂ细胞淋巴瘤。 1994年 ,国际淋巴瘤研究组制定的淋巴组织肿瘤欧美修订分类方案已将ＭＣＬ作为一种独立的淋巴瘤亚型列出[1] 。 90年代初 ,有作者注意到ＭＣＬ存在细胞周期蛋白Ｄ1(ＣｙｃｌｉｎＤ1)的过度表达 ,并认为是ＭＣＬ特征性的分子遗传学改变[2 ] 。我们用ＦＩＴＣ标记的ＣｙｃｌｉｎＤ1基因组探针 ,检测来自于一例ＭＣＬ患者的肿瘤组织切片中Ｃｙ ｃｌｉｎＤ1基因拷贝 ,并对ＭＣＬ的组织…