刺五加皂苷脂质体的制备及对肝癌移植瘤的抑制作用

目的：制备刺五加皂苷脂质体并研究其对肝癌移植瘤的抑制作用。方法：采用薄膜分散-超声法制备刺五加皂苷脂质体并检测其理化性质，用流式细胞仪检测此栽药脂质体对HepG2肝癌细胞周期和凋亡的影响，并观察刺五加皂苷脂质体荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果：所制备的脂质体封率为63．43％，刺五加皂苷脂质体组与游离刺五加皂苷组均使肝癌细胞G0／G1期和S期比例明显下降，并观察到细胞凋亡，高剂量刺五加皂苷脂质体组荷瘤小鼠的抑瘤率（62．21％）显著高于低剂量组（45．23％）和游离刺五加皂苷组（46．16％，P均〈0．05）。而低剂量刺五加皂苷脂质体组与游离刺五加皂苷组无明显差异（P〉0．05）。结论：刺五加皂苷脂质体能抑制肝癌细胞Hep G2增殖和诱导细胞凋亡。对小鼠肝癌移植瘤的生长有明显抑制作用。     

刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的研究刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响。方法以人肝癌细胞株(HepG2)为研究对象,分别用ELISA及RT-PCR检测ASS对HepG2细胞VEGF蛋白及mRNA水平表达的影响。结果ASS250,500μg/mL作用于HepG2细胞株,VEGF蛋白及mRNA表达量下降(P<0.05或P<0.01)。结论一定剂量的ASS能抑制HepG2细胞株的VEGF mRNA表达及蛋白的表达,提示ASS可能是通过抑制VEGF介导的肿瘤血管新生,进而抑制肿瘤的生长与转移。     

刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的：检测刺五加皂苷（ASS）对血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的影响。方法：以人肝癌细胞株（HepG2）为研究对象，采用RT—PCR法测定刺五加皂苷（ASS）对VEGFmRNA表达的影响。结果：刺五加皂苷（ASS）250、500μg／mL作用于HepG2细胞株，VEGFmRNA表达量下降（P〈0．01）。结论：一定剂量刺五加皂苷（Ass）抑制HepG2细胞株的VEGFmRNA表达量，提示刺五加皂苷（ASS）可以抑制VEGF介导的肿瘤血管新生途径，进而抑制肿瘤的生长与转移。     

刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的检测刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法以人肝癌细胞株(Hep G2)为研究对象,采用RT-PCR法测定刺五加皂苷(ASS)对VEGF mRNA表达的影响.结果刺五加皂苷(ASS)250、500μg/mL作用于Hep G2细胞株,VEGF mRNA表达量下降(P＜0.01).结论一定剂量刺五加皂苷(ASs)抑制Hep G2细胞株的VEGF mRNA表达量,提示刺五加皂苷(ASS)可以抑制VEGF介导的肿瘤血管新生途径,进而抑制肿瘤的生长与转移.     

绞股蓝总皂苷脂质体的制备与表征

目的 探讨用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的可行性,并获得最佳制备工艺与处方。方法 以卵磷脂和豆甾醇为膜材制备不含胆固醇的绞股蓝总皂苷脂质体;脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定;以包封率为评定指标,筛选该新型绞股蓝总皂苷脂质体的最佳制备方法;采用正交设计优化该脂质体的制备工艺;采用粒径、Zeta电位、原子力显微镜（AFM）表征该新型绞股蓝总皂苷脂质体。结果 用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体的最佳制备方法为乙醇注入法,通过正交设计得最佳工艺为绞股蓝总皂苷与卵磷脂的质量比为1∶10,卵磷脂与豆甾醇的质量比为4∶1,PBS缓冲溶液pH值为7.0,水化温度为35 ℃;所得脂质体的包封率为（77.00±1.17）%,粒径为（202.6±3.9）nm,多分散系数（PDI）为0.108±0.003,电位为（?28.66±0.86）mV,该脂质体在电镜下呈规则圆形。结论 用豆甾醇替代胆固醇制备绞股蓝总皂苷脂质体方法可行,采用最佳工艺制备的绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好,重现性好。     

人参皂苷Rg3脂质体的处方优化及制备工艺研究

目的为了提高人参皂苷Rg3的生物利用度和靶向性,以卵磷脂和胆固醇为载体材料,研究人参皂苷Rg3脂质体的处方和制备工艺。方法采用薄膜超声分散法制备脂质体,HPLC测定人参皂苷Rg3的含量。以包封率为指标,采用单因素和正交试验法优选处方和工艺。结果人参皂苷Rg3脂质体的最佳处方和工艺条件为:以氯仿-乙醇(1∶1)为溶剂,卵磷脂、胆固醇、人参皂苷Rg3的质量比为4∶2∶1,载药温度为50℃,PBS缓冲溶液的p H值为7.5。制备的脂质体平均粒径为111.8 nm,包封率为87.85%。结论该工艺方法简便、稳定可行,适用于人参皂苷Rg3脂质体的制备。     

三七总皂苷脂质体微丸的制备

目的:制备三七总皂苷脂质体微丸.方法:以包封率为考察指标,大豆磷脂-胆固醇、水相-有机相,药物质量浓度,脂类用量为考察因素,通过正交设计优选三七总皂苷脂质体冻干粉的处方工艺,采用塑制法制备三七总皂苷脂质体微丸.结果:三七总皂苷脂质体冻干粉的最佳处方工艺为大豆磷脂-胆固醇(6∶1),水相-有机相(1∶4),药物质量浓度20 g·L-1,磷脂用量150 mg.制备的脂质体微丸溶解后脂质体的平均粒径220.5 nm,Zeta电位-71.21 mV,1h内溶出度达81.41％.结论:制备的三七总皂苷脂质体微丸体外溶出度较高,脂质体的粒径分布较好、质量稳定.     

黄芪-莪术配伍及联合顺铂对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

目的：探讨补气活血药黄芪-莪术配伍以及联合顺铂（DDP）对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。方法：构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型。成瘤后,将其随机分为8组：模型对照组、阳性对照组（DDP 2 mg·kg^-1,ip）、黄芪-莪术配伍高剂量组（H,12 g·kg^-1·d^-1,ig）、黄芪-莪术配伍中剂量组（M,6 g·kg^-1·d^-1,ig）、黄芪-莪术配伍低剂量组（L,3 g·kg^-1·d^-1,ig）、黄芪-莪术配伍高剂量+顺铂组（H+DDP）、黄芪-莪术配伍中剂量+顺铂组（M+DDP）、黄芪-莪术配伍低剂量+顺铂组（L+DDP）,每组8只。观察黄芪-莪术配伍对原位移植瘤的作用及与DDP合用的效果;免疫组化SP法检测肿瘤组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：黄芪-莪术配伍H,M,L组的平均瘤重分别为 （1.28±0.21）,（1.61±0.28）,（1.65±0.27）g,平均瘤体积分别为 （1 065.42±275.63）,（1 398.77±358.75）,（1 419.28±405.17）mm³,均低于模型对照组的平均瘤重（2.19±0.30）g及平均瘤体积（1 866.21±433.49）mm³（P<0.05,P<0.01）;H+DDP,M+DDP,L+DDP的平均瘤重分别为（0.48±0.19）,（0.83±0.29）,（1.01±0.31）g,平均瘤体积分别为（381.86±273.14）,（704.09±386.52）,（827.75±424.58）mm³,均低于DDP组,H+DDP组有显著性差异（P<0.05）。免疫组化结果提示,黄芪-莪术配伍H,M,L,H+DDP,M+DDP,L+DDP各组HIF-1α,VEGF阳性表达强度均下降,与模型对照组比较有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。结论：黄芪-莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤的生长有抑制作用,且抑制作用与剂量有一定的正相关性,其机制可能与对HIF-1α,VEGF表达的抑制有关,与DDP合用表现为协同增效和相加作用。     

人参皂苷Re冻干脂质体的制备及贮存稳定性研究

目的建立并优化人参皂苷Re(Re)脂质体制备工艺,提高Re脂质体贮藏稳定性。方法薄膜分散-机械震荡法制备Re脂质体,透析法分离脂质体与未包封的游离药物,HPLC法测定包封率,冷冻干燥技术制备冻干脂质体制剂;以包封率为主要筛选指标,采用正交试验设计优选脂质体处方及冻干工艺。结果薄膜分散-机械震荡法制备的Re脂质体包封率最高,最佳处方工艺为药物与磷脂质量比1∶30,磷脂与胆固醇质量比16∶1,冰水浴超声30 min,双蒸水为水化液;最佳冻干工艺为以蔗糖为冻干保护剂,二糖-水质量比为1∶10,-20℃为预冻温度,0.9%的生理盐水为再水化液。结论 Re脂质体制备工艺稳定可行,以蔗糖为冻干保护剂制得的Re脂质体各指标良好,显著延长贮存时间。     

人参果皂苷前体阳离子脂质体的制备及体外释放研究

目的优化人参果皂苷前体阳离子脂质体的处方,并对其体外释放、细胞毒性进行研究。方法采用乙醇注入法、冷冻干燥法制备人参果皂苷前体阳离子脂质体,用Box-Behnken试验设计优化脂质体处方,扫描电镜观察脂质体的形态,透析法考察脂质体的体外释放度,MTT法考察脂质体细胞毒性。结果 Box-Behnken优化后脂质体最优处方为:DOTAP质量329.2 mg,蛋黄卵磷脂质量192.2 mg,胆固醇质量332.2 mg,脂质体包封率达到65.29%,复溶后的脂质体粒径分布集中,形态均一呈球形;体外释放实验结果表明脂质体具有缓释效果,能够延长作用时间;脂质体对细胞的毒副作用较小,具有较好的细胞安全性。结论人参果皂苷前体阳离子脂质体与原料药相比具有延缓释放,增强口服生物利用度等特点。     

洛莫司汀脂质体的制备及其在大鼠体内的药动学

 目的研究洛莫司汀(CCNU)脂质体的制备方法并考察用聚乙二醇单甲醚(2000)胆固醇琥珀酸酯(PEGCHS)修饰前后的2种脂质体静脉给药后在大鼠体内的药动学。方法用改良逆相蒸发法制备普通和PEGCHS修饰的CCNU脂质体,测定包封率和粒径,静脉注射给药后,以格列苯脲为内标,采用高效液相色谱法测定血液中的药物含量;并采用3P87药动学程序进行数据处理。结果制备的洛莫司汀脂质体包封率高(>80%),平均粒径50 nm左右;CCNU PBS溶液、CCNU脂质体和用PEGCHS修饰的CCNU脂质体的t_1/2α分别为0.061 8,0.093 1和0.153 1 h;t_1/2β分别为0.087 9,0.416 2和1.002 1 h;AUC分别为13.520 7,86.911 3和166.640 6 mg·h·L^-1。结论制备的CCNU脂质体包封率较高,粒径小;2种CCNU脂质体均可不同程度地增加CCNU的AUC,延长其在血液循环中的时间,并以用PEGCHS修饰的CCNU脂质体效果最好。     

中药治疗原发性肝癌中晚期的药味频率分析

对 1990— 2 0 0 0年国内公开发表的 6 6篇中医药治疗中晚期原发性肝癌的临床报道进行了用药频率的统计分析 ,结果表明 :中晚期原发性肝癌治疗用药中 ,健脾益气、活血祛瘀、清热解毒、清热燥湿和补阴类的使用率较高。茯苓、白术、柴胡、八月札和黄芪等健脾理气药的使用频率分别为 79%、71%、71%、4 3%和 4 3% ;丹参、当归、莪术、延胡索和郁金等活血祛瘀药的使用频率依次为 86 %、6 4 %、6 4 %、5 0 %和 5 0 % ;白花蛇舌草和半枝莲在气滞血瘀、肝郁脾虚、肝肾阴虚证中的使用频率分别为 5 7%和 36 %、36 %和 2 9%、2 9%和 14 % ,是常用的基本抗癌药味 ;生地、丹皮、鳖甲、龟板和知母等滋补肝肾药的使用频率依次为 71%、5 7%、5 0 %、4 3%和 4 3%     

基于网络药理学的白芍-柴胡药对治疗肝细胞癌作用机制探析

目的探究白芍-柴胡药对治疗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的有效活性化合物及其靶点的作用机制。方法本研究通过TCMSP数据库筛选出白芍-柴胡药对中的化合物以及相关靶点蛋白,并运用Uniprot数据库和Genecard数据库查询与靶点蛋白相对应的人类基因名称,进行标准化处理;通过Genecards数据库挖掘肝细胞癌疾病靶点,将其与中药靶点蛋白映射;将映射出的药对治疗HCC的有效靶点导入Cytoscape 3.2.1构建网络图,并运用CTD数据库进行GO富集和KEGG通路富集。结果获得白芍-柴胡药对治疗HCC的共22个成分和170个有效靶点;获得16条GO生物过程和7条相关信号通路,涉及代谢通路(Metabolic pathways)、Ras通路(Ras signaling pathway)、PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)等。结论白芍-柴胡药对活性靶点主要通过代谢通路、Ras信号通路、PI3K-Akt信号通路调控肝癌细胞过程及其代谢来发挥治疗作用,为后续实验提供了思路与依据。     

平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达的影响

目的研究平调饮对原发性肝癌患者甲胎蛋白(AFP)mRNA、黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)mRNA表达的影响,探讨平调饮对原发性肝癌的抑癌基质。方法原发性肝癌患者60例,随机分为治疗组和对照组,分别给予平调饮和华蟾素注射液,治疗2个疗程,采用RT-PCR技术检测原发性肝癌患者治疗前后外周血AFPmRNA、MAGE-1mRNA的表达,并取30例健康志愿者血样作为参考对照,结果用SPSS13.0软件统计。结果平调饮使原发性肝癌患者的AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达明显降低,2组治疗前后比较差异均有统计学意义(P0.01),治疗后治疗组与对照组MAGE-1mRNA表达(灰度比)分别为0.07±0.01、0.13±0.02,组间比较差异有统计学意义(P0.01),治疗组作用优于对照组。结论平调饮能够明显降低原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达,对MAGE-1基因表达的降低作用优于对照组,说明抑制MAGE-1基因表达可能是平调饮抗肝癌机制的靶点之一。     

rhG-CSF前体脂质体的制备及体外释药动力学研究

 目的制备重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)脂质体并考察其理化性质和体外释放规律。方法采用前体脂质体法制备rhG-CSF脂质体,测定Zeta电位、粒度分布和包封率,比较rhG-CSF注射液和脂质体体内外释放情况。结果脂质体的平均粒径(195.2±40.8)nm,Zeta电位-(45.5±2.97)mV,包封率(84.2±0.36)%,体外释放具有明显的缓释特点。结论采用前体脂质体法制备的rhG-CSF脂质体,包封率较高,体内应用可显著延长半衰期。     

WCX纳米磁珠在肝细胞癌血清蛋白质组中的应用及其临床意义

目的:探讨蛋白指纹图谱技术筛选肝细胞癌(HCC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物。方法:采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBS II-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱。所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后用Biomarker Patterns Software识别最终用于诊断的蛋白标志物并优化组合建立诊断模型。结果:在肝细胞癌患者和对照组之间找到72个差异蛋白峰(P<0.01)。其中质荷比(m/z)为4471、8936、11670和13752的蛋白峰建立肝细胞癌的诊断模型。该诊断模型能很好地把肝细胞癌患者从正常人群中区分出来,其敏感性为93.3%(56/60),特异性为95.1%(78/82)。经双盲实验验证,该模型对肝细胞癌诊断的敏感性为88.9%(32/36),特异性为90.6%(58/64)。结论:采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测肝细胞癌患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的肝细胞癌诊断模型。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

盐酸维拉帕米脂质体的制备及其影响因素

 目的 制备盐酸维拉帕米脂质体,并对处方和制备过程中的影响因素进行考察。 方法 分别以被动载药法和硫酸铵梯度法制备盐酸维拉帕米脂质体,对处方进行优化,并考察硫酸铵梯度法的影响因素。测定其粒径、 Zeta 电位和稳定性。 结果 硫酸铵梯度法所得包封率远大于被动载药法,且受硫酸铵浓度、载药温度和载药时间的影响。按优化的处方和工艺制备的盐酸维拉帕米脂质体,包封率大于 95 % ,平均粒径 136 nm ,粒径分布均匀, Zeta 电位为 - 13.4 mV ,稳定性良好。 结论 采用硫酸铵梯度法可成功制备盐酸维拉帕米脂质体,通过对处方和工艺进行优化,可以达到很高的包封率和良好的稳定性。     

马齿苋对人肝癌皮下瘤裸鼠尿液代谢的影响

目的:从代谢组学层面观察中药马齿苋在人肝癌皮下瘤裸鼠尿液中的代谢物质变化轮廓和不同时间节点代谢产物的异同。方法:使用人肝癌Huh7细胞建立肝癌裸鼠皮下瘤模型,造模成功后,随机将裸鼠分为模型对照组、马齿苋高剂量组、马齿苋低剂量组,同时选用未造模的裸鼠作为正常对照组。分别于第7、14天通过代谢笼收集4组尿液,用正负两种模式进行液相色谱-质谱联用仪检测,通过对尿液代谢物质的筛选、鉴定,寻找出马齿苋抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长可能作用的途径或者通路分析。结果:通过对4组裸鼠不同时间点尿液代谢产物的物质分析发现,第7天鉴别出4组尿液之间的代谢产物有17种,第14天4组尿液之间的代谢产物有43种,其中有11种差异物质在第7天和第14天均有,为吡啶甲酸、顺式粘酸、对羟基苯乙酸、己基甘氨酸、3-磷酸甘油、3-羟基十四烷二酸、吡哆胺、3-羟基吡啶甲酸、酪醇、二氢胸腺嘧啶、黄尿酸(P<0.05)。结论:随着服药时间的延长,马齿苋对肝癌皮下瘤裸鼠尿液的代谢干预发挥的作用越大,代谢物质种类增加,而有些物质的干预从开始服用的时候就可能发挥作用;马齿苋对肝癌皮下瘤裸鼠代谢的干预主要表现在其能够调节肝癌裸鼠体内糖酵解及酪氨酸、己基甘氨酸等肿瘤相关氨基酸的代谢,抗氧化应激,调节嘧啶等,从而发挥其抑制肝癌的作用。