β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移及相关机制的实验研究

目的研究β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的β-榄香烯作用于人肝癌细胞株HepG2 24h,以MTT法检测细胞黏附能力,采用Matrigel试剂、Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的表达。结果随β-榄香烯浓度增大细胞黏附能力降低,同时侵袭及迁移细胞数目明显减少;β-榄香烯可以浓度依赖性地减少MMP-2及MMP-9蛋白表达。结论β-榄香烯可有效抑制人肝癌细胞侵袭转移能力,这主要是通过减少MMP-2及MMP-9蛋白的表达途径来实现。     

榄香烯乳对大肠癌HCT-116细胞侵袭及miR-155表达的影响

目的观察榄香烯乳对人大肠癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的榄香烯乳处理人大肠癌HCT116细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR方法检测癌细胞miR-155 mRNA水平。结果人大肠癌HCT116细胞经榄香烯乳处理后,迁移和侵袭力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。榄香烯乳处理组miR-155 mRNA水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论榄香烯乳可降低人大肠癌细胞侵袭能力,下调miR-155 mRNA表达是其重要机制之一。     

麦冬皂苷B对A549细胞株体外黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制研究

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549黏附、侵袭、迁移的作用及其机制。方法细胞黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。通过荧光实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测OP-B对A549细胞中MMP-2/9 mRNA表达水平的调控,Western blot法检测细胞中MMP-2/9蛋白及其上游调控蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。结果 10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,同时能抑制其MMP-2/9 mRNA及蛋白水平的表达,并抑制其上游p-Akt的表达。结论 OP-B有效抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2/9 mRNA和蛋白水平的表达及抑制其上游Akt的磷酸化有关。     

榄香烯通过下调NCOA2表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的实验研究

目的:探究榄香烯对核受体辅激活因子2(NCOA2)表达及胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法:用不同浓度的榄香烯处理人胃腺癌BGC-823细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测NCOA2 mRNA和蛋白的相对表达量.再次培养BGC-823细胞,将细胞分为对照组(不做任何处...     

靶向MMP-9的siRNA抑制人类SGC7901胃腺癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)siRNA对胃腺痛细胞系SGC7901中MMP-9表达的影响以及siRNA干扰后对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用.方法:设计合成针对MMP-9的siRNA,采用oligofectamine转染SGC7901胃腺癌细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(realtime PCR)和蛋白印迹法分别检测转染细胞后MMP-9mRNA及蛋白的表达.Matrgel 3D生长实验和Transwell实验检测细胞侵袭情况,Matrgel 2D生长实验和划痕实验检测细胞迁移情况.结果:realtime PCR和蛋白印迹法显示转染MMP-9 siRNA后细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达较空白组和对照组明显降低.RNA干扰MMP-9基因后SGC7901细胞的侵袭和迁移能力也有明显下降.结论:靶向MMP-9的siRNA不仅能特异性的降低MMP-9 mRNA及蛋白的表达,且能抑制人SGC7901胃腺癌细胞的侵袭和迁移.     

桔梗皂苷-D抑制非小细胞肺癌H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用机制研究

目的探究桔梗皂苷-D(platycodin-D,PD)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用及其作用机制。方法细胞黏附实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。RT-PCR检测H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。同时,Western blot法检测MMP-2和MMP-9蛋白、其上游ERK信号通路相关蛋白和p-Akt的表达水平。结果PD有效抑制H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移能力,并呈浓度依赖性(P<0.05)。PD降低H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达(P<0.01);同时,PD下调H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达,并抑制其上游Ras、p-c-Raf、p-ERK 1/2和p-Akt的表达,并呈浓度和时间依赖性。结论 PD抑制NSCLC细胞黏附、侵袭和迁移,并且此作用与下调MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,抑制其上游ERK信号通路和p-Akt表达有关。     

川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭黏附能力的影响

目的观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达。方法用细胞黏附实验,检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用;用Transwell小室检测不同浓度川芎嗪干预后MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的改变;用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9 mRNA表达的抑制作用。结果川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力有明显抑制作用,对MDA-MB-231细胞的MMP-2 mRNA的表达有明显抑制作用;但对MMP-9mRNA的表达无明显影响。结论川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。     

三叶青黄酮抗肺癌作用研究

目的研究三叶青黄酮对肺癌A549细胞增殖抑制和侵袭转移作用及其机制。方法采用MTT法检测三叶青黄酮对A549细胞增殖的抑制作用;集落形成试验检测三叶青黄酮对A549细胞抗癌活性的影响;划痕试验检测三叶青黄酮对细胞迁移力的影响;Transwell实验检测三叶青黄酮对A549细胞侵袭力变化;Western blot法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-2等侵袭转移相关蛋白表达水平。结果三叶青黄酮抑制A549细胞增殖程度与用药浓度、时间呈正相关;随着药物浓度的增高,细胞集落形成的数量明显减少,细胞向划痕区的迁移速度不断减慢;穿过Transwell小室的侵袭细胞亦明显减少;MMP-2、MMP-9蛋白表达逐渐降低,TIMP-2蛋白表达升高,呈浓度依赖性。结论三叶青黄酮能够抑制肺癌A549细胞的侵袭转移,可能与降低MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

补骨脂乙素对Tca8113细胞迁移及侵袭的抑制作用及其机制

目的探究补骨脂乙素(Isobavachalcone,IBC)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞迁移和侵袭的抑制作用及其可能的作用机制。方法将不同浓度的IBC作用于体外培养的Tca8113细胞,通过MTT法检测细胞增殖抑制率;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果 IBC以浓度和时间依赖的方式有效抑制Tca8113细胞增殖。IBC降低Tca8113细胞迁移及侵袭能力。Western blot法显示IBC能够以浓度相关性下调p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,而Akt蛋白水平不受IBC处理剂量的影响。结论 IBC可抑制Tca8113细胞的增殖,迁移和侵袭,其作用与下调MMP-2和MMP-9蛋白及抑制其上游Akt的磷酸化有关。     

Effect of reversing low-level histone acetylation with VPA on metastasis of hepatocellular carcinoma in vitro

目的 探讨丙戊酸钠(VPA) 逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制.方法 流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化.结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖.VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05).随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达.结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力.下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一.     

小白菊内酯通过下调NOX4抑制结肠癌SW480细胞增殖和侵袭

目的:探讨小白菊内酯对人结肠癌细胞SW480增殖及侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法:以不同浓度(5,10,15μmol·L^-1)小白菊内酯作用于体外培养的人结肠癌SW480细胞,以环磷酰胺(30μmol·L^-1)作为阳性对照。采用CCK8法以及平板克隆法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭;免疫印迹法(Western blotting)检测NOX4蛋白以及增殖相关蛋白[β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、侵袭相关蛋白金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白]表达情况。结果:随着小白菊内酯浓度的增加,对SW480细胞增殖抑制率明显升高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度作用下,随作用时间的延长,增殖抑制率显著升高(P<0.05),小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小白菊内酯组克隆细胞形成数、侵袭、迁移细胞数、增殖相关蛋白β-catenin、Cyclin D1、侵袭迁移关蛋白MMP-2、MMP-9以及NOX4蛋白水平显著下降(P<0.05),且小白菊内酯各组间呈浓度依赖(P<0.05);与阳性对照组相比,小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小白菊内酯可能通过下调NOX4表达,抑制结肠癌细胞SW480细胞增殖、侵袭能力。     

西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响。方法通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;Western blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性。结论西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

The change of invasive ability of human pneumonic adenocarcinoma cell line in vitro before and after intervention with baicalin

目的 研究黄芩苷(baicalin)对人肺腺癌细胞株A549侵袭能力的影响,探讨baicalin抑制肺腺癌细胞侵袭能力的相关机制.方法 分别用0、0.5、1、2、4、8 mg/L baicalin处理A549细胞株,对照组加等量0.5% DMSO,孵育48 h后,细胞划痕试验测定细胞迁移抑制率;分别用上述浓度的baicalin处理A549细胞株16 h,Transwell小室侵袭试验测定细胞侵袭抑制率;2 mg/L baicalin处理细胞48 h,RT-PCR方法分别测定基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、细胞间黏附分子(ICAM)-1的mRNA表达.结果 baicalin可明显抑制人肺腺癌细胞株A549的迁移和侵袭,与对照组(0 mg/L baicalin)比较,baicalin处理组MMP-2、MMP-9、ICAM-1 mRNA表达和活性均显著下降(均P<0.05).结论 baicalin对人肺腺癌细胞的侵袭能力有明显抑制作用,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9、ICAM-1表达有关.     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其机制

研究狼毒大戟中没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行探讨。采用细胞与Matrigel黏附实验,Transwell小室检测EG对人乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附、侵袭和运动能力的影响。RT-PCR检测EG对MMP-2、MMP-9的m RNA表达的影响;Western blot法检测EG对Akt-NF-κB信号转导通路蛋白表达的变化。结果显示,EG在体外可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、运动以及黏附能力(P<0.05)。EG可抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平,抑制Akt-NF-κB信号转导通路中的Akt磷酸化和NF-κB蛋白表达。因此认为EG在体外具有一定的抑制乳腺癌细胞侵袭迁移的作用,其机制与抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平、抑制Akt磷酸化过程和NF-κB蛋白表达有关。     

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少（P<0.05）,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低（P<0.05）,p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高（P<0.05）,且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）; miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

棉酚通过Akt/β-catenin通路抑制胃癌细胞迁移

目的探讨棉酚(gossypol)对胃癌细胞迁移能力的影响,并探讨相关机制。方法胃癌细胞经不同浓度棉酚处理后,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测丝/苏氨酸激酶/β-链蛋白(Akt/β-catenin)信号通路活性及相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(Ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平。结果MTT实验显示,棉酚对胃癌细胞具有增殖抑制作用,且随浓度增加而增大;Transwell小室实验显示棉酚对胃癌细胞迁移能力具有抑制作用;棉酚对胃癌细胞迁移能力的抑制率高于增殖抑制率;与对照组相比,棉酚可明显下调胃癌细胞的pAkt、β-catenin、cyclin D1、MMP-2和vimentin蛋白表达水平,明显上调E-cadherin蛋白表达水平。结论棉酚通过下调Akt/β-catenin通路活性抑制胃癌细胞迁移。     

苦参碱对HCCLM3人高转移性肝癌细胞体外转移的 作用及机制研究

目的:探讨苦参碱对HCCLM3人高转移肝癌细胞体外转移的作用及其机制.方法:CCK-8检测不同浓度的苦参碱对HCCLM3癌细胞的增殖作用,选取不具有直接抑制细胞增殖效应的药物浓度进行细胞划痕实验,研究苦参碱对HCCLM3癌细胞迁移的影响;Transwell实验研究苦参碱对HCCLM3癌细胞侵袭的抑制影响;实时定量PCR(RT-PCR)和WesternBlot实验研究苦参碱对HCCLM3癌细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(Matrix Metalloprotinase,MMP)-2和MMP-9因子mRNA和蛋白的表达.结果:苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量对HCCLM3癌细胞不产生直接抑制作用(P>0.05);苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量能够抑制HCCLM3癌细胞的迁移和侵袭,且与苦参碱0 mg·mL-1组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);苦参碱4、8、16 mg·mL-1剂量能够减少HCCLM3癌细胞的N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9因子mRNA和蛋白的表达,并增加E-cadherin mRNA和蛋白的表达.结论:苦参碱能够抑制HCCLM3癌细胞的转移和侵袭,其机制可能与抑制细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白以及MMP-2和MMP-9有关.     

丙戊酸钠逆转组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞侵袭转移的体外实验研究

目的探讨丙戊酸钠(VPA)逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制。方法流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化。结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖。VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05)。随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达。结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一。     

低浓度Celecoxib对卵巢癌细胞SKOV3侵袭的抑制作用的研究

目的探讨低浓度环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂Celecoxib对人卵巢癌细胞系SKOV3侵袭的影响及其相关机制。方法10μmol/L Celecoxib作用SKOV3细胞24h后,细胞外基质黏附试验检测细胞黏附能力,Transwell侵袭小室测定细胞的侵袭力,划痕试验检测细胞的迁移能力,明胶酶谱法(Zymography)检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2、MMP-9和E-cadherin的表达;同时利用RNAi技术特异性沉默SKOV3细胞中COX-2的表达,观察上述指标的变化情况。结果10μmol/L Celecoxib作用SKOV3细胞24h后,细胞外基质黏附试验结果表明:SKOV3细胞黏附于matrigel的细胞数明显增加(P<0.05);Transwell侵袭小室实验结果表明:SKOV3细胞穿膜数明显减少(P<0.05),划痕试验结果表明:SKOV3细胞迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05)。进一步探讨机制,Zymography结果显示Celecoxib作用SKOV3细胞后,MMP-2、MMP-9的活性降低,Western blot结果显示MMP-2、MMP-9的表达量降低,而E-cadherin的表达量增强。而经特异性沉默COX-2表达的SKOV3/COX-2i细胞未出现上述分子的变化。结论10μmol/L Celecoxib能够增强SKOV3的黏附力,抑制其侵袭和转移能力,其机制可能与增加E-cadherin的表达,抑制MMP-2、MMP-9的活性和表达有关,而这一过程可能是COX-2非依赖的。