大鼠慢性高眼压视网膜损害相关基因表达谱的研究

目的研究大鼠激光慢性高眼压视网膜损害相关基因表达谱的改变。方法采用5705点的大鼠高密度Oligo基因芯片，对运用532-二极管激光建立大鼠高眼压模型视网膜的基因表达情况进行检测，以对侧眼作为对照。结果通过筛选基因表达谱，得到5277条在大鼠视网膜中有表达的基因，然后采用两两对比组合，从中筛选出了11条差异在2倍以上的基因，其中3奈上调，8条下调。结论在大鼠高眼压模型视网膜中筛选到了11条表达差异〉2倍的基因，可望为青光眼的神经损伤机制及治疗提供新的思路。     

玻璃体视网膜手术后高眼压的临床分析

目的：探讨玻璃体视网膜手术后高眼压发生的原因及处理方法。方法：对280例行玻璃体视网膜手术后患者的眼压观察,了解术后高眼压发生的特点及规律,并做相应的降眼压治疗。结果：280例（280眼）玻璃体视网膜手术后有145例（145眼）术后d1发生高眼压（占51.8%）,98例（98眼）术后3d内高眼压（占35.0%）,36例（36眼）术后1周内高眼压（占12.9%）,1例术后1月复诊时发现高眼压。其中108例（108眼）眼内填充硅油或膨胀气体患者术后3d内发生高眼压的有67例（67眼）,占（62.0%）。结论：玻璃体视网膜手术后发生高眼压多在术后早期,硅油或膨胀气体填充术后高眼压发生率普遍较高,眼压升高幅度也较大。术后高眼压通过药物治疗一般能降低眼压至正常范围,故术后早期监测眼压,对高眼压进行及时处理,能避免高眼压造成的视力损害。     

急性高眼压后大鼠视网膜HO-1表达的变化

目的研究急性高眼压后大鼠视网膜血红素氧合酶-1(HO-1)表达的变化规律,为视网膜损伤后的治疗提供理论依据。方法采用前房灌注加压法制作急性高眼压大鼠模型,运用实时定量逆转录聚合酶链反应方法测定HO-1mRNA的表达情况。结果急性高眼压后1d视网膜HO-1mRNA的表达明显升高且达高峰,3d时表达水平下降,7d时再次升高,14d时继续升高。结论急性高眼压造成视网膜氧化应激损伤可以诱导HO-1表达增高。     

大鼠慢性高眼压模型的构建

目的：探讨构建稳定的大鼠慢性高眼压模型的方法。方法：健康成年Wistar大鼠45只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组,Ⅰ组采用倍频532nm激光在裂隙灯下光凝阻断大鼠右眼1条巩膜上静脉,Ⅱ组阻断右眼2条巩膜上静脉,Ⅲ组阻断右眼3条巩膜上静脉,左眼为对照眼。用Tono—Pen眼压计分别于术后即刻、1h、1d、1周、4周测量眼压,并记录大鼠一般情况。结果：Ⅰ组大鼠术后各时间点右眼眼压与左眼比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,Ⅱ、Ⅲ组术后各时间点大鼠右眼眼压较左眼明显升高（P〈0．05）;术后1周内Ⅲ组大鼠右眼眼压高于Ⅱ组大鼠（P〈0．05）,1周后Ⅱ组和Ⅲ组大鼠右眼眼压差异无统计学意义（P〉0．05）。各组大鼠均未出现角膜、巩膜病变;角膜直径未见明显增大,瞳孔大小未见变化,前房深浅正常。结论：倍频532nm激光阻断2条巩膜上静脉可成功构建长期稳定的大鼠慢性高眼压模型。     

结直肠癌组织的二维荧光差异凝胶电泳分析

目的 以二维荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)技术分析结直肠癌(CRC)组织及正常结直肠组织的蛋白质表达差异.建立二者间的蛋白质表达差异图谱.方法 6对样品分别取自6例CRC手术切除的新鲜的癌和正常肠黏膜组织,进行2-D DIGE,Typhoon~(TM)多功能扫描仪进行图像扫描,并以DeCyder~(TM) 2-D差异分析软件分析.结果 正常肠黏膜组织和癌组织有统计学差异(P<0.05)的表达蛋白点共有315个,癌组织中表达上调(>1.5倍)的有138个,下调(>1.5倍)的有103个.结论 建立了CRC与正常肠黏膜组织的2-D DIGE图谱,发现并经统计学证实癌组织中有表达上调或下调的蛋白存在.     

水通道蛋白-4在急性高眼压大鼠眼组织的表达变化

目的观察急性离眼压时水通道蛋白-4（AQP4）在大鼠眼组织的表达变化,以探讨AQP4与某些眼压畀常性疾病的关系。方法前房加压灌注法制作大鼠急性高眼压模型;应用免疫组化和原位杂交法观察AQP4庭其mRNA在眼组织的表达变化,并进行半定量分析。结果与对照组相比,AQP4及其mRNA在急性高眼压大鼠视网膜上的表达明显增强,主要集中在节细胞层、内核层。结论急性高眼压状态下,AQP4反其mRNA在视网膜上的表达增加,提示AQP4可能参与了高眼压所致视网膜损伤的病理生理过程。     

白细胞介素-1β对慢性高眼压状态下大鼠视网膜的损伤作用

目的：研究慢性高眼压状态下大鼠视网膜中IL-1β表达水平的变化，探讨IL-1β在高眼压状态下对视网膜及节细胞的损伤作用．方法：健康雌性SD大鼠40只，完全随机等分为正常组及慢性高眼压组，用巩膜浅层静脉烧烙法建立慢性高眼压模型．术后即刻、术后30min，1h，12h，1d，1wk，4wk，8wk用TONO-PEN分别测量2组眼压．8wk后处死大鼠，多聚甲醛灌流固定，恒冷箱切片机切片。厚度18μm。贴于明胶玻片．用免疫组织化学的方法观察2组视网膜IL-1的表达及分布．结果：高眼压组术后眼压值维持在4．04kPa左右，IL-1β在正常组视网膜轻度表达，在高眼压组视网膜表达显增强．结论：IL-1β参与了慢性高眼压状态下大鼠视网膜及视网膜节细胞损伤的病理过程。     

玻璃体视网膜手术后糖皮质激素性高眼压临床分析

目的探讨玻璃体视网膜手术后糖皮质激素性高眼压的临床特点及危险因素.方法回顾性分析2002年5月至2005年5月期间来我院眼科玻璃体视网膜手术患者使用糖皮质激素类药物情况及眼压情况.结果 866例全部使用糖皮质激素,其中126例发生糖皮质激素性高眼压,男性89例,女性37例;年龄9～70岁,平均(38.90±15.57) 岁.年轻男性、复杂的玻璃体手术、住院天数、全身和局部使用激素时间、白内障为玻璃体视网膜术后糖皮质激素性高眼压的危险因素.合并近视、高血压、糖尿病等疾病的比例与未发生糖皮质激素性高眼压病例无统计学差异.结论玻璃体视网膜手术患者糖皮质激素性高眼压的发生率为14.55%.眼局部长期大量使用激素是其发生的重要危险因素.     

BDNF对大鼠急性高眼压后视网膜电图的影响

在大鼠玻璃体内注射脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）或正常羊血清（对照），观察对急性高眼压后视网膜电图的影响。急性高眼压后３天，实验组视网膜电图ｂ波恢复程度明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）。提示ＢＤＮＦ能促进急性高眼压后视网膜电生理功能的恢复。     

Oligo基因芯片筛选视网膜慢性高眼压损伤差异表达基因的初步数据分析

目的 采用35 000点的高密度Oligo基因芯片对大鼠慢性高眼压导致视网膜损害的6个时间点(7、35、60、90、180、360 d)的基因表达情况加以研究,探讨慢性高眼压影响下视网膜基因表达改变的情况.方法 将基因分成"活动"基因和"差异"基因:在"活动"基因中,要求6个时间点中最大Ratio值/最小Ratio值的...     

腹水前期处理满足双向凝胶电泳技术的探索

目的用双向凝胶电泳方法分析不同腹水中的蛋白质谱。方法用防止腹水蛋白质降解、去细胞成分、浓缩、去脂、脱盐及去干扰大的白蛋白等腹水的前期处理以满足双向凝胶电泳的条件。结果经2次离心可基本去除腹水细胞成分;用分子量5000的膜包超滤浓缩腹水,可消减腹水蛋白质的浓度差异;去白蛋白前,0.3mg上样量双向电泳图中可检出(421±20)个蛋白质点,去白蛋白后可检出(483±24)个蛋白质点。经上述腹水前期处理后得到较为清晰的双向凝胶电泳图谱。结论腹水前期处理能满足双向凝胶电泳技术的要求,已建立的腹水蛋白双向凝胶电泳技术将为进一步的腹水蛋白质成分研究奠定基础。     

人骨肉瘤蛋白质组双向凝胶电泳图像分析方法的建立与应用

目的： 建立人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法。方法： 组织标本分为骨肉瘤组和肿瘤旁组。对第一向双向电泳的关键因素与环节进行一系列优化。分离骨肉瘤总蛋白，银染，用ImageMasLer 2D Elite 3.01分析软件分析图谱，使用基质辅助电离解析飞行时间质谱仪主要高丰度部分差异蛋白质进行鉴定。结果：获得分辨率和重复性好的双向电泳图谱。变异系数平均值（%）和变异系数范围（%）：骨肉瘤组为23.00±10.11和3.80～6.89，肿瘤旁组为20.33±9.90和2.70～6.89。同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为（8.93±1.17）%、（10.16±2.02）%和（10.87±3.86）%。初步鉴定11个蛋白，其中9个蛋白质只在骨肉瘤中特异高峰度上调表达，分别为转甲状腺素蛋白、磷酸甘油醛异构酶、慢收缩骨骼肌钙蛋白T、心肌钙蛋白、肌动蛋白、肌球蛋白、膜联蛋白-5、 热休克蛋白-1及Fanconi anemia groupD2蛋白；鉴定2个蛋白，锰超氧化物歧化酶、碳酸酐酶蛋白质下调表达。结论：成功构建了用于研究骨肉瘤蛋白质组双向凝胶图谱分析方法，认为初步鉴定的部分差异蛋白可能为骨肉瘤的关联蛋白，其在骨肉瘤发生和进展的病理过程中具有重要作用。     

大肠侧向发育型肿瘤细胞株双向电泳技术成功建立

目的:建立侧向发育型肿瘤细胞(LST)株双向电泳技术.方法:提取LST细胞株总蛋白质,采用不同pH范围IPG胶条进行LST细胞株总蛋白质双向电泳,并对实验步骤进行一系列的调整优化.结果:获得了较为清晰的LST细胞株双向电泳图谱,采用pH 3～10线性IPG胶条分离出1356±43个蛋白质斑点;pH 4～7 IPG胶条两种上样量(250μg和150μg)分别分离出了1285±51和989个蛋白质斑点.结论:通过相关条件的调整优化,成功建立了双向电泳技术,为研究LST特殊性生物学行为相关蛋白质奠定了坚实的基础.     

白念珠菌总蛋白质组二维电泳条件的建立和优化

目的:建立并优化白念珠菌总蛋白质组分析的二维电泳条件.方法:以白念珠菌国际标准菌株SC5314为材料,制备其总蛋白质组样品.以真菌细胞破碎方法、裂解液成分、上样量、固相pH梯度胶条的选择为侧重点,通过不同条件下电泳图谱的比较建立最佳二维电泳技术条件.结果:成功建立白念珠菌总蛋白质制备方法,优化了白念珠菌蛋白质组分析的二维凝胶电泳技术,获得重复性和分辨率都较理想的白念珠菌总蛋白质二维电泳图谱.结论:优化后的二维电泳条件符合白念珠菌的特点,为白念珠菌蛋白质组分析奠定基础.     

持续高眼压状态下的青光眼手术治疗

目的: 探讨持续性高眼压状态下的青光眼行小梁切除术的安全性及临床治疗效果。方法: 对21例24眼持续高眼压的青光眼行小梁切除术,术后观察滤过泡、前房、眼压、视力及并发症。结果: 24眼手术顺利。术后随访2~15个月,眼压控制≤ 21mmHg20眼,局部用药可控制2眼;术后视力提高13眼,术后视力不变6眼。结论: 对持续高眼压状态的青光眼应积极行小梁切除术。只要手术前后处理得当,可以取得满意疗效。     

色素上皮衍生因子在慢性高眼压大鼠视网膜的表达

目的: 探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在大鼠视网膜的表达及其与慢性高眼压视神经损伤的关系.方法: 雌性SD大鼠102只,随机分为实验组G(包括G1 h,G12 h,G1 d,G3 d,G7 d,G14 d,G21 d,G28 d),对照组C(包括C1 h,C12 h,C1 d,C3 d,C7 d,C14 d,C21 d,C28 d) 和空白对照组D,各组均为6只,随机选一只眼为实验眼.应用巩膜浅层静脉烧烙法制作慢性高眼压(elevated intraocular pressure, EIOP)模型,用免疫组织化学染色法观察视网膜各层结构PEDF的表达和变化规律.结果: 免疫组化染色显示,G组术后1 d 大鼠视网膜PEDF染色阳性的细胞增多 (P﹤0.05),并且呈现递增趋势,到7 d 达到高峰(P﹤0.05),并持续至28 d 之后(P﹤0.05),而C和D组视网膜PEDF阳性细胞数量没有显著变化(P﹥0.05).C和D组PEDF阳性细胞主要分布在视网膜的色素上皮层(RPE)、视杆视锥细胞层(PRL)、外界膜(OLM)、外颗粒层(ONL)、内颗粒层(INL)、内网状层(IPL)、神经节细胞层(RGCL)、神经纤维层(RNFL).G组PEDF除了在上述的结构有相同的表达以外,在RGCL,RNFL显著增多.结论: 视网膜PEDF阳性细胞表达的变化与EIOP损伤有一定的时效和空间关系,视网膜PEDF阳性细胞表达的增强可能是EIOP损伤的应激反应.     

上巩膜静脉烙闭合并丝裂霉素C棉片贴敷建立大鼠慢性高眼压模型

目的建立稳定持久的大鼠慢性高眼压模型,为青光眼的各项研究奠定基础。方法雌性SD大鼠20只,随机分为单纯手术组10只,单纯烙闭右眼3支上巩膜静脉;手术加药物组10只,烙闭右眼3支上巩膜静脉合并烙闭处结膜下放置丝裂霉素C棉片;两组左眼均为对照眼。两组于术后分别测术后即刻、术后1h、1d、1、2、4、8周的眼压,并观察两组眼术后局部表现。结果单纯手术组于即刻、术后1h、1d、1、2周眼压均高于对照组（P〈0.05）,术后4周眼压（9.85±1.06）mmHg,8周（9.31±0.85）mmHg,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;手术加药物组于术后即刻、术后1h、1d、1、2、4、8周的眼压均显著高于对照组（P〈0.05）。结论用烙闭上巩膜静脉合并丝裂霉素C棉片贴敷方法制作的慢性高眼压动物模型操作简单,高眼压维持时间较长,成模率高,为较理想的慢性高眼压模型。     

黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及眼压对其保护作用的影响。方法采用烙闭大鼠双眼上巩膜静法制备高眼压大鼠模型,将SD大鼠造模后随机分为假手术组、模型组、黄芪组、点药组、联合组。造模后4周开始干预,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予黄芪(20 g/kg)灌服、降眼压药(贝美前列素)点眼及2种措施同时干预;干预4周后,采用激光共聚焦显微镜定量分析不同组大鼠的RGC数目及凋亡率的差异。结果假手术组RGC数目明显高于其他各组(P0.01),RGC凋亡率明显低于其他各组(P0.01);模型组恰好与假手术组相反;点药组较黄芪组RGC数目多而凋亡率低,但均无显著性差异(P0.05);联合组RGC数目明显高于点药组和黄芪组(P0.05)而凋亡率明显低于此2组(P0.05)。结论黄芪可通过抑制高眼压大鼠RGC凋亡发挥神经保护作用,与降眼压药物联合应用可提高其保护作用。     

血清双向凝胶电泳技术的建立和优化

目的建立起较好及较稳定的的血清双向凝胶电泳技术。方法对血清双向凝胶电泳中血清标本的收集、保存,血清高丰度蛋白的去除,电泳条件,上样量,IPG干胶条的选择及缓冲液的配制等多种条件和技术方法进行调整和优化。结果建立了较稳定和较好重复性的血清双向凝胶电泳技术,分辨率得到一定的提高,有效分离的蛋白质点明显增多,许多低丰度蛋白被分离出来。结论通过不断的摸索和验证,可以建立起较好的血清双向凝胶电泳技术,为进一步的分析、鉴定和寻找与疾病相关的血清蛋白质奠定一定基础。